Avaliação Genética da Pelagem de Cães da Raça Dalmata

Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 33 Email claudiooliveirafateneedubr AVALIAÇÃO GENÉTICA DA PELAGEM DE CÃES DA RAÇA DÁLMATA Genetic evaluation of the coat of dogs of the dalmatian breed Patrícia Albuquerque SANTIAGO1 Rachel Fradique Accioly MAGALHÃES3 Ticiana Monteiro ABREU2 Anderson Pinto ALMEIDA3 Cláudio Henrique de Almeida OLIVEIRA3 1Médica Veterinária autônoma Fortaleza CE 2Universidade Federal do Ceará Depto de Patologia e Medicina Legal 3Faculdade Terra Nordeste Rua Coronel Correia1119 Soledade Caucaia Ce CEP61600000 Email claudiooliveirafateneedubr RESUMO A raça Dálmata é uma das raças mais populares e de acordo com seu padrão racial deve apresentar cor de pelagem branca com pintas pretas ou fígado Vários loci estão envolvidos na determinação da cor da pelagem dos cães No Dálmata os principais são o locus B e o locus E pois esses lócus têm influência um sobre o outro causando uma interação gênica chamada epistasia onde o efeito de um gene modifica o efeito de outro alterando o fenótipo do animal Com o avanço da cinofilia o melhoramento genético em cães se tornou mais importante tornando o conhecimento desses genes uma ferramenta necessária para os criadores O objetivo deste trabalho foi demonstrar a importância do teste genético para o gene E e seu auxílio no planejamento de acasalamento nos canis de Dálmatas Para isso foi usada uma ninhada nascida em Fortaleza na qual foram realizados testes genéticos para o gene E do padreador de pintas pretas e de dois filhotes escolhidos aleatoriamente um preto e um limão O teste foi realizado através da técnica de PCR e como resultado foi visto que o pai é heterozigoto Ee Já em relação as crias foi confirmado o homozigoto dominante EE para a cria dentro do padrão e o homozigoto recessivo ee para a cria limão Nesta cria ocorreu a epistasia fazendo com que apresentasse pintas alaranjadas Assim concluise que não se pode definir o genótipo apenas pelo fenótipo tornando o teste genético uma importante ferramenta para escolha dos padreadores Palavraschave Teste genético locus E epistasia ABSTRACT The Dalmatian breed is one of the most popular breeds and according to its racial pattern should have a white coat color with black spots or liver Several loci are involved in determining the coat color of dogs In the Dalmatian the major are the locus B and the locus E because these locus have influence on each other causing a genetic interaction called epistasis where the effect of one gene modifies the effect of another altering the phenotype of the animal With the advancement of cynophilia genetic improvement in dogs has become more important making knowledge of these genes a necessary tool for breeders The objective of this work was to demonstrate the importance of the genetic test for gene E and its aid in the planning of mating in dalmatians kennels For this a litter born in Fortaleza was used in which genetic tests were performed for the E gene of the blackspotted and two randomly selected puppies one black and one lemon The test was performed using the PCR technique and as a result it was seen that the parent is heterozygous Ee In relation to the offspring the dominant homozygous EE was created for the offspring and the recessive homozygote ee for the offspring In this breed epistasis occurred causing it to present Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 34 Email claudiooliveirafateneedubr orange spots Thus it can be concluded that the genotype can not be defined only by the phenotype making the genetic test an important tool for the selection of stud holders Keywords Genetic testing locus E epistasis INTRODUÇÃO A raça Dálmata é muito famosa na história da humanidade e no cinema mundial Segundo a Federação Cinológica Internacional FCI 2011 a raça foi encontrada em pinturas entre o século XVI e XVII mas as primeiras descrições foram encontradas apenas em 1719 em crônicas de igrejas da Croácia O primeiro padrão não oficial da raça foi descrito em 1882 por Vero Shaw e em 1890 esse padrão foi descrito como o oficial da raça enfim em 1955 foi publicado pela FCI o primeiro padrão oficial da raça Dálmata Esse padrão define que a pelagem deve ter como cor básica o branco puro com variedades com pintas pretas e variedades fígado que apresentam pintas marrons Nesta raça é classificada como falta desqualificante cães com pintas laranja ou limão CROATIAN KENNEL CLUB 2016 por isso há uma importância em se conhecer os mecanismos genéticos que determinam a cor da pelagem na raça É sabido que vários loci local onde encontramos um determinado gene estão envolvidos na determinação da pelagem dos cães dentre eles no Dálmata os principais são o locus B e o locus E porque esses lócus têm influência um sobre o outro na determinação da cor da pelagem causando uma interação de genes não alélicos conhecida como epistasia Na epistasia o efeito de um gene modifica o efeito do outro gene mudando assim o fenótipo do animal OTTO 2012 O locus B contém o gene proteína 1 relacionada a tirosinase TYRP1 localizado no 11º par de cromossomos NCBI 2019 que é responsável pela concentração de eumelanina que determina a pigmentação na cor preta ou fígado TURNOVA et al 2017 O cão homozigoto dominante ou heterozigoto apresentará pigmentação preta e o cão homozigoto recessivo apresentará pigmentação marrom O gene TYRP1 fornece instruções para a produção da tirosinase nos melanocitos este gene está envolvido na produção de melanina e embora suas funções exatas não sejam claras estudos sugerem que esta enzima pode ajudar a estabilizar a tirosinase que é a enzima responsável pelo primeiro passo na produção da melanina GENETICS 2019 O locus E contém o gene receptor de melano cortina 1 MC1R localizado no 5º par de cromossomos NCBI 2019 é responsável pela concentração de feomelanina que confere a pigmentação amareladaavermelhada O seu gene dominante remove a feomelanina deixando a pigmentação da eumelanina uniforme no animal já seu gene recessivo em homozigose restringe as áreas de eumelanina a regiões especificas como íris lábios nariz unhas e coxins fazendo com que no pelo o animal apresente a cor alaranjada OTTO 2012 O MC1R se localiza na superfície dos melanócitos quando o hormônio melanocortina 1 se liga a seu receptor a produção de tirosinase aumenta Níveis altos de tirosinase resultam na produção de eumelanina já níveis baixos na produção de feomelanina Assim as células que produzem feomelanina são aquelas que têm o receptor MC1R com defeito OTTO 2012 que é o caso do locus E Quando tal fato acontece o Dálmata é considerado limão ou laranja e essa Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 35 Email claudiooliveirafateneedubr nomenclatura varia dependendo da cor de eumelanina manifestada nessas áreas se vai ser preto ou marrom respectivamente Nesse caso eles são considerados fora do padrão diferentemente de outras raças como Labrador Pointer e Setter inglês por exemplo onde essas variações são aceitas Na epistasia temos um par de genes gene E que inibe o efeito de outro chamado epistático e um par de genes gene B que será inibido chamado de gene hipostático Durante a formação dos gametas esses genes são herdados independentemente um do outro KLUG et al 2010 e como o resultado dessa interação só aparece fenotipicamente quando o gene epistático encontrase em homozigose recessiva muitos cães fenotipicamente dentro do padrão racial podem ser portadores do alelo recessivo então não podemos garantir que um Dálmata preto ou marrom não carregue o alelo e só pela cor que ele apresenta Com o avanço da cinofilia mundial ficou cada vez mais importante o melhoramento genético em cães de raça para se obter sempre um filhote geneticamente superior aos seus pais por isso o conhecimento desses genes é uma importante ferramenta para que os criadores consigam manter o padrão racial Entretanto como foi visto apenas a observação do fenótipo não é um método garantido de definição do genótipo do animal sendo muito importante a realização de exames genéticos no plantel para saber se os cães carregam o alelo que traria uma cor fora do padrão da raça Para a identificação da epistasia algumas técnicas laboratoriais podem ser empregadas como reação em cadeia da polimerase PCR análise de fragmentos eletroforese capilar seqüenciamento de DNA ELISA recombinante dentre outros ANIMAL GENETICS 2019 Assim o objetivo deste trabalho foi demonstrar a importância da avaliação do teste genético para o gene epistático gene E e seu auxílio no planejamento de acasalamento nos canis de Dálmatas ATENDIMENTO AO PACIENTE Em 18 de julho de 2018 nasceu no canil Dalsfort localizado em Fortaleza uma ninhada de 12 filhotes de Dálmatas O acasalamento foi feito entre dois cães de pintas pretas fenotipicamente dentro do padrão racial o macho de 3 anos de idade e a fêmea de 4 anos de idade Fig 01 Todos os filhotes nasceram saudáveis e se desenvolveram de forma normal Os filhotes nascem todos brancos as pintas só surgem com aproximadamente duas semanas de vida e nessa época foi observado que dez filhotes apresentaram pintas pretas e um tempo depois os outros dois apresentaram pintas na cor laranja caracterizando o Dálmata limão pois as áreas de eumelanina eram pretas Figura 01 Pais da ninhada A Fêmea B Macho Fonte Canil Dalsfort A 2015 B 2018 A B Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 36 Email claudiooliveirafateneedubr A fêmea havia feito o teste genético portanto era sabido que ela tinha gene Ee ou seja carrega o alelo responsável pela cor do pelo laranja e poderia passar um ou outro alelo para qualquer filho Porém o genótipo do macho não era conhecido Então para confirmação do mecanismo de epistasia foi realizado o teste genético no pai da ninhada e em dois filhotes escolhidos ao acaso sendo um macho de pintas pretas e uma fêmea de pintas laranjas ambos com 5 meses de vida Antes de realizar a coleta os cães tiveram que ficar em jejum hídrico e alimentar por uma hora para não contaminar a amostra Após isso foi realizada a coleta com um swab fazendo movimentos entre a bochecha e a gengiva de cada cão por 10 a 15 segundos Fig 02 Figura 02 Coleta de amostra de saliva para teste genético Fonte Próprio autor 2018 Logo após este procedimento o swab com a amostra foi colocado de volta em sua própria embalagem e deixado para secar em temperatura ambiente por aproximadamente 15 minutos Após o período de secagem o envelope foi grampeado e anexado à ficha de requisição de teste de cada cão Não existe a necessidade de congelamento ou resfriamento das amostras Para realização do teste genético através da técnica de reação em cadeia da polimerase PCR as amostras foram enviadas em duplicatas para o laboratório Animals Genetics Inc localizado na Inglaterra Vale ressaltar que o laboratório não fornece detalhes sobre o procedimento realizado nem quais os parâmetros e marcadores utilizados Porém geralmente a técnica é usada para obter várias cópias de uma sequência especifica de DNA essa reação ocorre em três fases desnaturação anelamento e extensão a temperatura na qual cada um dos passos ocorre é diferente Após esse processo é feito uma eletroforese em gel de agarose e a partir disso poderá ser observado o genótipo do animal Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 37 Email claudiooliveirafateneedubr RESULTADOS E DISCUSSÃO No teste genético do padreador foi constatado o genótipo heterozigoto Ee para o gene MC1R Isso significa que ele possui alelo recessivo e promovendo a possibilidade de ter crias limão caso doe este alelo junto com a mãe Cada filhote recebe um alelo da mãe e o outro do pai como os dois são heterozigotos para o gene E os filhotes podem receber E ou e de cada um deles e então os filhotes dessa ninhada podem ser homozigotos dominante EE heterozigotos Ee ou homozigotos recessivos ee Dos filhotes escolhidos para a realização do teste o de pintas pretas apresentou homozigose dominante EE e a de pintas laranja apresentou homozigose recessiva ee Tab 01 Tabela 01 Resultado do teste genético para o gene epistático gene E do padreador e dos filhotes Nome do cão Raça Locus E Padreador Dálmata Ee Macho pintas petras Dálmata EE Fêmea pintas laranjas Dálmata ee Fonte Próprio Autor 2019 Quando esse padreador foi acasalado com a matriz que apresentava o mesmo genótipo foi estimado uma probabilidade de 75 de nascimento de filhotes branco com preto BEE ou BEe para 25 de filhotes laranja Bee como podemos observar no quadro abaixo Tab 02 Tabela 02 Estimativas dos genótipos da progênie resultada do acasalamento entre Whitecap Limited Edition BbEe e Dalsfort Shield Maiden BBEe raça Dálmata do canil Dalsfort Pai Mãe BE Be bE be BE BBEE preto BBEe preto BbEE preto BbEe preto Be BBEe preto BBee laranja BbEe preto Bbee laranja BE BBEE preto BBEe preto BbEE preto BbEe preto Be BBEe preto BBee laranja BbEe preto Bbee laranja Fonte elaborado pelo autor 2019 Após a gestação a fêmea pariu 12 crias Fig 3A Quando as pintas começaram a surgir foi observado que em dez dos doze 1012 filhotes as pintas pretas já estavam aparecendo mas dois 212 deles ainda estavam brancos Fig 3B C e D Porém todos tinham nariz íris e lábios pigmentados na cor preta então a suspeita foi que os dois filhotes apresentariam pintas na cor laranja caracterizando o que chamamos de Dálmata limão Nesse estudo a proporção de fenótipos observados na ninhada foi de 83 de filhotes branco com preto BEE ou BEe e 17 de filhotes laranja Bee bem Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 38 Email claudiooliveirafateneedubr próximo da estimativa determinada pelo quadro de punnett Figura 03 A Ninhada com 3 dias de vida B Ninhada com 2 semanas onde 10 filhotes já apresentam pintas pretas e dois ainda estavam brancos C Filhote cor limão ainda sem pintas mas apresentando pigmentação no nariz D Filhote com pintas pretas Fonte Canil Dalsfort 2018 Com 20 dias de vida as pintas na cor laranja começaram a aparecer Fig 4A e aos 40 dias de vida elas já eram bem definidas e pigmentadas Fig 4B Como os pais e os outros filhotes apresentam pintas pretas foi constatado que nesses dois filhotes aconteceu a interação genética chamada de epistasia Figura 04 A Filhotes com 24 dias de vida B Filhotes com 42 dias de vida já apresentam pintas bem definidas Fonte Canil Dalsfort 2018 Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 39 Email claudiooliveirafateneedubr Os fenótipos frequentemente são afetados por mais de um gene ou seja vários genes influem em uma característica particular isso é chamado interação gênica Na epistasia o efeito de um gene ou um par de genes dissimula ou modifica o efeito de outro gene ou de outro par gênico A presença de um alelo recessivo em homozigose pode impedir ou suprimir a expressão de outros alelos em outro loci KLUG et al 2010 A epistasia pode operar em qualquer cruzamento que envolva dois ou mais genes e pode ser reconhecida pela redução do número de fenótipos esperados BURNS e BOTTINO 2014 Neste estudo foi observada uma redução do número de fenótipos esperados pois o esperado era uma ninhada toda dentro do padrão racial porem dois filhotes apresentaram fenótipos indesejados corroborando com o descrito pelos autores Klug 2010 e Burns e Bottino 2014 A distribuição independente de genes trata quando duas ou mais heranças monogênicas são analisadas simultaneamente e em nenhuma outra área esses princípios foram mais importantes do que no cruzamento de animais pois o que se quer em uma linhagem é conseguir um genótipo verdadeiramente superior GRIFFITHS et al 2013 ou seja o que se deseja é obter filhotes que não sejam portadores de alelos que podem trazer uma cor indesejada Como durante a formação dos gametas os pares de genes se dividem independentemente um do outro a probabilidade do animal receber o alelo B ou b não é influenciada pela probabilidade dele receber E ou e No teste do filhote laranja foi visto que ela apresenta o gene E em homozigose recessiva ee o que leva a filhote não apresentar as características do gene B fazendo com que ela apresente a cor preta apenas em áreas restritas Este padrão de cor de pelagem não é aceito para raça Dálmata segundo a Federação Cinológica Internacional A cor do pelo é branco puro com variedade de pintas pretas ou variedade de pintas marrons fígado a presença de uma terceira cor não é permitida manchas cor limão ou laranja não são permitidas e devem ser desqualificadas SAVEZ 2016 Já o filhote de pintas pretas apresenta homozigose dominante EE para o gene E apresentando as características marcantes do gene B e não carrega o alelo recessivo do gene E Então mesmo que ele acasale com uma fêmea heterozigota para o gene E todos os seus filhotes apresentarão a pigmentação determinada pelo gene B como pode ser visualizado na Tab 03 Tabela 04 Estimativa de genótipos relacionado ao lócus E caso o filhote Dalsfort Jamie Fraser EE acasale com uma fêmea heterozigota para o alelo E Pai Mãe E E E EE EE e Ee Ee Fonte elaborado pelo autor 2019 Genotipicamente 50 dos filhotes serão livres do alelo e e os outros 50 serão portadores porém todos apresentando a cor determinada pelo lócus B que são cores aceitas pelo padrão racial Se levarmos em consideração que o filhote macho de pintas pretas tem características estruturais e temperamento dentro do padrão racial e já conquistou titulo Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 40 Email claudiooliveirafateneedubr de 3º melhor do show inicial na 114ª exposição panamericana realizada pelo Kennel Clube do Estado do Ceará Fig 05 com essa carga genética ele será um possível padreador de maior valor genético e cinófilo visto que todos seus descendentes apresentarão cores dentro do padrão racial Diferentemente do seu pai que apesar de ser fenotipicamente dentro do padrão produziu crias de cores indesejadas Figura 05 Dalsfort Jamie Fraser conquistou o titulo de 3º melhor do show da sua classe em sua primeira exposição de beleza e estrutura na 114ª exposição panamericana realizada pelo Kennel Clube do Estado do Ceará Fonte Cedida pelo proprietário 2018 CONCLUSÃO Diante disso podese concluir que o teste genético se faz uma importante ferramenta na hora de escolher a matriz e padreador de uma ninhada para que nasçam cães fenotipicamente dentro do padrão e o mais genotipicamente correto possível já que com a seleção dos padreadores a porcentagem de cães homozigotos dominante para o gene E tende a aumentar pois seriam acasalados apenas cães EE x EE ou EE x Ee para que não tenham filhotes fora do padrão racial REFERÊNCIAS BURNS GW BOTTINO PJ Genética 6a ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2014 381p CROATIAN KENNEL CLUB Dalmatinski pas Disponível em httpwwwfcibeNomenclatureEducation153g06PREenpdf Acesso em 28 maio 2019 FEDERATION CYNOLOGIQUE INTERNATIONALE Dalmatian Disponível em httpwwwfcibeNomenclatureStandards153g06enpdf Acesso em 28 de maio 2019 GENETICS HOME REFERENCE Tyrosinase related protein 1 Disponível em httpsghrnlmnihgovgeneTYRP1sourcesforpage Acesso em 28 maio 2019 GRIFFITHS AJF LEWONTIN RC CARROL SB WESSLER SR Introdução à genética 10ª ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2013 710p Ciência Animal v30 n2 p3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE 41 Email claudiooliveirafateneedubr INFORMATION National Center for Biotechnology MC1R Canis lupus familiaris Disponívelhttpswwwncbinlmnihgovgenomegdvbrowsercontextnucleotideacc N M0010142822 Acesso em 03 jul 2019 INFORMATION National Center for Biotechnology Tyrosinase related protein1 Canis lupus familiaris dog Disponível em httpswwwncbinlmnihgovgenetermCanislupusfamiliarisTYRP1 Acesso em 03 jul 2019 KLUG WS CUMMINGS MR SPENCER CA PALLADINO MA Conceitos de genética 9ª ed Porto Alegre Artmed 2010 863p OTTO PG Genética básica para veterinária 5ª ed São Paulo Roca 2012 322p RAY K SENGUPTA M GHOSH S TYRP1 tyrosinaserelated protein 1 Atlas of Genetics and Cytogenetics Oncology and Haematology v21 n1 p12 2017 SILVA DIAS RJ Epistasia para a produção de grãos e caracteres da planta em milho 2011 99p Tese de Doutorado em Genética e Melhoramento de Plantas Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz Piracicaba SP 2011 TURNOVA EH MAJCHRAKOVA Z BIELIKOVA M SOLTYS K TURNA J DUDAS A A novel mutation in the TYRP1 gene associated with brown coat colour in the Australian Shepherd Dog Breed Animal Genetics v48 n5 p626627 2017 LOGOSÍMBOLO DA FACULDADEESCOLA Nome da faculdadeescola NOME COMPLETO DO ESTUDANTE Título do trabalho ou nome de conteúdo mais abrangente Cidade 2024 Resenha crítica de artigo Trabalho apresentado ao FACULDADEESCOLA como parte da matéria NOME DA DISCIPLINA Cidade 2024 SUMÁRIO Resenha crítica4 Referências bibliograficas5 4 Resenha crítica O artigo Avaliação Genética da Pelagem de Cães da Raça Dálmata aborda a importância da análise genética para a determinação da cor da pelagem em dálmatas uma característica vital para a conformidade com os padrões raciais Em 1995 foi publicado pela Federação Cinológica Internacional o primeiro padrão oficial da raça que consiste no branco puro como cor básica com variadas pintas pretas e fígado marrons além de desqualificar pintas laranja ou limão A pesquisa se concentra nos loci B e E cujas interações epistáticas influenciam diretamente o fenótipo da pelagem ou seja ocorre uma epistasia interação gênica em que um lócus têm influência um sobre o outro alterando o fenótipo expresso O locus B é responsável pela concentração de eumelanina que determina a pigmentação na cor preta ou fígado de forma que o homozigoto dominante apresentará cor preta enquanto o recessivo possuirá pintas marrons O locus E é responsável pela concentração de feomelanina que induz uma pigmentação amareladaavermelhada seu gene dominante remove a eumelanina enquanto o recessivo a restringe a regiões específicas fazendo com que o pelo do animal possua uma cor alaranjada o que os torna fora do padrão aceito para a raça Com isso o principal objetivo do artigo é demonstrar a importância da avaliação genética do gene epistático gene E para o planejamento de acasalamentos nos canis de dálmatas visto que o resultado da interação só se manifesta no fenótipo quando o gene epistático está em homozigose recessiva e muitos cães que parecem estar dentro do padrão racial podem ser portadores do alelo recessivo A pesquisa utiliza uma ninhada nascida em Fortaleza como estudo de caso para ilustrar a aplicação prática dessa metodologia onde se utilizaram testes genéticos com a técnica PCR para identificar os genótipos do gene E O fenótipo dos genitores era o padrão oficial de Dálmatas branco com pintas pretasmarrons e a fêmea já havia realizado um teste genético com gene Ee logo a análise envolveu o pai da ninhada e dois filhotes selecionados aleatoriamente Os resultados mostraram que o padreador era heterozigoto Ee enquanto os filhotes apresentaram genótipos homozigoto dominante EE e homozigoto recessivo ee Tais características confirmam a importância da análise genética evidenciando que o fenótipo por si só não é suficiente para determinar o genótipo O filhote com genótipo EE apresentava as características fenotípicas esperadas enquanto o filhote ee devido à epistasia apresentava pintas alaranjadas não conformes ao padrão racial 5 Sendo assim o estudo conclui que para uma correta seleção de padreadores dentro dos padrões raciais sem o risco de propagar características indesejadas os testes genéticos são essenciais Entretanto é de suma importância ressaltar que a amostra limitada a uma única ninhada pode restringir a generalização dos resultados de forma que estudos futuros com uma amostra maior e mais diversificada seriam benéficos para abranger o conhecimento acerca deste conteúdo Além disso uma análise mais detalhada sobre os custos e benefícios econômicos dos testes genéticos para os criadores poderia auxiliar em uma visão mais completa e enriquecedora para o estudo fornecendo uma visão mais prática dessas técnicas Referências bibliograficas SANTIAGO Patrícia Albuquerque MAGALHÃES Rachel Fradique Accioly ABREU Ticiana Monteiro ALMEIDA Anderson Pinto OLIVEIRA Cláudio Henrique de Almeida Avaliação genética da pelagem de cães da raça dálmata Ciência Animal v 30 n 2 p 3341 2020 Supl 1 I TCC FATENE