PCR-Resumo Completo: Definição, Aplicações Médicas e Vantagens da PCR em Tempo Real

Leia o artigo anexado e responda as questões 1 Em que consiste a técnica de PCR 2 Cite as principais aplicações na área médica 3 Quais as vantagens da PCR em tempo real 4 Quais os insumos que devem fazer parte de uma reação de PCR e quais as funções de cada um 5 Qual a função do fluoróforo utilizado na PCR em tempo real Leia o artigo anexado e responda as questões 1 Em que consiste a técnica de PCR R A técnica de PCR baseia se no dogma central da Biologia Celular em que temos a síntese do DNA e do RNA e logo após a síntese de proteínas Para a mimetização deste dogma técnica de PCR apresenta três fases A primeira fase é a desnaturação em ocorre a desnaturação das fitas duplas do DNA pelo rompimento das fitas duplas que o DNA apresenta para que ocorra esse processo a temperatura precisa estar entre 9498 C Após o termino desta fase ocorre o anelamento que consiste no reconhecimento de DNA pelos primers nessa etapa a temperatura tem que estar entre 5065 e por ultimo temos a fase de extensão em que ocorre a incorporação de novos nucleotídeos a cadeia de DNA no sentido 53 essa incorporação tem início pela extremidade 3 a temperatura volta a aumentar ficando por volta de 72C Feito um resumo das principais etapas do PCR essa técnica tem como objetivo aumentar o número de moléculas de DNA de uma amostra para que possa se analisar essas moléculas e suas peculiaridades 2 Cite as principais aplicações na área médica R A técnica de PCR tem como objetivo de auxiliar na investigação de amostras biológicas devido a sua capacidade de ampliação e detecção simultânea de quantidade pequenas de sequencias especificas ácido nucleico tendo em vista esse objetivo o uso dessa técnica é multidisciplinar Na área médica essa técnica está relacionada a analises de polimorfismos genotipagem e discriminação alélica detecção de translocação cromossômica 3 Quais as vantagens da PCR em tempo real R Na técnica de PCR em tempo real tem uma de suas vantagens a ampliação das sequencias alvos seguidas por uma eletroforese em gel de agarose para detecção do DNA amplificado com um corante capaz de intercalar no DNA e fluorescente na luz ultra violeta também permite a detecção ciclo a ciclo provocando o aumento da sensibilidade e especificidade da intensidade de fluorescência emitida em decorrência da amplificação podendo ter uma analise da expressão do DNA em decorrência da luz o que auxilia na analise comparativa da expressão do gene entre as amostras logo no início da fase exponencial 4 Quais os insumos que devem fazer parte de uma reação de PCR e quais as funções de cada um Para o desenvolvimento da reação de PCR é necessário os seguintes insumos DNA molde primers nucleotídeos dNTPs Taq DNA polimerase ou SybrGreen Buffer de Reação cofatores e termociclador O DNA molde é o fragmento de DNA em que a sequência alvo está presente e que vai ser amplificado para que essa amostra seja amplificada é necessário que haja os primers que são pequenos fragmentos de DNA que são complementares as regiões flanqueadas a região alvo Com o objetivo da construção da amplificação do DNA é necessário que haja nucleotídeos conhecidos também como dNTPs que são os nucleotídeos que irão complementar a fita de DNA que está sendo sintetizada esses nucleotídeos apresentam as bases nitrogenadas presentes na constituição do DNA Essa síntese de uma nova molécula tem o auxílio de enzimas polimerase que pode ser a Taq DNA polimerase ou SybrGreen a adição de uma dessas enzimas auxiliará na capacidade do desenvolvimento de novas cadeias Com a finalidade de promover a síntese de uma nova molécula de DNA é necessário que haja também o buffer de reação que consiste em uma solução de pH estável que proporciona íons necessário junto com os íons de magnésio que são responsáveis pela atividade das enzimas polimerase presente na reação Por último além desses reagentes é preciso do termociclador que é um equipamento responsável pelo controle da temperatura durante os ciclos de aquecimento e resfriamento durante a reação de PCR 5 Qual a função do fluoróforo utilizado na PCR em tempo real Na técnica de PCR em tempo real o fluoróforo se ligam as duplas fitas que estão em formação resultando na emissão de fluorescência Durante o desenvolvimento da técnica no desenvolvimento da curva exponencial essa substância auxilia na detecção das reações presente na técnica Dessa forma o fluoróforo é responsável por marcar marcar e detectar a quantidade de DNA amplificado em tempo real à medida que a reação ocorre O fluoróforo é uma molécula que emite fluorescência quando exposta à luz de uma determinada faixa de comprimento de onda Isso é crucial em aplicações como a quantificação de expressão gênica detecção de patógenos e análises de mutações