Roteiro de Aula Pratica Toxicologia - Coleta Limpeza e Processamento de Cabelo

ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1 IDENTIFICAÇÃO PROFESSORA Cláudia Simone Baltazar EXPERIMENTO Coleta limpeza e processamento de cabelo DISCIPLINA Toxicologia 2 PROTOCOLO DO EXPERIMENTO 1Introdução A concentração de drogas identificada no cabelo também é influenciada pela via metabólica de um indivíduo tratamentos cosméticos e pigmentação capilar SHAH et al 2014 Atualmente as técnicas são complexas e demoradas de homogeneização derivatização limpeza de amostra e extração seguida por cromatografia gasosa ou líquida acoplada a espectrometria de massa GCMS ou CLAE MS FLINDERS et al2017 Embora esses métodos possam fornecer uma visão abrangente dos analitos envolvidos no comprometimento ou morte existem deficiências inerentes quando novas drogas se tornam disponíveis GUALE et al 2014 O teste de drogas em amostras de cabelo vem sendo de grande importância nos últimos anos pelo fato do cabelo dá informações sobre o uso de drogas ao longo de semanas e meses nesta analise o cabelo tem se tornado útil para o monitoramento de medicamentos terapêuticos os testes capilares podem revelar informações importantes sobre a ingestão confidencial de medicamentos prescritos e também para testes de coconsumo adicional de outros medicamentos não prescritos MUSSHOFF 2013 2Objetivo Apresentar ao acadêmico os procedimentos da coleta limpeza e extração de amostra cabelo para análise dos xenobióticos 3 Materiais utilizados Tesoura Béquer água destilada Acetona Pa Agitador Tipo de amostra Cabelo 3 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Profa Dra Cláudia Baltazar Responda 1 Quais as vantagens podem ser mencionadas em relação a amostra de sangue e urina na janela de detecção para as substâncias tóxicas 2 Quais substâncias podem ser quantificadas na amostra capilar 3 Porque o cabelo é uma amostra de depósito de xenobióticos Landin et al O cabelo como amostra biológica em toxicologia forense uma revisão integrativarevista unilus ensino e pesquisa v 16 n 45 outdez 2019 issn 23182083 Procedimentos Coleta lavagem e processamento da Amostra Com auxílio de uma tesoura de aço inoxidável coletar junto ao couro cabeludo uma mexa de aproximadamente 100 fios Transferir para um béquer identificar a amostra e iniciar o processo de lavagem com água destilada e detergente neutro Agitar por 5 minutos em máquina ou de forma manual vigorosamente Lavar 5 vezes com água destilada Acrescentar 2 mL de acetona pura e deixar evaporar por 3 dias Após a amostra totalmente seca picotar a um estado aproximado de pó e iniciar o processo de extração ácida em placa aquecedora e posterior análise de acordo com o tipo de analito a ser pesquisado ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1 IDENTIFICAÇÃO PROFESSORA Cláudia Simone Baltazar EXPERIMENTO Permeabilidade celular DISCIPLINA Toxicologia 2 PROTOCOLO DO EXPERIMENTO DATA DE ENTREGA PARA A COORDENAÇÃO DO LABORATÓRIO É difícil determinar o local exato de ação das substâncias que causam lesão celular mas estas devem interferir em sistemas básicos da célula como na manutenção da integridade do DNA e das membranas na síntese de proteínas e no funcionamento das mitocôndrias Algumas substâncias reagem diretamente com moléculas das células outras indiretamente pela formação de substâncias tóxicas ou radicais livres Como exemplo de ação direta temos Cianeto inativa a citocromooxidase das mitocôndrias Cloreto de mercúrio o Hg ligase a grupos sulfidrila da membrana celular causando aumento de permeabilidade ROBINS E COTRAN 2008 SEIZI OGA 2014 1 Materiais utilizados Lâminas Lamínulas Microscopia óptica de luz objetiva de 40x Lancetas Algodão Álcool Conta gotas ou pipetas Pasteur Cloreto de mercúrio Álcool etílico Nacl 09 3 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS RECEBIMENTO PELA COORDENAÇÃO DE LABORATÓRIOS Coordenador do Lab Data Profª Data 1 BOGLIOLO L Patologia Geral Básica agressão defesa adaptação doença Rio de Janeiro GuanabaraKoogan 1978 2 2 COTRAN R S KUMAR V ROBBINS S T Robbins Patologia estrutural e funcional Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2008 3 OGA S CAMARGO MMA BATISTUZZO JAO Fundamentos de Toxicologia 4 ed São Paulo Atheneu 2014 685p 4 Técnica Procedimentos Passar algodão embebido em álcool no dedo indicador Com o auxílio de microlanceta descartável perfurar a ponta do dedo anelar Colocase uma gota de sangue em uma lâmina com uma gota de HgCl2 10 e cobrir com lamínula Colocase uma gota de sangue em uma lâmina com uma gota de álcool 70 e cobrir com lamínula Colocase uma gota de sangue em uma lâmina com uma gota de Nacl 09 controle e cobrir com lamínula Observar a morfologia das hemácias e fazer desenho esquemático na objetiva de 40x Montar grupos de 4 ou mais alunos dentre os quais ficarão responsáveis pela escolha do doador de sangue periférico COLOQUE SUA FACULDADE AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI RELATÓRIO AULA PRÁTICA COLETA LIMPEZA E PROCESSAMENTO DE CABELO TOXICOLOGIA CIDADE AQUI DATA AQUI INTRODUÇÃO Nos últimos anos a utilização do cabelo como matriz biológica para análises toxicológicas forenses revelou ser uma amostra alternativa importantíssima e em muitas situações complementar às matrizes tradicionalmente empregues como o sangue e a urina MIGUEL GORDO FERNANDO PESSOA 2013 Embora o cabelo pareça uma estrutura primitiva e as suas propriedades anatómicas fisiológicas e químicas tenham sido descritas é na verdade dotado de uma elevada complexidade e a sua biologia ainda não está plenamente esclarecida Pragst e Balikova 2006 Relativamente à incorporação de xenobióticos a partir do sangue esta pode ocorrer por difusão passiva através da corrente sanguínea que nutre o folículo piloso para as células da matriz em crescimento localizadas entre o centro germinativo e o fim da zona de queratinização de acordo com solubilidade lipídica da molécula e o gradiente de pH entre o plasma e a célula Pragst e Balikova 2006 OBJETIVOS Compreender os procedimentos de coleta limpeza e extração para analisar xenobioticos no cabelo MATERIAIS E MÉTODOS Tesoura Béquer Água destilada Acetona Pa Agitador RESULTADOS E DISCUSSÃO Por meio de tesoura de aço inoxidável houve coleta junto ao couro cabeludo de determinada mecha que se estabelece com cerca de 100 fios Posteriormente houve transferência a um béquer identificando a amostra e obtendo por meio do processo de lavagem de água destilada o qual foi utilizado detergente neutro Adiante isso houve agitação em cerca de 5 minutos validados por meio de máquinas que se determinam por meio manual feito de modo vigorosamente E então tem se que ocorre o acréscimo de 2 mL de acetona e de possibilidade de evaporação o qual se evapora em cerca de 3 dias Diante disso ocorre que a amostra seca Em razão disso tem se a necessidade de picotar e por meio de estado de extração ácida por meio de placa aquecedora que após análise e determinado analito CONCLUSÃO Concluise que qualquer matriz que tenha tido contato com o xenobiotico pode ser utilizada em potencial para a análise em questão e assim tem se que o cabelo é um dos materiais que mais possuem possibilidade de análise toxicológica E por isto foi feita a sua escolha Em razão disso temos que os cabelos é fácil de ser obtido e tem se meio rápido de ser analisado possibilitando assim a sua utilização REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOGLIOLO L Patologia Geral Básica agressão defesa adaptação doença Rio de Janeiro GuanabaraKoogan 1978 COTRAN R S KUMAR V ROBBINS S T Robbins Patologia estrutural e funcional Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2008 OGA S CAMARGO MMA BATISTUZZO JAO Fundamentos de Toxicologia 4 ed São Paulo Atheneu 2014 685p Landin et al O cabelo como amostra biológica em toxicologia forense uma revisão integrativarevista unilus ensino e pesquisa v 16 n 45 outdez 2019 issn 2318 2083 Balikova M 2005 Hair analysis for drugs of abuse Plausibility of interpretation Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub 149 pp 199207 COLOQUE SUA FACULDADE AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI NOME DOS COMPONENTES AQUI RELATÓRIO AULA PRÁTICA PERMEABILIDADE CELULAR TOXICOLOGIA CIDADE AQUI DATA AQUI 1 INTRODUÇÃO A membrana plasmática é essencial para os seres vivos pois cria a ideia de compartimentação separando as soluções do meio intra e extracelular evitando a mistura dessas soluções A célula necessita de energia para sua sobrevivência por isso ela tem seu próprio metabolismo mas esse processo necessita de alguns nutrientes provenientes de fora para ocorrer CONTE sd Por detrimento de organizar a célula e com isto discriminar as variadas necessidades de movimentos de teor celular se entende que os íons necessitam de suas estruturas para que ocorra a possibilidade de passar por meio da célula em si Ocorre a possibilidade de ocorrer permeabilidade seletiva que se determina como uma propriedade fundamental da membrana sendo uma grande característica de suas funções físicas Desse modo todas as substâncias que conseguem atravessar as biomembranas têm propriedades físicoquímicas que as tornam compatíveis com os componentes da membrana permitindo assim a sua passagem Duas características que podem limitar a passagem através das membranas são o tamanho e o grau de ionização das moléculas UFJF 2020 OBJETIVOS Avaliar a seletividade de membranas MATERIAIS E MÉTODOS Lâminas Lamínulas Microscopia óptica de luz objetiva de 40x Lancetas Algodão Álcool Conta gotas ou pipetas Pasteur Cloreto de mercúrio Álcool etílico Nacl 09 RESULTADOS E DISCUSSÃO Passouse o algodão embebedado em álcool no dedo indicadora por auxilio de microlanceta descartável posteriormente perfurouse a ponta do dedo Após isto colocouse gota de sangue na lâmina e com gota de HgCl2 10 cobriuse com lamínula Foi colocado uma gota de sangue em uma lâmina com uma gota de álcool 70 cobriuse com lamínula Foi colocado uma gota de sangue em uma lâmina com uma gota de Nacl 09 controle e cobriuse com lamínula Posteriormente a isso ocorreu a observação de morfologia das hemácias e feito o desenho esquemático como pedido A seguir segue o desenho pedido Figura 1 Hemácias objetiva de 40x CONCLUSÃO Quando a hemácia foi colocada com NaCl automaticamente ocorreu a perda de água deixando a célula murcha Já no meio com HgCl2 10 a célula ficou mais gordinha ou seja ela adquire agua aumentando o volume por osmose até ocasionar seu rompimento Desse modo avaliase as questões relacionadas as concentrações Caso o meio tenha maior concentração ocorre perda de água e a mesma murcha já em um meio diluído ocorre absorção de água REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOGLIOLO L Patologia Geral Básica agressão defesa adaptação doença Rio de Janeiro GuanabaraKoogan 1978 COTRAN R S KUMAR V ROBBINS S T Robbins Patologia estrutural e funcional Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2008 OGA S CAMARGO MMA BATISTUZZO JAO Fundamentos de Toxicologia 4 ed São Paulo Atheneu 2014 685p