RTPCR-Conceito-Aplicacoes-Principios-Mecanismos-e-Diferencas

RTPRC Conceito aplicação princípio mecanismo diferenças do PCR convencional e desenho Valor 15 Data Até dia 2411 Conceito e princípio RTPCR significa PCR reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa Também pode ser chamada de Transcrição Reversa seguida de PCR Tem a proposta de utilizar a transcriptase reversa para a partir de ARN ARNm sintetizar ADN ADNc A RTPCR é uma das variações da PCR A técnica é realizada em duas partes a primeira é a transcrição reversa nessa parte são usadas as enzimas e os primers e objetivo aqui é sintetizar uma fita de ADN a partir de um template de ARN e as enzimas são as transcriptases reservas que vão catalisar a reação de síntese desse ADN e a segunda como o próprio nome informa é a PCR nessa parte é o ADNc que será usado Aplicações É útil para estudos envolvendo expressão gênica lembrar que expressão gênica envolve o ARN uma vez que a expressão gênica pela participação da maquinaria de ARN nesse caso de ARNm obtémse proteínas e avaliando o ARNm é possível encontrar quais proteínas estão sendo expressas Um exemplo da aplicação da técnica é em análise fenotípicas de expressões gênicas Diferenças e mecanismo A RTPCR permite a análise de transcritos mRNA No entanto tem caráter mais qualitativo do que quantitativo Além disso possui baixo poder de discriminar produtos simplificados quando comparada com outras técnicas qualitativas Possui baixa resolução e sensibilidade molecular quando comparada com outros métodos qualitativos E é uma técnica não automatizada sendo dependente de monitoração total durante a execução Usa as transcriptases reversas como catalisadores para a síntese de ADN Quanto ao mecanismo iniciamos a técnica com a proposta de síntese de ADNc a partir de ARNm reação essa que é catalisada pelas enzimas transcriptases reversas que são obtidas geralmente de vírus como os AMV Avian Mieloblastosis Virus e a MMuLV Moloney Murine Laeukemia Virus e os primers inespecíficos e não são usados aos pares diferente da PCR normal em que são usados em pares Os primers se anelam às regiões ricas em adeninas no ARN Após essa reação de catalisação será sintetizado uma fita de ADN ADNc Finalizada a etapa da catalisação com as enzimas transcriptases reversas utilizamos a fita de ADNc obtida para fazer a PCR A partir disso resta realizar a PCR convencional ARNm template obtido de uma célula fornecedora enzimas catalisadoras da reação transcriptases reversas primers obtidas a partir de vírus catalisadores atuam físico quimicamente no caminho da reação ADNc obtido da primeira etapa a RT primers anelados às regiões PolyA rica em adenina no ARNm com o ADNc obtido na primeira etapa da RTPCR etapa da transcrição reversa esse material de ADNc será então destinado à PCR convencional amplificação propriamente dita Conceito e princípio RTPCR significa PCR reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa Também pode ser chamada de Transcrição Reversa seguida de PCR Tem a proposta de utilizar a transcriptase reversa para a partir de ARN ARNm sintetizar ADN ADNc A RTPCR é uma das variações da PCR A técnica é realizada em duas partes a primeira é a transcrição reversa nessa parte são usadas as enzimas e os primers e objetivo aqui é sintetizar uma fita de ADN a partir de um template de ARN e as enzimas são as transcriptases reservas que vão catalisar a reação de síntese desse ADN e a segunda como o próprio nome informa é a PCR nessa parte é o ADNc que será usado Aplicações É útil para estudos envolvendo expressão gênica lembrar que expressão gênica envolve o ARN uma vez que a expressão gênica pela participação da maquinaria de ARN nesse caso de ARNm obtémse proteínas e avaliando o ARNm é possível encontrar quais proteínas estão sendo expressas Um exemplo da aplicação da técnica é em análise fenotípicas de expressões gênicas Diferenças e mecanismo A RTPCR permite a análise de transcritos mRNA No entanto tem caráter mais qualitativo do que quantitativo Além disso possui baixo poder de discriminar produtos simplificados quando comparada com outras técnicas qualitativas Possui baixa resolução e sensibilidade molecular quando comparada com outros métodos qualitativos E é uma técnica nãoautomatizada sendo dependente de monitoração total durante a execução Usa as transcriptases reversas como catalisadores para a síntese de ADN Quanto ao mecanismo iniciamos a técnica com a proposta de síntese de ADNc a partir de ARNm reação essa que é catalisada pelas enzimas transcriptases reversas que são obtidas geralmente de vírus como os AMV Avian Mieloblastosis Virus e a MMuLV Moloney Murine Laeukemia Virus e os primers inespecíficos e não são usados aos pares diferente da PCR normal em que são usados em pares Os primers se anelam às regiões ricas em adeninas no ARN Após essa reação de catalisação será sintetizado uma fita de ADN ADNc Finalizada a etapa da catalisação com as enzimas transcriptases reversas utilizamos a fita de ADNc obtida para fazer a PCR A partir disso resta realizar a PCR convencional ARNm template obtido de uma célula fornecedora enzimas catalisadoras da reação transcriptases reversas primers obtidas a partir de vírus catalisadores atuam físico quimicamente no caminho da reação ADNc obtido da primeira etapa a RT primers anelados às regiões PolyA rica em adenina no ARNm com o ADNc obtido na primeira etapa da RTPCR etapa da transcrição reversa esse material de ADNc será então destinado à PCR convencional amplificação propriamente dita