PRATIQUE
5. Um fragmento de DNA foi sequenciado pelo método Sanger,
e o resultado do sequenciamento aparece na figura ao lado:
a) Qual é o tamanho do fragmento (em quantidade de bases)
obtido em cada uma das preparações?

b) Explique a razão de terem sido obtidos esses fragmentos.

c) Qual é a sequência de nucleotídeos do fragmento estudado?

d) No esquema abaixo, represente como ficaria, pelo método Sanger, o padrão de bandagens do
sequenciamento desta sequência de nucleotídeos:
АААСТАТСТТСТCTAGGATCTAAGACATCGACAGTCCTGTGTGG
30-
25-
20-
15-
10

5-
45-
40-
35-
30-
25-
20-
15-
10-
5-
A
T
C
G

Question

PRATIQUE
5. Um fragmento de DNA foi sequenciado pelo método Sanger,
e o resultado do sequenciamento aparece na figura ao lado:
a) Qual é o tamanho do fragmento (em quantidade de bases)
obtido em cada uma das preparações?

b) Explique a razão de terem sido obtidos esses fragmentos.

c) Qual é a sequência de nucleotídeos do fragmento estudado?

d) No esquema abaixo, represente como ficaria, pelo método Sanger, o padrão de bandagens do
sequenciamento desta sequência de nucleotídeos:
АААСТАТСТТСТCTAGGATCTAAGACATCGACAGTCCTGTGTGG
30-
25-
20-
15-
10

5-
45-
40-
35-
30-
25-
20-
15-
10-
5-
A
T
C
G

Accepted Answer

Aqui estão as respostas para as perguntas sobre o sequenciamento de DNA pelo método Sanger:

a) O tamanho do fragmento obtido em cada uma das preparações é de aproximadamente 28 bases. Isso pode ser determinado contando o número de bandas visíveis na figura.

b) Os fragmentos são obtidos devido à incorporação aleatória de didesoxinucleotídeos (ddNTPs) durante a síntese de DNA. Os ddNTPs são análogos dos nucleotídeos normais, mas carecem do grupo 3'-OH necessário para a formação de uma ligação fosfodiéster subsequente. Quando um ddNTP é incorporado em uma cadeia de DNA em crescimento, a síntese é interrompida naquele ponto, resultando em fragmentos de diferentes comprimentos.

c) A sequência de nucleotídeos do fragmento estudado é determinada lendo as bandas da parte inferior para a parte superior do gel, anotando a base correspondente a cada banda. Com base na figura, a sequência é aproximadamente:
$$
5'-G C G T A C G A T C G A T C A G G T A T A -3'
$$

d) Para representar o padrão de bandagens do sequenciamento da sequência de nucleotídeos dada (AAACTATCTTCTCTAGGATCTAAGACATCGACAGTCCTGTGTGG) no esquema, você deve marcar a posição de cada nucleotídeo em cada uma das quatro colunas (A, T, C, G) com base na sequência. Por exemplo, a primeira base é A, então você marcaria a posição 1 na coluna A. A segunda base também é A, então você marcaria a posição 2 na coluna A, e assim por diante.

PRATIQUE 5. Um fragmento de DNA foi sequenciado pelo método ...

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