Prática 7: Extração de DNA Vegetal

Email heloisamaltezufabcedubr BC0308 Bioquímica Estrutura Propriedades e Funções de Biomoléculas Parte Prática PRÁTICA 7 EXTRAÇÃO DE DNA VEGETAL 1 Profa Heloisa França Maltez Universidade Federal do ABC DNA Introdução Os ácidos nucléicos são substâncias ácidas presentes no núcleo das células e estão envolvidas no armazenamento na transmissão e no processamento das informações genéticas de uma célula Existem dois tipos de ácidos nucléicos o ácido desoxirribonucléico DNA e o ácido ribonucléico RNA O DNA codifica a informação hereditária de um organismo e controla o crescimento e a divisão das células Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA Moléculas como o DNA e RNA são ácidos nucleicos que podem ser definidos de maneira simplificada como polímeros de nucleotídeos Um nucleotídeo é formado pela ligação covalente entre uma base nitrogenada purina ou pirimidina um açúcar ribose ou desoxirribose e um resíduo de ácido fosfórico Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA Açúcar Pentose Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA De acordo com a estrutura as bases nitrogenadas podem ser do tipo purínicas ou pirimidínicas Bases purínicas são representadas pela adenina A e guanina G Bases pirimidínicas por citosina C timina T e uracila U esta última ausente em nucleotídeos formadores de DNA Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA DNA tem uma espinhadorsal que é um açúcar desoxiribose um grupo fostato PO4 sempre o mesmo O que varia ao longo da cadeia são as bases ligadas às moléculas de açúcar Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA Esqueleto açúcarfosfato forma a parte externa da hélice As cadeias estendemse em direções antiparalelas uma da extremidade 3 para a extremidade 5 e a outra de 5 para 3 Ligações de hidrogênio entre as bases em cadeias opostas determinam o alinhamento da hélice com os pares de bases posicionados em planos perpendiculares ao eixo da hélice Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA Universidade Federal do ABC Composição Química e estrutura do DNA Universidade Federal do ABC DNAB é considerada a principal forma do DNA encontrada na natureza Contudo outros tipos de estruturas da molécula como DNAA e DNAZ também podem ocorrer dependendo entre outros fatores da sequência de bases que forma as moléculas Desnaturação do DNA Abertura das fitas Calor Tratamento com álcalis dupla hélice desnaturalização anelamento DNA parcialmente desnaturalizado separação das fitas Associação por pareamento fitas separadas em random coils Objetivo geral Compreender a aplicação dos conceitos teóricos adquiridos durante as aulas sobre a conformação espacial do DNA Universidade Federal do ABC Prática 7 OBJETIVOS ESPECÍFICOS a Compreender o método de extração de DNA celular b Compreender a metodologia para detecção do SARSCoV2 por RTPCR teste padrão ouro para identificação da COVID19 MATERIAL DE APOIO Universidade Federal do ABC Procedimento e Atividade 1 Pesar 6 g de cloreto de sódio no béquer de 250 mL e adicionar 100 ml de água destilada Acrescentar 10 ml de detergente líquido neutro Misture vagarosamente com um bastão de vidro esta é a solução de lise 2 Pique meia cebola em pequenos pedaços coloqueos no almofariz e pequena quantidade da solução de lise e triture com o uso do pistilo Transferir a massa formada para o outro béquer de 250 ml Lavar o almofariz com solução de lise e sempre adicionar ao béquer Misturar vagarosamente com o bastão de vidro Cubra o béquer com filme plástico Quanto mais triturada estiver a cebola maior será sua superfície de contato com a solução de lise e maior a liberação de moléculas de DNA 3 Incubar o béquer contendo cebola triturada em banhomaria a 70 C por 20 min Universidade Federal do ABC Procedimento e Atividade 4 Retire o béquer do banhomaria filtre o material utilizando o funil e papel de filtro e recolha o filtrado em outro béquer de 250 ml Coloque 20 ml do filtrado em um béquer de 50 ml 5 Coloque o béquer com o material filtrado em um banho de gelo e deixe esfriar por 5 min 6 Retire o béquer do banho de gelo e adicione com a pipeta Pasteur o álcool gelado escorrendo bem vagarosamente pela parede do béquer Não agitar o álcool com a solução O volume de álcool deve ser aproximadamente igual ao do material filtrado adicionado ao béquer Aguardar cerca de 10 minutos 7 Observar o precipitado como uma nuvem esbranquiçada no fundo da fase alcoólica conforme figura a seguir Com o bastão de vidro limpo faça movimentos circulares buscando retirar a amostra de DNA da mistura Universidade Federal do ABC Procedimento e Atividade Universidade Federal do ABC Procedimento e Atividade ANÁLISE DOS DADOS 1 Por que foi necessário macerar a cebola e utilizar de detergente e sal de cozinha Qual a função destes E do álcool 2 Compare os resultados obtidos nesse experimento com os que estão apresentados por Rodrigues et al 2008 e disponível em httpbotanicaonlinecombrgeralarquivosbmaterial6pdf acesso em 130917 e responda qual possibilita melhor identificação visual do DNA 3 Por que proteína e DNA podem sofrer alterações na estrutura química em presença de etanol Justificar a resposta com o uso de estruturas químicas e interações intermoleculares possivelmente envolvidas 4 A partir da realização desse experimento seria possível afirmar que houve precipitação de DNA Há limitações experimentais Apontar vantagens e desvantagens no uso desse experimento para o ensino de bioquímica 17 Bons Estudos Universidade Federal do ABC MATERIAIS DE APOIO 1 objeto de aprendizagem sobre extração de DNA no link abaixo httpslearngeneticsutaheducontentlabsextraction 2 objeto de aprendizagem sobre teste RTPCR para SARSCoV2 no link abaixo httpscontentdnalcorgcontentc1717149covid19rtpcrtestinghtml OBSERVAÇÃO Estes objetos de aprendizagem funcionam corretamente quando acessados com os navegadores Chrome e Microsoft Edge ORIENTAÇÕES PARA ESTUDO CAMPBELL MK FARREL SO Bioquímica 8 ed São Paulo Cengage Learning 2015 812 p PINHATI FR Eletroforese de DNA dos laboratórios de biologia molecular para as salas de aula Química Nova na Escola v37 n4 p316319 Nov2015 THIEMANN OH A descoberta da estrutura do DNA de Mendel a Watson e Crick Química Nova na Escola n17 p1319 Mai2003 NELSON DL COX MM Lehninger Princípios de Bioquímica 4 ed São PauloSarvier 2006 1202 p