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Ciências Biológicas ·
Bioquímica
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Professor Alexandre Soares dos Santos DCBUFVJM 2007 1 Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde Departamento de Ciências Básicas Disciplina Bioquímica AULA PRÁTICA Nº 7 ENZIMAS II As enzimas são responsáveis pela catálise e controle da maioria dos processos metabólicos numa célula Elas são de natureza protéica e aumentam a velocidade de reações químicas através da diminuição da energia de ativação requerida Possuem como principais características i grande especificidade pelos substratos ii grande eficiência de catálise e iii efeito saturante do próprio substrato Há na estrutura da enzima uma determinada região diretamente responsável pela ação catalítica Essa região é denominada sítio ativo e a sua conformação correta é fundamental para a atividade enzimática Ali se localizam diversos resíduos de aminoácidos que podem desempenhar funções de orientação do substrato e direta interação com este permitindo que a reação ocorra Assim quaisquer agentes capazes de promover mudanças conformacionais na estrutura protéica como variação de temperatura pH e força iônica por exemplo podem afetar a atividade enzimática A temperatura por exemplo altera a velocidade de uma reação enzimática exercendo influência sobre a constante de velocidade e sobre a enzima como proteína A elevação da temperatura tende a aumentar a velocidade reacional exponencialmente segundo a equação Vm F E0 eART Onde F é uma constante A é a energia de ativação e R é a constante dos gases O pH também exerce efeito sobre a velocidade de uma reação enzimática Os sítios ativos nas enzimas são frequentemente compostos por grupos ionizáveis que devem se encontrar em uma forma iônica adequada para que mantenham a conformação do sítio ativo liguemse aos substratos ou catalisem a reação OBJETIVOS Observar as influências da temperatura pH concentração de enzima e concentração de substrato sobre o progresso reacional catalizado enzimaticamente PROCEDIMENTOS 1º INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA SOBRE A ATIVIDADE ENZIMÁTICA 1 Colocar 1mL de solução de sacarase em 4 tubos 2 Acrescentar em cada tubo 1mL de solução se sacarose 3 3 Numerar os tubos de 1 a 4 4 Colocar o tubo 1 em banho de gelo Deixar o tubo 2 à temperatura ambiente Colocar o tubo 3 em banhomaria a 37ºC Colocar o tubo 4 em água fervente Aguardar por 5 minutos 5 Adicionar a cada tubo 2 mL do reativo de Benedict e aqueça até ebulição para que a reação aconteça 6 Analisar os resultados Professor Alexandre Soares dos Santos DCBUFVJM 2007 2 2º EFEITO DO PH 1 Prepare três tubos de ensaio a Tubo 1 10 mL de solução de tampão pH 60 20 mL de solução de amido a 1 g b Tubo 2 10 mL de solução de tampão pH 20 20 mL de solução de amido a 1 g c Tubo 3 10 mL de solução de tampão pH 100 20 mL de solução de amido a 1 g 2 Adicione 05 mL da solução de amilase salivar saliva em cada tubo agitandoos 3 Coloqueos em banhomaria a 37ºC por 10 minutos 4 Adicione 3 gotas de lugol 5 Analise os resultados 3º INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DA ENZIMA 1 Colocar respectivamente em 5 tubos de ensaio numerados a 02mL de sacarase 08mL de H2O destilada 10mL de sacarose b 05mL de sacarase 05mL de H2O destilada 10mL de sacarose c 10mL de sacarase 10mL de sacarose d 10mL de H2O destilada 10mL de sacarose e 10mL de sacarase 08mL de H2O destilada 2 Incubar os 5 tubos em banho maria a 37ºC por 10 minutos 3 Adicionar em seguida a cada um dos tubos 1mL de Reagente de Benedict Aquecê los até a ebulição 4 Observar os resultados anotando em quais tubos houve atividade enzimática observando pela reação de Benedict 5 Ler interpretação 4º EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO 1 Prepare os seguintes tubos de ensaio Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Amido 1 mL 00 02 04 06 10 20 32 H2O mL 32 30 28 26 22 12 00 2 Adicione 05 mL de saliva amilase salivar a cada um dos tubos e agite bem 3 Coloque os tubos em banhomaria a 37ºC por 10 minutos 4 Adicione 20 mL do reagente de Benedict e aqueça até ferver 5 Observe as diferenças de intensidade de cores nos vários tubos
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Professor Alexandre Soares dos Santos DCBUFVJM 2007 1 Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde Departamento de Ciências Básicas Disciplina Bioquímica AULA PRÁTICA Nº 7 ENZIMAS II As enzimas são responsáveis pela catálise e controle da maioria dos processos metabólicos numa célula Elas são de natureza protéica e aumentam a velocidade de reações químicas através da diminuição da energia de ativação requerida Possuem como principais características i grande especificidade pelos substratos ii grande eficiência de catálise e iii efeito saturante do próprio substrato Há na estrutura da enzima uma determinada região diretamente responsável pela ação catalítica Essa região é denominada sítio ativo e a sua conformação correta é fundamental para a atividade enzimática Ali se localizam diversos resíduos de aminoácidos que podem desempenhar funções de orientação do substrato e direta interação com este permitindo que a reação ocorra Assim quaisquer agentes capazes de promover mudanças conformacionais na estrutura protéica como variação de temperatura pH e força iônica por exemplo podem afetar a atividade enzimática A temperatura por exemplo altera a velocidade de uma reação enzimática exercendo influência sobre a constante de velocidade e sobre a enzima como proteína A elevação da temperatura tende a aumentar a velocidade reacional exponencialmente segundo a equação Vm F E0 eART Onde F é uma constante A é a energia de ativação e R é a constante dos gases O pH também exerce efeito sobre a velocidade de uma reação enzimática Os sítios ativos nas enzimas são frequentemente compostos por grupos ionizáveis que devem se encontrar em uma forma iônica adequada para que mantenham a conformação do sítio ativo liguemse aos substratos ou catalisem a reação OBJETIVOS Observar as influências da temperatura pH concentração de enzima e concentração de substrato sobre o progresso reacional catalizado enzimaticamente PROCEDIMENTOS 1º INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA SOBRE A ATIVIDADE ENZIMÁTICA 1 Colocar 1mL de solução de sacarase em 4 tubos 2 Acrescentar em cada tubo 1mL de solução se sacarose 3 3 Numerar os tubos de 1 a 4 4 Colocar o tubo 1 em banho de gelo Deixar o tubo 2 à temperatura ambiente Colocar o tubo 3 em banhomaria a 37ºC Colocar o tubo 4 em água fervente Aguardar por 5 minutos 5 Adicionar a cada tubo 2 mL do reativo de Benedict e aqueça até ebulição para que a reação aconteça 6 Analisar os resultados Professor Alexandre Soares dos Santos DCBUFVJM 2007 2 2º EFEITO DO PH 1 Prepare três tubos de ensaio a Tubo 1 10 mL de solução de tampão pH 60 20 mL de solução de amido a 1 g b Tubo 2 10 mL de solução de tampão pH 20 20 mL de solução de amido a 1 g c Tubo 3 10 mL de solução de tampão pH 100 20 mL de solução de amido a 1 g 2 Adicione 05 mL da solução de amilase salivar saliva em cada tubo agitandoos 3 Coloqueos em banhomaria a 37ºC por 10 minutos 4 Adicione 3 gotas de lugol 5 Analise os resultados 3º INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DA ENZIMA 1 Colocar respectivamente em 5 tubos de ensaio numerados a 02mL de sacarase 08mL de H2O destilada 10mL de sacarose b 05mL de sacarase 05mL de H2O destilada 10mL de sacarose c 10mL de sacarase 10mL de sacarose d 10mL de H2O destilada 10mL de sacarose e 10mL de sacarase 08mL de H2O destilada 2 Incubar os 5 tubos em banho maria a 37ºC por 10 minutos 3 Adicionar em seguida a cada um dos tubos 1mL de Reagente de Benedict Aquecê los até a ebulição 4 Observar os resultados anotando em quais tubos houve atividade enzimática observando pela reação de Benedict 5 Ler interpretação 4º EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO 1 Prepare os seguintes tubos de ensaio Tubos 1 2 3 4 5 6 7 Amido 1 mL 00 02 04 06 10 20 32 H2O mL 32 30 28 26 22 12 00 2 Adicione 05 mL de saliva amilase salivar a cada um dos tubos e agite bem 3 Coloque os tubos em banhomaria a 37ºC por 10 minutos 4 Adicione 20 mL do reagente de Benedict e aqueça até ferver 5 Observe as diferenças de intensidade de cores nos vários tubos