Lista de Exercicios - Imunoensaios ELISA Citometria de Fluxo Tolerancia Imunologica e Autoimunidade

Lista de Revisão 2BM Bases Patológicas e Imunológicas II 1 Os imunoensaios são baseados na detecção eou quantificação de antígenos anticorpos ou imunocomplexos Considerando seus conhecimentos prévios e análise da imagem abaixo Sobre a técnica de ELISA Enzymelinked immunosorbent assay Descreva as principais vantagens e desvantagens do seu uso Qual o princípio da técnica Quais enzimas são responsáveis pela liberação de cor no método Descreva as etapas de cada teste de ELISA direto indireto sanduíche e de competiçãobloqueio ressaltando como ocorre a reação antígeno anticorpo quando o substrato é adicionado e como se dá o padrão de coloração no processo de interpretação do resultado Por qual motivo é adicionada uma solução de bloqueio de ácido sulfúrico na reação Isso aumenta ou diminui a sensibilidade da técnica Qual a função da curva padrão Como é sua correspondência gráfica e como é realizada 2 A Citometria de fluxo é uma técnica utilizada para contar examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo Sobre a técnica de citometria de fluxo Descreva o princípio da técnica de citometria de fluxo Descreva como e por quais parâmetros as células são analisadas Descreva as quatro etapas de realização da imunofenotipagem marcação lise celular lavagem e aquisição 3 A resposta imune prevê uma fase de ativação e uma de desativação para voltar a homeostasia mecanismos definidos como efetores e regulatórios A respeito da tolerância imunológica e os conceitos de autoimunidade Conceitue tolerância imunológica tolerância central tolerância periférica e autoimunidade Quais os fatores promovem tolerância Em quais situações ocorrem as doenças autoimunes Em quais outras situações podem surgir problemas associados à tolerância imunológica O que é eritroblastose fetal O que é a Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro DECH Minha carinha quando for lançar a nota de quem não estudou Sebastião 2022 Lista de Revisão 2BM Bases Patológicas e Imunológicas II 1 Os imunoensaios são baseados na detecção eou quantificação de antígenos anticorpos ou imunocomplexos Considerando seus conhecimentos prévios e análise da imagem abaixo Sobre a técnica de ELISA Enzymelinked immunosorbent assay Descreva as principais vantagens e desvantagens do seu uso Vantagens do ELISA Alta sensibilidade e especificidade o ELISA é capaz de detectar quantidades muito pequenas de antígenos ou anticorpos com alta precisão Fácil de realizar o ELISA é um procedimento relativamente simples e de fácil execução mesmo por técnicos não especializados Barato o ELISA é uma técnica relativamente barata tornandoa acessível para uso em laboratórios de pesquisa e clínicos Versátil o ELISA pode ser usado para detectar uma ampla variedade de antígenos e anticorpos incluindo proteínas lipídios carboidratos e ácidos nucleicos Desvantagens do ELISA Pode ser demorado o ELISA pode levar várias horas para ser concluído dependendo do tipo de ensaio realizado Pode ser complexo o ELISA pode ser complexo de realizar dependendo da especificidade do ensaio Pode ser propenso a erros o ELISA pode ser propenso a erros devido à necessidade de manipulação cuidadosa das amostras e reagentes Qual o princípio da técnica Usando anticorpos para detectar um antígeno específico o ELISA é um ensaio imunoenzimático Em uma placa de microtitulação revestida com anticorpos específicos para o antígeno alvo o ensaio é realizado Posteriormente a amostra a ser testada é adicionada à placa onde os anticorpos da amostra se ligam aos anticorpos da placa A adição de outro anticorpo ligado a uma enzima à placa forma um complexo imunoquímico ao se ligar aos anticorpos na amostra Neste ponto uma reação catalisada pela enzima produz um produto colorido A quantidade de antígeno presente na amostra é diretamente proporcional à intensidade da cor produzida Quais enzimas são responsáveis pela liberação de cor no método Peroxidase de rábano HRP é uma enzima que catalisa a oxidação de substratos orgânicos para produtos coloridos É uma enzima mais comumente usada em ELISA porque é relativamente barata e fácil de usar Fosfatase alcalina FA é outra enzima que pode ser usada em ELISA É mais caro que o HRP mas é mais estável e pode ser usado em uma faixa mais ampla de pH βGalactosidase é uma enzima que catalisa a hidrólise da lactose para produzir glicose e galactose É uma enzima menos comumente usada em ELISA mas pode ser usada para detectar antígenos que se ligam especificamente à lactose Descreva as etapas de cada teste de ELISA direto indireto sanduíche e de competiçãobloqueio ressaltando como ocorre a reação antígeno anticorpo quando o substrato é adicionado e como se dá o padrão de coloração no processo de interpretação do resultado ELISA direto O antígeno é colado na placa Um anticorpo específico para o antígeno é adicionado O anticorpo se liga ao antígeno O substrato é adicionado A enzima ligada ao anticorpo faz uma reação que produz uma cor A intensidade da cor é proporcional à quantidade de antígeno Para interpretar o resultado comparamos a intensidade da cor com um padrão Se a cor for igual ou mais forte que o padrão a amostra é positiva para o antígeno ELISA indireto No ELISA indireto o antígeno é colado na placa Um anticorpo específico para o antígeno é adicionado O anticorpo se liga ao antígeno A amostra é adicionada Os anticorpos na amostra se ligam ao primeiro anticorpo Um segundo anticorpo ligado a uma enzima é adicionado O segundo anticorpo se liga aos anticorpos na amostra O substrato é adicionado A enzima ligada ao segundo anticorpo faz uma reação que produz uma cor A intensidade da cor é proporcional à quantidade de antígeno Para interpretar o resultado comparamos a intensidade da cor com um padrão Se a cor for igual ou mais forte que o padrão a amostra é positiva para o antígeno ELISA de sanduíche No ELISA de sanduíche o antígeno é colado na placa Um primeiro anticorpo específico para o antígeno é adicionado O anticorpo se liga ao antígeno Um segundo anticorpo também ligado a uma enzima é adicionado O segundo anticorpo se liga ao primeiro anticorpo O substrato é adicionado A enzima ligada ao segundo anticorpo faz uma reação que produz uma cor A intensidade da cor é proporcional à quantidade de antígeno Para interpretar o resultado comparamos a intensidade da cor com um padrão Se a cor for igual ou mais forte que o padrão a amostra é positiva para o antígeno ELISA de competiçãobloqueio No ELISA de competiçãobloqueio o antígeno é colado na placa Um anticorpo específico para o antígeno é adicionado A amostra que contém o antígeno a ser medido é adicionada O antígeno na amostra compete com o antígeno inmovilizado pela ligação ao anticorpo Um segundo anticorpo ligado a uma enzima é adicionado O segundo anticorpo se liga aos anticorpos que se ligaram ao antígeno O substrato é adicionado A enzima ligada ao segundo anticorpo faz uma reação que produz uma cor A intensidade da cor é inversamente proporcional à quantidade de antígeno presente na amostra Para interpretar o resultado comparamos a intensidade da cor com um padrão Se a cor for mais fraca que o padrão a amostra contém uma quantidade baixa de antígeno Se a cor for igual ou mais forte que o padrão a amostra contém uma quantidade alta de antígeno Por qual motivo é adicionada uma solução de bloqueio de ácido sulfúrico na reação Isso aumenta ou diminui a sensibilidade da técnica A solução bloqueada de ácido sulfúrico é adicionada à evidência ELISA para bloquear a ligação de anticorpos não específicos à placa Isto é importante para aumentar a sensibilidade da tecnologia pois reduz o número de falsos positivos Anticorpos inespecíficos são anticorpos que não são específicos para o antígeno que está sendo detectado Podem ser incorporados em qualquer superfície incluindo placas ELISA Se esses anticorpos não estiverem bloqueados podem ligálas à placa e produzir uma ocorrência falsa positiva A solução bloqueada de ácido sulfúrico é um ácido fraco que ajuda a inativar anticorpos inespecíficos Isso é feito desnaturando a proteína do anticorpo A desnaturação é o processo de alteração da estrutura tridimensional de uma proteína para que ela não possa se ligar a outras moléculas Portanto a adição de solução bloqueada de ácido sulfúrico pode aumentar a sensibilidade de um ELISA porque reduz o número de falsos positivos Qual a função da curva padrão Como é sua correspondência gráfica e como é realizada Função de curva padrão Uma curva padrão é um gráfico que relaciona a intensidade da cor com a quantidade de antígeno presente em uma amostra É usado para calibrar o ELISA e interpretar os resultados Correspondência gráfica A curva padrão é geralmente uma curva linear O eixo x representa a quantidade de antígeno presente na amostra e o eixo y representa a intensidade da cor Uma curva padrão é construída adicionando uma quantidade conhecida de antígeno a uma placa ELISA Em seguida o substrato é adicionado e a intensidade da cor é medida Os resultados são plotados em um gráfico e uma curva é ajustada por meio de regressão linear 2 A Citometria de fluxo é uma técnica utilizada para contar examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo Sobre a técnica de citometria de fluxo Descreva o princípio da técnica de citometria de fluxo O princípio da citometria de fluxo baseiase na passagem de uma suspensão de células ou partículas por um feixe de luz A luz é dispersada pelas partículas e a quantidade e o ângulo de dispersão da luz fornecem informações sobre as características das partículas Descreva como e por quais parâmetros as células são analisadas Tamanho O tamanho da célula pode ser medido por luz dispersa de pequeno ângulo Forma A forma de uma célula pode ser determinada espalhando a luz em grandes ângulos Densidade A densidade celular pode ser medida pela dispersão de luz de comprimento de onda mais longo Concentração A concentração de células pode ser medida pela intensidade da luz espalhada Reatividade A reatividade de uma célula pode ser medida pela ligação de anticorpos ou outros marcadores à célula Descreva as quatro etapas de realização da imunofenotipagem marcação lise celular lavagem e aquisição 1 Marcar Na etapa de rotulagem os marcadores celulares são anexados às células ou partículas a serem analisadas Os marcadores celulares podem ser anticorpos moléculas fluorescentes ou outras substâncias que podem ser detectadas por citometria de fluxo 2 Lise celular A lise celular é a quebra das membranas celulares liberando marcadores celulares que podem ser detectados por citometria de fluxo A lise celular pode ser realizada por diferentes métodos como lise enzimática mecânica ou química 3 Limpeza A lavagem é um passo importante para remover marcadores celulares que não estão ligados a células ou partículas Use tampão de lavagem sem marcadores de células para lavagem 4 Aquisição Durante a etapa de aquisição as células ou partículas marcadas são analisadas por citometria de fluxo A citometria de fluxo mede diferentes propriedades de células ou partículas incluindo tamanho forma dispersão de luz e fluorescência 3 A resposta imune prevê uma fase de ativação e uma de desativação para voltar a homeostasia mecanismos definidos como efetores e regulatórios A respeito da tolerância imunológica e os conceitos de autoimunidade Conceitue tolerância imunológica tolerância central tolerância periférica e autoimunidade A tolerância imunológica é a capacidade do sistema imunológico de não atacar as células e tecidos do próprio corpo A tolerância central é a tolerância que ocorre na medula óssea e no timo Nestes órgãos as células do sistema imunológico são expostas a autoantígenos e as células capazes de responder a esses antígenos são eliminadas A tolerância periférica é a tolerância que ocorre nos tecidos periféricos Nestes tecidos as células imunitárias podem ser suprimidas por células reguladoras ou podem ser induzidas a tornaremse inativas A autoimunidade é uma condição na qual o sistema imunológico ataca as próprias células e tecidos do corpo Isso ocorre quando a tolerância imunológica é quebrada Quais os fatores promovem tolerância Eliminação de células autorreativas As células do sistema imunológico capazes de responder aos autoantígenos são eliminadas na medula óssea e no timo Isso ocorre por meio de um processo chamado apoptose ou morte celular programada Supressão de células autorreativas As células do sistema imunológico capazes de responder a autoantígenos podem ser suprimidas por células reguladoras As células reguladoras são um tipo de células do sistema imunológico que suprimem as respostas imunológicas Anergia celular autorreativa A anergia pode ser induzida em células do sistema imunológico expostas a antígenos próprios Células anérgicas são células incapazes de responder ao antígeno Em quais situações ocorrem as doenças autoimunes As doenças autoimunes ocorrem quando o sistema imunológico ataca as próprias células e tecidos do corpo Isso acontece quando a imunidade é quebrada A diminuição da tolerância imunitária pode ser causada por vários fatores incluindo Fatores genéticos A predisposição genética é um factor importante no desenvolvimento de doenças autoimunes Pessoas com histórico familiar de doenças autoimunes correm maior risco de desenvolver essas doenças Fatores ambientais Fatores ambientais como infecção exposição a toxinas e estresse podem contribuir para o desenvolvimento de doenças autoimunes Em quais outras situações podem surgir problemas associados à tolerância imunológica Rejeição de transplante Eritroblastose fetal Doença do enxerto contra o hospedeiro DECH O que é eritroblastose fetal É uma doença que ocorre quando o sistema imunológico da mãe ataca os glóbulos vermelhos do feto Isso ocorre quando a mãe é Rhnegativa e o feto é Rhpositivo O que é a Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro DECH DECH é uma doença que ocorre quando o sistema imunológico do doador de um transplante ataca o corpo do receptor Isso ocorre quando o sistema imunológico do doador não é tolerado pelo corpo do receptor Minha carinha quando for lançar a nota de quem não estudou Sebastião 2022