Proteínas recombinantes são produzidas por meio de técnicas ...

Proteínas recombinantes são produzidas por meio de técnicas de clonagem molecular, nas quais genes específicos são inseridos em organismos hospedeiros, como bactérias ou células de mamíferos. Essas proteínas têm diversas aplicações, desde a produção de medicamentos (como insulina) até a degradação de substâncias em processos industriais. Na biologia sintética, as proteínas recombinantes desempenham um papel fundamental na criação de sistemas biológicos personalizados e inovadores. A expressão de proteínas recombinantes em microrganismos, como Escherichia coli (E. coli), envolve vários passos. Primeiro, um plasmídeo é construído para codificar a proteína desejada, e esse plasmídeo é introduzido nas células hospedeiras de E. coli. As células são cultivadas em condições otimizadas para o crescimento e, em seguida, induzidas a expressar a proteína. Após o crescimento, as células são rompidas para liberar a proteína recombinante do interior celular, e em seguida são centrifugadas para separar a fração solúvel (sobrenadante) e a insolúvel (pellet).

A presença da proteína é verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio) que é uma técnica comumente usada em laboratórios de genética, biotecnologia, bioquímica e biologia molecular para separar proteínas de uma amostra mista de acordo com seus pesos moleculares. O gel de poliacrilamida é uma matriz porosa que atua como um filtro, permitindo que as proteínas migrem através dele em direção ao pólo positivo de um campo elétrico (Figura 13a).

a.

b.

Figura 13. Gel de poliacrilamida com SDS-PAGE. a) Esquema representativo de uma eletroforese em gel de poliacrilamida para a separação de proteínas de diferentes pesos moleculares. PM, Peso Molecular. b) Foto do gel de poliacrilamida com SDS-PAGE das proteínas recombinantes A e B. MW = peso molecular em Kda; NI = não induzida, célula onde a proteína recombinante não foi sintetizada; LT = lisado total, extrato das células que foram rompidas antes de centrifugar; S = sobrenadante; P = pellet. Ilustração retirada de Western Blotting: Análise de Proteínas | Kasvi.

Aprenda mais sobre como interpretar géis de poliacrilamida, artigo do LabXchange.

Considerando um caso onde duas proteínas recombinantes (Proteína A e B) estão sendo analisadas em um gel de SDS-PAGE (Figura 13b), foram feitas as seguintes afirmações:

i. A proteína B possui um peso molecular próximo a 15 Kda.

ii. A proteína A aparenta ter expressado menos que a proteína B.

iii. A proteína A aparenta ter um peso molecular de exatamente 25 Kda.

iv. A proteína A está majoritariamente na fração solúvel.

v. A proteína B está majoritariamente na fração insolúvel.

Quais das afirmações feitas são verdadeiras?

GLOSSÁRIO:

Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE): Técnica de separação de proteínas com base em seu tamanho e carga.

Marcador molecular (Mw): Conjunto de proteínas de tamanhos conhecidos que servem como referência para determinar o tamanho das proteínas nas amostras.

Banda: Faixa visível no gel de poliacrilamida que corresponde a uma proteína específica.

Proteínas: Moléculas complexas essenciais para a vida, desempenhando uma grande variedade de funções nos organismos vivos.

CRÉDITO: Questão enviada pelo OSIRIS-RIO-UFRJ e modificada pela banca da OBBS.

Alternativas i, ii e iv

ii e iii

iii e v

i e iv

iv e v

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