Atividade Prática de Microbiologia Geral e Biossegurança

Gislaine Fiaes Microbiologia Geral e Biossegurança MICROBIOLOGIA GERAL E BIOSSEGURANÇA 1 Todos os campos do Formulário Padrão deverão ser devidamente preenchidos 2 Esta é uma atividade individual Caso seja identificado plágio inclusive de colegas a atividade será zerada 3 Cópias de terceiros como livros e internet sem citar a fonte caracterizamse como plágio sendo o trabalho zerado 4 Ao utilizar autores para fundamentar seu Projeto Integrador os mesmos devem ser referenciados conforme as normas da ABNT 5 Ao realizar sua atividade renomeie o arquivo salve em seu computador anexe no campo indicado clique em responder e finalize a atividade 6 Procure argumentar de forma clara e objetiva de acordo com o conteúdo da disciplina Formatação exigida documento Word Fonte Arial ou Times New Roman tamanho 12 MEIO DE CULTURA 1 Conhecer as técnicas básicas utilizadas na rotina da microbiologia 2 Produzir o meio de cultura sólida utilizado para favorecer o crescimento bacteriano A rotina laboratorial executada por profissional atuante nas análises clínicas é imprescindível para monitorar o estado de saúde dos indivíduos que devem manter o hábito constante de procurar atendimento médicolaboratorial Os exames básicos promovem uma abordagem ampla a respeito dos agentes patológicos que pode estar prejudicando a saúde do paciente auxiliando profissionais da saúde a compreender diagnosticar e tratar doenças Caro aluno a Na presente atividade prática você irá preparar um meio de cultura caseiro utilizando recursos adaptados da versão laboratorial mas que proporcionará a você a noção de como o meio de cultura para cultivo bacteriano é preparado Vamos usar gelatina como substituto para o Ágar responsável pela solidificação do meio E o caldo de legumes que será fonte de nutrientes para o crescimento e reprodução das bactérias VÍDEOPOCKET LEARNING EMBASAMENTO TEÓRICO A cultura pura é quando se obtêm um microrganismo por meio de uma única célula que cresce e se multiplica no meio de cultura possibilitando o estudo das características morfológicas e fisiológicas dos microrganismos Quando estamos cultivando os microrganismos empregamos meio de cultura que contém nutrientes e vitaminas necessários para o seu crescimento e reprodução O fornecimento de nutrientes tem que atender às exigências das espécies a serem cultivadas promovendo o crescimento e ou esporulação satisfatória do microrganismo A maior parte dos microrganismos cultiváveis crescem em meio à cultura que contém uma fonte de carbono e nitrogênio e em menor quantidade outros nutrientes como potássio fósforo enxofre ferro e manganês O carbono é um elemento de grande importância para o desenvolvimento de microrganismos seja no seu habitat ou em meio de cultivo Ele é um elemento estrutural que é considerado a principal fonte de energia O carbono é fornecido por meio de monossacarídeos como glicose frutose e galactose O nitrogênio é a parte essencial para a formação dos aminoácidos que compõem as proteínas e é fornecido de forma orgânica asparagina caseína e peptona e de forma inorgânica nitrato de sódio e nitrato de cálcio Enquanto que o enxofre é utilizado na forma de sulfato para a biossíntese de aminoácidos como cisteínas e metionina O enxofre na forma de sulfeto pode ser tóxico aos microrganismos O fosfato é um componente da membrana e está presente na síntese dos ácidos nucleicos e ATP e é fornecido como fosfato de potássio Os demais nutrientes são necessários em pequena quantidade e funcionam como cofatores Entretanto a composição do meio de cultivo depende do microrganismo que se deseja cultivar e do objeto de estudo Escaneie ou clique sobre o QR Code De modo geral quando trabalhamos com o cultivo de microrganismos o ambiente é asséptico ou seja ambiente livre de contaminação Após o preparo dos meios de cultivo eles devem ser esterilizados para garantir que estamos trabalhando somente com o microrganismo que pretendemos estudar Os meios de cultivo são classificados quanto sua consistência composição e seletividade Quanto à consistência o meio pode ser líquido ou sólido O meio líquido contém todos os nutrientes necessários para o crescimento do microrganismo são dissolvidos em água Uma vez preparado e esterilizado pode inserir o microrganismo que se pretende trabalhar em meio de cultivo Este meio é utilizado quando se tem por objetivo obter maior massa em menor tempo geralmente é utilizado para o crescimento de bactérias Contudo os meios sólidos são preparados a partir da adição de um agente solidificador o AGAR na concentração de 15 a 2 pv antes de esterilização Este tipo de meio é o mais utilizado para a obtenção de culturas puras para estudar as características morfológicas e para a estocagem de culturas puras O meio de cultivo em relação a sua composição pode ser Sintético semissintético e natural O meio sintético é quando sua composição química e concentrações são conhecidas Um exemplo é o meio CZAPK nitrato de sódio 2g L1 sulfato de magnésio 05 2g L1 cloreto de potássio 052g L1 sulfato ferroso 001 2g L1 difosfato de potássio 10 2g L1 sacarose 30 2g L1 e o pH final 72 O meio de cultivo semissintético é a composição química é parcialmente conhecida de alguns componentes por exemplo o meio de cultivo batataágardextrose Sua composição é 500 ml do caldo de batata componentes desconhecidos 20g dextrose e 20 g de ágar e completa para 1000 ml de água Quando a composição do meio é desconhecida por completo é denominado de meio de cultivo natural como por exemplo o meio cenouraágar que é composto de 400 ml do extrato de cenoura 20 g de ágar e completa para 1000 ml de água O meio natural por apresentar baixo custo acaba sendo o mais utilizado nos laboratórios de pesquisa Os meios de cultivo podem apresentar se seletivos não seletivos e diferenciais Os meios de cultivos seletivos são aqueles que você vai adicionar uma substância que favorece o desenvolvimento de um determinado organismo Por exemplo adiciona cristal de violeta ao meio de cultivo favorecendo o desenvolvimento de bactérias Gram negativa Os meios de cultivo que desenvolvem uma grande gama de microrganismos são denominados meios não seletivos E os meios diferenciais são meios que permitem mediante a adição de reagentes verificar o comportamento de dois ou mais microrganismos Por exemplo quando adiciona ao meio de cultivo eosina e azul de metileno consegue ver a diferença de Escherichia coli de Enterobacter aerogenes O meio de cultivo Batataagardextrose BDA que é considerado o meio universal pois suporta o crescimento de muitos organismos fungos e bactérias por isso é usado mundialmente como meio de rotina nos laboratórios para o isolamento obtenção da cultura pura e manutenção temporária das culturas A batata serve como importante fonte de Carboidrato o amido é absorvido pelo microrganismo como glicose após a hidrólise enzimática A dextrose na quantidade certa permite o crescimento do microrganismo pois é um monossacarídeo mais importante utilizado como fonte de energia na respiração de procariotos e eucariotos Como é preparado este meio qual a receita do meio O modo de preparo é simples Primeiro passo é ferver 200g de batata em 500 ml de água por 30 minutos Em seguida filtrar o caldo em gases Fazer a fusão do ágar 20g junto com a quantidade de dextrose 20g em 500 ml de água Em seguida adicione o caldo e complete o volume para 1000 ml de água E o meio está pronto para ser esterilizado Após ser esterilizado pode ser vertido em placas de Petri para ser feito o isolamento do microrganismo Referência Página 2628 da unidade II da apostila de Microbiologia e biossegurança Materiais de consumo Descrição Observação 3 placas de Petri estéril descartável Material a ser fornecido pelo aluno Água Material a ser fornecido pelo aluno 1 tablete de caldo de carne Material a ser fornecido pelo aluno 1 envelope de gelatina em pó incolor Material a ser fornecido pelo aluno Fogão Material a ser fornecido pelo aluno Panela Material a ser fornecido pelo aluno Softwareaplicativosimulador Sim Não X Em caso afirmativo qual Pago Não Pago Tipo de Licença Não se aplica Descrição do softwareaplicativosimulador Caso não seja necessário o uso do recurso preencher com Não se aplica NSA Caros alunos as Ao realizar a prática separe um espaço organizado limpo e arejado Separe todos os materiais necessários e coloqueos em uma disposição de fácil acesso e que permita que você fique confortável de preferência sentado respeitando uma postura correta Tome cuidado ao manipular os materiais principalmente no momento de utilizar a fonte de calor seja o fogão ou o microondas Coloque o seu material em recipiente adequado para cada situação VÍDEO POCKET LEARNING PASSO A PASSO DA PRÁTICA Procedimento 1 Preparo do meio de cultura 1 Inicie o preparo separando os materiais 2 Posteriormente macere o tablete de caldo de carne desmanchando os grumos Misture com a gelatina em pó Adicione uma xícara de água leve ao fogo até ferver levemente e dissolver a gelatina e o caldo de carne 3 Reserve e deixe esfriar brevemente Procedimento 2 Acondicionamento do meio de cultura em placa de Petri 1 Você encontrará as placas de Petri estéreis disponíveis para venda em lojas online Somente abra as placas no momento da transferência do meio para evitar a contaminação das mesmas 2 Para evitar a contaminação durante a manipulação das placas e transferência do meio de cultura Acenda o fogo de uma das bocas do fogão e manuseie a transferência no perímetro ao entorno no fogo 3 Transfira uma pequena quantidade do meio para as placas de Petri e aguarde sua solidificação em temperatura ambiente ou em geladeira para acelerar o processo caso seja necessário Mas lembre se caso tenha levado as placas para solidificação em geladeira antes de realizar o semeio prática 2 a mesma deverá estar em temperatura ambiente Escaneie ou clique sobre o QR Code Caro aluno a Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples Power point Para isso faça o download do template disponibilizado junto a este roteiro e siga as instruções contidas no mesmo Vídeo cultivando microrganismos em casa Parte 1 Disponível em httpswwwyoutubecomwatchvu3WfpYAjIc CONTROLE DO CRESCIMENTO MICROBIANO ANTISSEPSIA DAS MÃOS 1 Executar corretamente a higienização das mãos compreendendo a diferença entre o método simples e a antissepsia 2 Aplicar os conhecimentos obtidos na aula prática demonstrativa através da realização do semeio de amostras em meio de cultura O conceito de microbiologia é relativamente novo no entanto o controle dos microrganismos já era realizado a centenas de anos atrás O cozimento dos alimentos é um dos métodos de preservação dos alimentos mais antigo e que é empregado até hoje com algumas modificações Os microrganismos estão presentes em várias coisas que acontecem à nossa volta estão envolvidos na fermentação reciclagem de nutrientes fabricação de alimentos e bebidas na indústria farmacêutica medicina e na agricultura As descobertas que ocorrem na microbiologia ajudam os profissionais da saúde a compreender diagnosticar e tratar doenças que não são bem compreendidas Ao trabalharmos com o manuseio de microrganismos seja em um laboratório um hospital uma indústria dependemos de conhecer formas de controlar os microrganismos no ambiente em que se encontram Vários são os métodos que podem manter os microrganismos em uma população estável e a melhor a ser escolhida depende do que você quer destruir Durante a quebra da teoria da geração espontânea os cientistas da época comprovaram que a fervura poderia matar muitos microrganismos embora bactérias esporulantes pudessem sobreviver devido à sua resistência ao calor Os cientistas descobriram que os microrganismos poderiam ser mortos quando expostos a várias substâncias químicas ou de serem removidos do ar ou de um líquido utilizando filtros especiais Caro aluno a Na presente atividade prática você dará sequência na aula prática 1 cujo preparou os meios de cultura bacteriano e agora irá realizar o cultivo de bactérias presente no cotidiano É de conhecimento cientifico que as infecções relacionadas com os profissionais da área se devem a higienização incorreta das mãos Portanto vocês irão semear no meio de cultivo amostras coletas de mãos não higienizadas higienizada apenas com álcool 70 e amostra obtida após a realização correta da antissepsia com álcool iodado VÍDEOPOCKET LEARNING EMBASAMENTO TEÓRICO As substâncias antimicrobianas são aquelas que matam ou inibem o crescimento dos microrganismos Dependendo do microrganismo afetado se tornam específicos como antibacterianos antifúngicos antiprotozoarios e antiviral Os agentes antimicrobianos que matam os microrganismos são denominados de microbicidas As denominações bactericidas e fungicidas indicam o tipo de microrganismo destruído E quando ocorre a destruição de todos os microrganismos presentes em um material é denominado de esterilização No entanto tem os agentes que inibem o desenvolvimento do microrganismo que são chamados microbiostáticos e claro que muitas definições podem surgir sendo os mais utilizados fungistático e bacteriostático Os agentes de controle dos microrganismos podem sofrer grande influência de vários fatores ambientais bem como as características biológicas do microrganismo Dentre as variáveis de maior importância a serem consideradas quando se quer avaliar a eficácia de uma agente antimicrobiano são o tamanho da população microbiana Intensidade ou concentração do antimicrobiano tempo de exposição ao agente microbiano temperatura que os microrganismos são expostos ao agente antimicrobiano natureza do material que contém microrganismos e característica do microrganismo presente Em relação ao tamanho da população quanto maior for mais tempo vai levar para morrer Quanto menor for a intensidade ou a concentração do antimicrobiano mais tempo se leva para destruir uma população de microrganismos E quando se leva em consideração o tempo de exposição quanto maior for o tempo maior será o número de células mortas Os agentes microbianos são classificados como agentes físicos e químicos A ocorrência da redução do número de microrganismos por meio de um método físico ou químico é denominado de Escaneie ou clique sobre o QR Code desinfecção Enquanto a esterilização é a destruição de todas as formas de vida microbiana fungos bactérias e vírus seja por meio da aplicação de um método físico ou químico Entre os agentes físicos temos o calor a flambagem a filtragem e a radiação Todavia os métodos químicos utilizam substâncias que têm capacidade de matar ou inibir o crescimento de um microrganismo Dentre os métodos químicos podemos citar os gases tóxicos e as soluções desinfetantes Entre as soluções desinfetantes mais utilizadas nos laboratórios de microbiologia podemos citar o álcool 70 ou hipoclorito de sódio e o peróxido de hidrogênio O álcool 70 é amplamente utilizado na obtenção do microrganismo em cultivo puro como também em superfícies de trabalho e câmara de fluxo Quando utilizamos o álcool 70 para desinfetar fragmentos estes ficam de 30 a 60 segundos mergulhados no álcool 70 O hipoclorito de sódio ou cálcio é eficiente para eliminar microrganismos oportunistas da superfície dos tecidos O hipoclorito de sódio ou cálcio é utilizado nas concentrações de 005 a 01 E o peróxido de hidrogênio é usado na concentração de 5 pv A higienização do laboratório é imprescindível temos que estar atentos a vários cuidados de assepsia e o material a ser utilizado pois qualquer corpo estranho pode levar a risco todo o trabalho experimento ou resultado de uma pesquisa IMPORTÂNCIA DA HIGIENIZAÇÃO DAS MÃOS De acordo com as comprovações científicas as mãos são responsáveis pela transmissão das infecções relacionadas a assistência à saúde portanto é de suma importância a realização de procedimentos de higienização das mãos para diminuir as taxas de infecções principalmente entre os profissionais de saúde A higienização correta das mãos é uma medida individual simples e imprescindível para prevenir a propagação das infecções A higienização das mãos pode ser simples antisséptica fricção antisséptica e a antissepsia cirúrgica das mãos A higienização das mãos possui as seguintes finalidades 1 Remoção de sujidade suor oleosidade pelos células descamativas e microbiota da pele interrompendo a transmissão de infecções veiculadas ao contato 2 Prevenção e redução das infecções causadas pelas transmissões cruzadas A utilização de agente antisséptico para higienização das mãos deve ter ação antimicrobiana imediata e efeito residual ou persistente Não devem ser tóxicos alergênicos ou irritantes para a pele Recomendase que sejam agradáveis de utilizar suaves e ainda ofereçam boa relação custo benefício dentre os agentes antissépticos disponíveis os mais utilizados são álcool e a clorexidina Os álcoois apresentam rápida ação e excelente atividade bactericida e fungicida usados para higienização das mãos são o etanol o isopropanol e o npropanol A clorexidina é um agente antisséptico cuja atividade antimicrobiana é mais lentamente que a dos álcoois sendo considerada de nível intermediário Porém seu efeito residual pela forte afinidade com os tecidos tornao o melhor antisséptico disponíveis CONSELHO REGIONAL DE FARMÁCIA DE SÃO PAULO 2010 A técnica de higienização das mãos se torna inadequado na prática diária pelo esquecimento de algumas etapas necessárias deste procedimento havendo preocupação por parte dos profissionais de saúde com a quantidade e não com a qualidade deste ato As principais falhas na técnica ocorrem principalmente pela não utilização de sabonete e a não observação das superfícies das mãos a serem friccionadas A higienização das mãos dos profissionais da saúde pode ser feita utilizando água e sabonete preparação alcoólica e antisséptico degermante As técnicas de higienização das mãos podem variar dependendo do objetivo ao qual se destinam a eficácia deste procedimento depende da duração e da técnica empregada 1 Higienização simples das mãos Possui a finalidade de remoção dos microrganismos que colonizam as camadas superficiais da pele assim como o suor a oleosidade e as células mortas retirando a sujidade propícia à permanência e à proliferação de microrganismos Duração do procedimento 40 a 60 segundos 2 Higienização antisséptica das mãos A finalidade dessa técnica é promover a remoção de sujidades e de microrganismos reduzindo a carga microbiana das mãos com auxílio de um antisséptico A técnica de higienização antisséptica é igual àquela utilizada para higienização simples das mãos com a diferença que o sabonete é substituído por um antisséptico degermante por exemplo clorexidina Duração do procedimento 40 a 60 segundos 3 Fricção antisséptica das mãos com preparações alcoólicas Esta técnica não proporciona a remoção de sujidades o objetivo é reduzir a carga microbiana das mãos A utilização de gel alcoólico preferencialmente a 70 ou de solução alcoólica a 70 com 13 de glicerina pode substituir a higienização com água e sabonete quando as mãos não estiverem visivelmente sujas Duração do Procedimento 20 a 30 segundos É importante salientar que alguns aspectos devem ser destacados antes de iniciar a técnica da higienização das mãos para reduzir a contaminação microbiana sobre esses aspectos devemos destacar É necessário retirar joias anéis pulseiras relógio Manutenção das unhas naturais limpas e curtas Não utilizar unhas postiças ou uso de esmaltes nas unhas Materiais de consumo Descrição Observação 3 Placas de Petri com meio de cultura PREPARADA NA AULA PRÁTICA1 Material fornecido pelo aluno Caneta marcadora permanente Material fornecido pelo aluno Álcool 70 Material fornecido pelo aluno 1 Frasco pequeno de soro fisiológico Material fornecido pelo aluno 1 Frasco de álcool iodado Material fornecido pelo aluno Swabs ou cotentes limpos Material fornecido pelo aluno Caixa de sapato Material fornecido pelo aluno Água correte Material fornecido pelo aluno Sabonete líquido Material fornecido pelo aluno Papel toalha para secagem das mãos ou toalha limpa Material fornecido pelo aluno Softwareaplicativosimulador Sim Não X Em caso afirmativo qual Pago Não Pago Tipo de Licença Não se aplica Descrição do softwareaplicativosimulador Caso não seja necessário o uso do recurso preencher com Não se aplica NSA Caros alunos as Ao realizar a prática separe um espaço organizado limpo e arejado Separe todos os materiais necessários e coloqueos em uma disposição de fácil acesso e que permita que você fique confortável de preferência sentado respeitando uma postura correta Coloque o seu material em recipiente adequado para cada situação VÍDEO POCKET LEARNING PASSO A PASSO DA PRÁTICA Procedimento 1 Identificação das Placas de Petri Escolha um local confortável com superfície previamente higienizada para iniciar o experimento a Na aula prática 1 você preparou 3 meios de cultura sólidos em placas de Petri e após a solidificação dos meios poderá iniciar o experimento b Com o auxílio de uma caneta marcadora identifique as placas de Petri como 1 mão sem lavar 2 álcool 70 e 3 Antissepsia com álcool iodado Procedimento 2 Obtenção da amostra e semeadura nos meios de cultura Para as 3 etapas do experimento a amostra deverá ser obtida sempre da mesma mão podendo escolher realizar a coleta da mão direita ou esquerda a Com o auxílio de um swab ou cotonete limpo de preferência obtidos de embalagem lacrada sem estar no uso cotidiano O mesmo foi umedecido no soro fisiológico e friccionado sobre a pele da palma da mão sem estar higienizada Em seguida a amostra foi semeada na placa de Petri contendo a identificação mãos sem lavar 1 A semeadura consiste em depositar a amostra na placa de Petri em forma de estrias como mostrado na imagem abaixo Escaneie ou clique sobre o QR Code a Posteriormente foi realizado a higienize das mãos com álcool em gel 70 2 Um novo swab ou cotonete foi umedecido no soro fisiológico e esfregue na pele das mãos e realizado a semeadura na placa que estava identificada como álcool 70 b Para finalizar a última parte do experimento foi realizada a higienização das mãos com sabão de acordo com a técnica de lavagem das mãos Posteriormente foi realizada a antissepsia das mãos prélavadas com álcool iodado deixando agir por 1 minuto esperando secar ao ar A seguir foi utilizado outro swab ou cotonete umedecido no soro fisiológico e o mesmo foi friccionado na palma da mão lavada e feito antissepsia corretamente Após isto foi realizado a semeadura no meio de cultura identificado como antissepsia com álcool iodado III Procedimento 3 Crescimento microbiano a Acomode as placas dentro de uma caixa coloque em local seguro e em temperatura ambiente b Acompanhe o crescimento nos períodos de 24 48 e 72 horas c Fotografe a evolução do crescimento bacteriano durante este período pode ser que o crescimento bacteriano leve até uma semana para acontecer isto em casos de temperatura ambiente abaixo de 37C que seria a temperatura ideal de crescimento em laboratório OBSERVAÇÃO Caso queira acelerar o processo de crescimento bacteriano e a temperatura se sua cidade estiver fria o ideal que seja criado um ambiente aquecido imitando uma estufa E para isso basta acoplar uma lâmpada através de um foro na caixa de papelão e mantêla ligada na tomada Caro aluno a Você deverá entregar o Relatório tipo Apresentação Simples Neste caso estruture seu documento conforme apresentado a seguir Para isso faça o download do template em Power Point disponibilizado junto a este roteiro Vídeo correta lavagem das mãos httpswwwyoutubecomwatchvqR0ejxtrWk Vídeo aula prática antissepsia das mãos httpseaulasuspbrportalvideoactionidItem20059 Roteiro de Aula Prática da Universidade Federal da Paraíba Descrição de desinfecção esterilização assepsia e antissepsia httpportalvirtualufpbbrbiologiapdfroteiroAPBIOLOGIADEMICROORGANISMOSpdf