Resumo de Técnicas Histológicas

histologia\n\nConceito: É o conjunto de procedimentos que envolvem a preparação de amostras de tecidos para a análise sob a microscopia de luz;\n\nEtapas da técnica de histologia:\n• Coleta de material;\n• Fixação;\n• Clivagem;\n• Descalcificação;\n• Processamento;\n• Inclusão;\n• Microtomia;\n• Coloração;\n• Seleção;\n• Observação ao microscópio;\n\n→ Coleta, fixação e Clivagem:\n\n1ª Coleta: após a coleta ou se retirada de tecido as amostras biológicas naturalmente se deterioram. Isto se deve a ingestas autolíticas presentes nas células além de microrganismos decompositores.\n\n2ª Fixação: Objetivos da fixação de tecidos:\n• Excluir a autólise e a proliferação bacteriana;\n• Preservar o metabolismo celular, mantendo o conteúdo bioquímico e preservando antígeno;\n• Proporcionar os tecidos para futuras coberturas;\n• Manter as relações topológicas e morfológicas das biomoléculas o mais próximo da situação “in vívo”; \n• Melhorar a diferenciação óptica das células preservando sua identidade. ★ Fixação física\n\n→ Promove a conservação da amostra através do:\n\n- Aquecimento: Coagula proteíneas, incluindo as enzimas autolíticas e dissolve os lipídios\n- Resfriamento: retardam ou interrompem os processos de necrose e autólise.\n\n★ Fixação química\n\n→ Processo de estabilização de biomoléculas pela ação de agentes químicos:\n- agentes oxidantes (ex: tetróxido de ósmio, óxido crômicos);\n- agentes Denaturantes (ex: Metanol, etanol, ácido acético, acetona);\n- fixadores de mecanismos de desnudados (ex: ácido glático, cloreto de mercúrio, sulfato de zinco);\n- fixadores aldeídos (ex: formaldeído, glutaraldeído);\n- combinações (ex: Carnoy, Bouin, B.S.); \n\n★ Principais fatores que influenciam a fixação:\n- Temperatura;\n- Volume da mistura fixadora;\n- Concentração;\n- pH da mistura fixadora;\n- Osmolaridade;\n- Espessura da amostra;\n- Tempo de fixação. Fixador\tTempo mínimo\tTempo máximo\n\nBouin\t04 horas\t24 horas\nFormolina\t06 horas\t48 horas\nB-5\t04 horas\t08 horas\nCarnoy\t30 minutos\t04 horas\n\n→ Descalcificação\n\n★ Tipos de descalcificadores:\n- Ácidos;\n- Histoquímicos;\n- Soluções descalcificadoras patenteadas;\n- Resinas de troca iônica;\n- Descalcificadores eletrolíticos.\n\n★ Fatores na escolha do método de descalcificação:\n- A urgência do material;\n- O grau de mineralização do tecido;\n- A coloração a ser empregada;\n- O tipo de fixador utilizado.\n\n★ Ácidos fracos:\n\nH\no\n|\nC — O — H\n|\nH\n\nÁcido acético (CH3COOH)\n\nH\n\nO\n|\nC — N2O2\n\nÁcido pícrico (C6H3N3O7) H—C—\n OH\nÁcido fórmico (H2O2)\n\n☆ Ácidos fortes\n\n O⁻\n N⁺\n O \\ \n HO\n O\nÁcido Nítrico (HNO3) HO—S—OH\n II\n O\nÁcido sulfúrico (H2SO4)\n\n H—Cl\nÁcido Clorídrico\n\n→ Processamento:\n☆ Etapas do processamento de tecidos:\nDesidratação → Clarificação → Infiltração ☆ Principais fatores que influenciam o processamento:\n- O tamanho do espécime;\n- Os reagentes utilizados;\n- Espécie animal (mamíferos, invertebrados);\n- Propriedades dos tecidos;\n- Presença de vácuo;\n- Temperatura durante o processamento.\n\n☆ Processamento manual e automático\n\n* Processamento automático:\n- Agitação constante;\n- Sistema a vácuo;\n- Evita falhos humanos durante o processamento;\n- Temperatura da parafina de infiltração é controlada;\n- Permite a execução de vários protocolos;\n- Pode operar durante a noite, feriados e fins de semana;\n- Acondiciona várias amostras ao mesmo tempo.\n\n→ Microtomia\n\n- A estrutura do microtomo;\n- Navalhas;\n- Procedimento de lavagem e identificação das lâminas;\n- A utilização de substâncias adesivas;\n- A execução da microtomia;\n- Problemas técnicos mais comuns. ☆ Exemplos de substâncias aderentes:\n- Albumina de Mayer;\n- Gelatina;\n- Caseína;\n- Silano.\n\n→ Coloração\n\n☆ Hematoxilina e eosina\n↳ Possui auxocromo básico ou catiónico. (+)\n↳ Possui auxocromo ácido ou aniônico. (-)\n\n* Erlich { } Ar atmosférico (O2)\n* Delafield\n* Mayer { } Sódio de sódio (NaNO3)\n* Harris { } Óxido de mercúrio (HgO)