Faça uma juncao das duas opção Claro! Vamos responder cada uma das perguntas detalhadamente: 1. **Na prova presuntiva de que forma é evidenciada a presença de coliformes? Por que isto acontece?** Na prova presuntiva, a presença de coliformes é evidenciada pela produção de gás em meios de cultura líquidos como o caldo lactose ou caldo lauril sulfato triptose. A formação de bolhas de gás no tubo de Durham, inserido dentro do tubo de ensaio, indica atividade fermentativa dos coliformes na lactose. Isso acontece porque os coliformes são bactérias capazes de fermentar a lactose com produção de gás (geralmente dióxido de carbono) em condições específicas de temperatura e tempo. 2. **Quais as diferenças existentes entre o teste confirmativo para coliformes totais e o confirmativo para coliformes termotolerantes?** - **Teste Confirmativo para Coliformes Totais:** - Utiliza meios como o caldo verde brilhante (VB) ou caldo EC. - Incubação geralmente a 35-37°C. - Confirma a presença de coliformes totais, que incluem várias espécies bacterianas capazes de fermentar lactose. - **Teste Confirmativo para Coliformes Termotolerantes (ou Fecais):** - Utiliza especificamente o caldo EC. - Incubação a 44,5°C. - Destina-se a confirmar a presença de coliformes fecais, principalmente *Escherichia coli*, que são indicativos de contaminação fecal recente. 3. **Na análise final de água de um sistema de distribuição os resultados foram: 6 tubos positivos no teste confirmativo nos caldos VB e EC. Qual foi o NMP/100 mL e o significado deste resultado para cada um dos testes? O que seria necessário para afirmar a presença de E. coli?** - Com base na tabela fornecida, 6 tubos positivos correspondem a um NMP de 9,2 por 100 mL. - **Significado:** - Para o caldo VB, isso indica a presença de coliformes totais na amostra de água. - Para o caldo EC, isso sugere a presença de coliformes termotolerantes, indicando possível contaminação fecal. - Para afirmar a presença de *E. coli*, seria necessário realizar um teste adicional, como o uso de meios específicos que detectam enzimas características da *E. coli* (por exemplo, a β-glucuronidase), ou aplicar métodos moleculares para identificação precisa. 4. **Descreva o método fluorogênico/cromogênico (método rápido) de análise para coliformes totais e para a E. coli. Descreva o princípio do método e a forma de interpretação.** - **Princípio do Método:** - Este método utiliza substratos que liberam compostos fluorescentes ou cromogênicos quando metabolizados por enzimas específicas presentes nos coliformes totais e na *E. coli*. - Para coliformes totais, o substrato detecta a enzima β-galactosidase. - Para *E. coli*, o substrato detecta a enzima β-glucuronidase. - **Interpretação:** - Após a incubação, a presença de coloração ou fluorescência específica indica a presença de coliformes totais ou de *E. coli*. - A fluorescência azul sob luz UV geralmente indica *E. coli*, enquanto a mudança de cor visível pode indicar coliformes totais. Este método é rápido e permite a detecção simultânea de coliformes totais e *E. coli* em menos tempo comparado aos métodos tradicionais. segunda opção Aqui está uma resposta detalhada e aprofundada para cada questão sobre a análise de NMP (Número Mais Provável) para coliformes em água: 1. Na prova presuntiva de que forma é evidenciada a presença de coliformes? Por que isto acontece? A prova presuntiva para coliformes é baseada na capacidade dessas bactérias de fermentar a lactose, produzindo ácidos e gás como subprodutos metabólicos. A presença de coliformes é evidenciada por: • Turbidez do meio de cultura, indicando crescimento bacteriano. • Produção de gás na campânula de Durham, dentro do tubo de ensaio. • Mudança de cor do indicador de pH presente no meio, devido à acidificação causada pela fermentação da lactose. Por que isso acontece? Coliformes, incluindo Escherichia coli, possuem a enzima β-galactosidase, que degrada a lactose em glicose e galactose. A glicose entra na via glicolítica e, na ausência de oxigênio, é fermentada, produzindo ácidos orgânicos e gás (principalmente CO₂ e H₂). Esse fenômeno permite a identificação indireta desses microrganismos. Os meios mais utilizados para a prova presuntiva incluem: • Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST): Contém lactose e Lauril Sulfato de Sódio, um detergente seletivo que inibe o crescimento de bactérias não coliformes. • Caldo Lactose Vermelho de Fenol: Contém vermelho de fenol como indicador de pH, tornando-se amarelo em presença de ácidos. Caso haja formação de gás e acidificação do meio, considera-se a amostra presuntivamente positiva para coliformes, e ela deve seguir para o teste confirmativo. 2. Quais as diferenças existentes entre o teste confirmativo para coliformes totais e o confirmativo para coliformes termotolerantes? Coliformes Totais O teste confirmativo para coliformes totais é realizado transferindo uma alíquota do meio presuntivo positivo para o Caldo Verde Brilhante (VB), incubado a 35–37°C por 24–48 horas. O crescimento bacteriano e a produção de gás indicam a presença de coliformes totais, que podem incluir bactérias de origem fecal e ambiental. • O Caldo VB contém verde brilhante e bile oxgálica, que inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas, selecionando coliformes. Coliformes Termotolerantes O teste confirmativo para coliformes termotolerantes (subgrupo dos coliformes totais, incluindo E. coli) consiste na inoculação de uma amostra em Caldo EC, incubado a 44,5°C por 24 horas. A presença de gás confirma a presença de coliformes termotolerantes, um indicador mais confiável de contaminação fecal. • O Caldo EC contém sais biliares que inibem microrganismos não entéricos e permite apenas o crescimento de coliformes resistentes a temperaturas elevadas. Diferenças principais Característica Coliformes Totais (Caldo VB) Coliformes Termotolerantes (Caldo EC) Grupo identificado Coliformes totais (ambiente + fecais) Coliformes termotolerantes (principalmente fecais) Meio utilizado Caldo Verde Brilhante (VB) Caldo EC Temperatura de incubação 35–37°C 44,5°C Tempo de incubação 24–48h 24h Indica contaminação fecal? Pode indicar, mas também inclui coliformes ambientais Sim, é um indicador mais específico de contaminação fecal Se o resultado for positivo no Caldo EC, o próximo passo é confirmar a presença de Escherichia coli. 3. Na análise final de água de um sistema de distribuição os resultados foram: 6 tubos positivos no teste confirmativo nos caldos VB e EC. Qual foi o NMP/100 mL e o significado deste resultado para cada um dos testes? O que seria necessário para afirmar a presença de E. coli? Cálculo do NMP/100 mL Com base na Tabela NMP-3, para 6 tubos positivos, o NMP/100 mL é 6,9, com intervalo de confiança entre 3,1 e 15. Significado dos resultados • 6 tubos positivos no Caldo VB (coliformes totais): Indica a presença de coliformes totais, sugerindo contaminação ambiental ou fecal. Água de boa qualidade deve ter 0 coliformes totais por 100 mL. • 6 tubos positivos no Caldo EC (coliformes termotolerantes): Confirma a presença de coliformes termotolerantes, sugerindo contaminação fecal recente. Confirmação de E. coli Para confirmar a presença de Escherichia coli, é necessário um teste adicional, como: • Método fluorogênico/cromogênico (método rápido). • Provas bioquímicas (IMViC): E. coli é *Indol (+), Vermelho de Metila (+), Voges-Proskauer (-), Citrato (-). Se E. coli for detectada, a água é considerada imprópria para consumo humano. 4. Método fluorogênico/cromogênico para coliformes totais e E. coli O método fluorogênico/cromogênico permite detecção rápida (24h) de coliformes totais e E. coli, sem necessidade de incubação em meios seletivos. Princípio do Método Este método usa substratos que reagem com enzimas específicas produzidas por coliformes e E. coli, gerando uma mudança de cor (cromogênico) ou fluorescência (fluorogênico). • Coliformes totais: possuem a enzima β-galactosidase, que hidrolisa substratos cromogênicos (exemplo: ONPG – orto-nitrofenil-β-galactopiranosídeo), resultando em coloração amarela. • Escherichia coli: produz β-glucuronidase, que hidrolisa substratos fluorogênicos (exemplo: MUG – 4-metilumbeliferil-β-D-glucuronida), emitindo fluorescência azul sob luz UV. Interpretação dos Resultados Resultado Significado Meio amarelado Coliformes totais presentes Fluorescência azul sob UV Confirma E. coli Sem alteração de cor ou fluorescência Resultado negativo Este método é amplamente utilizado devido à rapidez e confiabilidade, sendo uma alternativa moderna ao método clássico de NMP. Conclusão • O método do NMP é eficiente para a detecção de coliformes totais e termotolerantes. • A presença de E. coli indica contaminação fecal, tornando a água imprópria para consumo. • O método fluorogênico/cromogênico oferece uma abordagem mais rápida e específica para monitoramento microbiológico. Se precisar de mais esclarecimentos