Trabalho de Parasitologia

Por favor limite suas respostas a uma 1 página por questão 1 Levando em consideração seu projeto de dissertaçãotese A Descreva de maneira sucinta seu principal objetivo e seu modelo de estudo este item não será pontuado é apenas para eu entender a resposta da pergunta B B Após esta breve explicação proponha um experimento em que as variáveis tempo e sincronizadores ambientais possam ser testadas OBS Os sincronizadores ambientais podem ser fatores bióticos ou abióticos 2 Descreva as situações de transmissão de patógenos descritas no vídeo Insects as carriers of disease httpswwwyoutubecomwatchvhMItuWGs68 e classifique todos os elementos envolvidos de acordo com o conteúdo explicado em sala de aula 3 Leia o artigo DISTRIBUTION OF DIGESTIVE ENZYMES AMONG THE ENDOPERITROPHIC AND ECTOPERITROPHIC SPACES AND MIDGUT CELLS OF RHYNCHOSCIARA AND ITS PHYSIOLOGICAL SIGNIFICANCE TERRA WR FERREIRA C and BIANCHI AGD 1979 JOURNAL OF INSECT PHYSIOLOGY 25 6 pp487494 disponível em httpswwwsciencedirectcomsciencearticlepiiS0022191079800074 e explique como os dados apresentados nele justificam alguma das teorias ou hipóteses discutidas em sala de aula Que experimentos adicionais você faria para corroborar essa hipótese 1 Levando em consideração seu projeto de dissertaçãotese A Descreva de maneira sucinta seu principal objetivo e seu modelo de estudo este item não será pontuado é apenas para eu entender a resposta da pergunta B O trabalho teve como principal objetivo investigar a diversidade bacteriana da microbiota presente em anofelinos pertencentes aos gêneros Kerteszia e Nyssorhyncus coletados em áreas de Mata Atlântica no estado do Rio de Janeiro A pesquisa visa compreender a relação entre a composição microbiana a filogenia dos hospedeiros e suas respectivas fontes alimentares sanguíneas Os objetivos específicos foram 1 descrever a diversidade e composição bacteriana da microbiota de anofelinos desses dois gêneros 2 testar a congruência entre a composição da microbiota e a filogenia dos mosquitos hospedeiros e 3 comparar a diversidade e composição microbiana em relação à fonte sanguínea dos insetos Para alcançar esses objetivos a metodologia baseiase em abordagens moleculares integradas A identificação da fonte sanguínea será realizada por meio da técnica de DNA barcoding utilizando primers universais para vertebrados e amplificação de fragmentos dos genes mitocondriais citocromo b cytb 358 pb e ribossomal 12S com sequenciamento Sanger Os mosquitos serão capturados em fragmentos florestais preservados da Mata Atlântica em locais com condições ecológicas favoráveis ao desenvolvimento de anofelinos A identificação taxonômica dos mosquitos será inicialmente feita por análise morfológica seguida de análises moleculares O abdome dos adultos será separado para investigação da microbiota enquanto o restante do corpo será utilizado para a identificação molecular por meio da amplificação e sequenciamento de fragmentos dos genes mitocondrial citocromo oxidase subunidade I COI 658 pb e nuclear hunchback 459 pb Para caracterizar a microbiota serão amplificadas regiões variáveis do gene 16S rRNA com primers universais contendo identificadores de amostras permitindo o sequenciamento em plataforma Illumina MiSeq As sequências serão processadas no software QIIME2 sendo alinhadas aos bancos de dados Silva e Greengenes para a atribuição taxonômica das bactérias presentes A diversidade microbiana será analisada por métricas de diversidade alfa e beta comparandose os dados entre diferentes espécies de mosquitos e entre distintas fontes sanguíneas identificadas Testes estatísticos multivariados como ANOVA e ADONIS serão empregados para verificar a influência significativa dessas variáveis na composição e diversidade da microbiota Através deste estudo esperase ampliar o conhecimento sobre as interações entre mosquitos vetores sua microbiota associada e os fatores ecológicos que moldam essa relação contribuindo para futuras estratégias de controle biológico e vigilância de doenças transmitidas por anofelinos B Após esta breve explicação proponha um experimento em que as variáveis tempo e sincronizadores ambientais possam ser testadas OBS Os sincronizadores ambientais podem ser fatores bióticos ou abióticos Proposta de Experimento Efeitos do Tempo e de Sincronizadores Ambientais na Diversidade da Microbiota de Anofelinos na Mata Atlântica Objetivo do Experimento Avaliar como a variação temporal estacional e sincronizadores ambientais temperatura umidade luminosidade e presença de hospedeiros vertebrados influenciam a diversidade e composição da microbiota bacteriana de anofelinos dos gêneros Kerteszia e Nyssorhynchus Desenho Experimental 1 Fatores Testados Variáveis Independentes Tempo Coletas em 4 períodos ao longo do ano verão outono inverno e primavera Sincronizadores ambientais oAbióticos Temperatura média umidade relativa do ar fotoperíodo horas de luz oBióticos Presença e densidade relativa de vertebrados hospedeiros ex mamíferos aves 2 Unidades amostrais Mosquitos adultos dos gêneros Kerteszia e Nyssorhynchus coletados em 3 diferentes remanescentes florestais da Mata Atlântica minimamente impactados mas com diferenças microambientais 3 Método de coleta Armadilhas CDC ou Shannon com atrativos luminosos eou iscas animais instaladas durante 3 noites consecutivas em cada estação 4 Processamento laboratorial Separação do abdome para análise da microbiota via sequenciamento do 16S rRNA Illumina MiSeq Resto do corpo para identificação molecular do mosquito COI e hunchback Determinação da fonte alimentar via DNA barcoding cytb e 12S 5 Variáveis dependentes Diversidade alfa índices de Shannon Chao1 e beta distâncias BrayCurtis UniFrac Composição taxonômica da microbiota Análise estatística ANOVA ou KruskalWallis para comparar diversidade alfa entre estações e locais Análise multivariada ADONIS PERMANOVA para verificar influência das variáveis ambientais sobre a diversidade beta Modelos lineares generalizados GLM para relacionar temperatura umidade e densidade de hospedeiros com a composição microbiana Análise de Redundância RDA ou CCA para explorar relações entre microbiota tempo e fatores ambientais Hipóteses a serem testadas 1 A composição da microbiota bacteriana dos anofelinos varia significativamente entre as estações do ano 2 Os sincronizadores ambientais especialmente temperatura e presença de vertebrados explicam parte significativa da variação na microbiota 3 Existem padrões filogenéticos conservados na microbiota mas modulados por fatores ambientais e temporais Elemento Descrição Objetivo Avaliar o efeito do tempo estações e de sincronizadores ambientais temperatura umidade luminosidade e presença de vertebrados na microbiota de anofelinos Locais de Coleta 3 remanescentes florestais da Mata Atlântica no RJ com diferentes microambientes ex altitude proximidade de corpos dágua Período de Coleta 4 campanhas verão outono inverno e primavera Espéciesalvo Kerteszia spp e Nyssorhynchus spp Método de Coleta Armadilhas luminosas CDC ou Shannon 3 noites consecutivas por estaçãolocal Análises moleculares 16S rRNA Illumina MiSeq microbiota abdomeCOI hunchback filogenia do mosquitocytb 12S fonte sanguínea Variáveis ambientais Temperatura umidade fotoperíodo abióticos presença de hospedeiros vertebrados biótico Análises estatísticas ANOVA ADONISPERMANOVA GLM RDACCA correlações entre microbiota e variáveis ambientais 2 Descreva as situações de transmissão de patógenos descritas no vídeo Insects as carriers of disease httpswwwyoutubecomwatchvhMItuWGs68 e classifique todos os elementos envolvidos de acordo com o conteúdo explicado em sala de aula Situações de Transmissão de Patógenos por Insetos 1 Mosquitos Anopheles spp e Malária o Patógeno Plasmodium spp protozoário o Modo de Transmissão Biológica o parasita se desenvolve no mosquito antes de ser transmitido ao humano através da picada o Classificação Vetor Anopheles spp Hospedeiro Intermediário Mosquito onde ocorre parte do ciclo do parasita Hospedeiro Definitivo Ser humano onde o parasita se reproduz sexualmente 2 Mosquitos Aedes aegypti e DengueZikaChikungunya o Patógeno Vírus da dengue Zika e Chikungunya o Modo de Transmissão Biológica os vírus se replicam no mosquito antes de serem transmitidos o Classificação Vetor Aedes aegypti Hospedeiro Intermediário Mosquito Hospedeiro Definitivo Ser humano 3 Moscas Domésticas Musca domestica e Doenças Bacterianas o Patógenos Salmonella spp Escherichia coli entre outros o Modo de Transmissão Mecânica as bactérias aderem ao corpo da mosca e são transferidas para alimentos ou superfícies o Classificação Vetor Musca domestica Hospedeiro Ser humano 4 Barbeiros Triatoma spp e Doença de Chagas o Patógeno Trypanosoma cruzi protozoário o Modo de Transmissão Biológica o parasita se desenvolve no inseto e é transmitido pelas fezes depositadas na pele durante a alimentação o Classificação Vetor Triatoma spp Hospedeiro Intermediário Barbeiro Hospedeiro Definitivo Ser humano 5 Moscas TséTsé Glossina spp e Tripanossomíase Africana o Patógeno Trypanosoma brucei protozoário o Modo de Transmissão Biológica o parasita se desenvolve na mosca antes de ser transmitido através da picada o Classificação Vetor Glossina spp Hospedeiro Intermediário Mosca tsétsé Hospedeiro Definitivo Ser humano Classificação dos Elementos Envolvidos Vetor Biológico Inseto no qual o patógeno se desenvolve ou se multiplica antes de ser transmitido ao hospedeiro definitivo Vetor Mecânico Inseto que transporta o patógeno sem que haja desenvolvimento ou multiplicação deste em seu organismo Hospedeiro Intermediário Organismo no qual o patógeno passa por uma fase de desenvolvimento mas não se reproduz sexualmente Hospedeiro Definitivo Organismo no qual o patógeno atinge a maturidade e se reproduz sexualmente 3 Leia o artigo DISTRIBUTION OF DIGESTIVE ENZYMES AMONG THE ENDOPERITROPHIC AND ECTOPERITROPHIC SPACES AND MIDGUT CELLS OF RHYNCHOSCIARA AND ITS PHYSIOLOGICAL SIGNIFICANCE TERRA WR FERREIRA C and BIANCHI AGD 1979 JOURNAL OF INSECT PHYSIOLOGY 25 6 pp487494 disponível em httpswwwsciencedirectcomsciencearticlepiiS0022191079800074 e explique como os dados apresentados nele justificam alguma das teorias ou hipóteses discutidas em sala de aula Que experimentos adicionais você faria para corroborar essa hipótese O artigo de Terra Ferreira e Bianchi 1979 apresenta uma análise detalhada da distribuição de enzimas digestivas no intestino médio de larvas de Rhynchosciara americana fornecendo evidências significativas para a hipótese de compartimentalização espacial da digestão em insetos Justificativa da Hipótese de Compartimentalização da Digestão Os dados do estudo indicam que diferentes fases da digestão ocorrem em compartimentos distintos do intestino médio 1 Digestão Inicial Ocorre no espaço endoperitrófico onde enzimas como α amilase e tripsina iniciam a quebra de macromoléculas alimentares 2 Digestão Intermediária Acontece no espaço ectoperitrófico com a ação de enzimas como aminopeptidases e trealase que continuam a degradação dos produtos da digestão inicial 3 Digestão Final Realizada nas células do intestino médio especialmente nos cecos gástricos e no ventrículo posterior onde enzimas como dipeptidases e fosfatases completam a digestão permitindo a absorção dos nutrientesBiblioteca de Teses USP Essa organização espacial da digestão é corroborada por análises que mostram a presença específica de determinadas enzimas em cada compartimento sustentando a hipótese de que a compartimentalização otimiza a eficiência digestiva e a absorção de nutrientes Experimentos Adicionais para Corroborar a Hipótese Para fortalecer a compreensão dessa compartimentalização os seguintes experimentos podem ser propostos 1 Rastreamento de Enzimas com Marcadores Fluorescentes Utilizar anticorpos específicos conjugados a fluoróforos para visualizar a localização das enzimas digestivas nos diferentes compartimentos do intestino médio através de microscopia de fluorescência 2 Análise de Fluxo Contracorrente Investigar os fluxos de fluidos entre os espaços endo e ectoperitróficos utilizando traçadores moleculares para entender como as enzimas são recicladas e como os nutrientes são transportados 3 Estudos Comparativos com Outras Espécies Comparar a compartimentalização da digestão em Rhynchosciara americana com outras espécies de insetos para avaliar a conservação evolutiva desse mecanismo 4 Inibição Seletiva de Enzimas Aplicar inibidores específicos para determinadas enzimas em cada compartimento e observar os efeitos na digestão e absorção de nutrientes para confirmar a função específica de cada enzima em seu respectivo local de atuação Esses experimentos adicionais forneceriam uma compreensão mais aprofundada da compartimentalização da digestão em insetos validando ainda mais as conclusões do estudo de Terra Ferreira e Bianchi 1979 e contribuindo para o conhecimento da fisiologia digestiva em insetos