Responder as Questões Manuscrita

DEVERÁ CONSTAR NOME RGM DO ALUNO E DISCIPLINA no cabeçalho da primeira página ou folha A atividade deverá ser feita à manuscrito ou seja as respostas deverão ser feitas de próprio punho O aluno deverá copiar a pergunta Não serão aceitos respostas por meio de computador ou outro sistema de escrita via computador ou tablet etc O aluno deverá escanear ou bater foto do material de forma que tenha qualidade para leitura e sem ter cortes na imagem Esse material deverá ser submetido na plataforma Teams na data estabelecida NÃO serão aceitas atividades entregues fora do prazo estabelecido Aula 7 Enzimas de Restrição e Mapas de Restrição 1 Explique o papel das enzimas de restrição nas bactérias e como essa função natural foi aproveitada na biotecnologia moderna Resposta 2 Descreva o processo de construção de um mapa de restrição utilizando digestões múltiplas Quais informações ele fornece Resposta 3 Qual é a importância da digestão parcial na elaboração de mapas de restrição e como ela é realizada Resposta Aula 8 Síntese de Oligonucleotídeos CRISPRCas9 e PCR 4 Explique como ocorre a síntese química de oligonucleotídeos em fase sólida e qual é a direção de síntese adotada nesse processo Resposta Aula 8 Síntese de Oligonucleotídeos CRISPRCas9 e PCR 4 Explique como ocorre a síntese química de oligonucleotídeos em fase sólida e qual é a direção de síntese adotada nesse processo Resposta 5 O que é o sistema CRISPRCas9 e como ele foi adaptado para edição genômica Resposta 6 Compare as técnicas de PCR convencional qPCR e RTPCR em termos de princípio finalidade e aplicações práticas Resposta Aula 7 Enzimas de Restrição e Mapas de Restrição 1 Explique o papel das enzimas de restrição nas bactérias e como essa função natural foi aproveitada na biotecnologia moderna As enzimas de restrição também chamadas de endonucleases de restrição são produzidas por bactérias como mecanismo de defesa contra vírus fagos degradando o DNA invasor Na biotecnologia essas enzimas são usadas para cortar DNA em locais específicos permitindo a clonagem gênica construção de vetores mapeamento genético e outras técnicas de engenharia genética As enzimas de restrição são proteínas produzidas naturalmente por bactérias como um mecanismo de defesa contra vírus bacteriófagos Elas reconhecem sequências específicas de DNA geralmente palindrômicas e cortam o DNA viral nesses pontos impedindo sua replicação dentro da célula hospedeira Chamadas de tesouras moleculares que permitem Cortar moléculas de DNA em locais específicos Inserir genes de interesse em vetores como plasmídeos Construir DNA recombinante para clonagem produção de proteínas e manipulação genética 2 Descreva o processo de construção de um mapa de restrição utilizando digestões múltiplas Quais informações ele fornece O mapa de restrição é construído utilizando diferentes enzimas de restrição isoladamente e em combinações que cortam o DNA em locais específicos Ao comparar os tamanhos dos fragmentos gerados em cada digestão por eletroforese é possível determinar a localização dos sítios de corte ao longo do DNA Um mapa de restrição mostra as posições exatas dos sítios de corte de uma ou mais enzimas de restrição em uma molécula de DNA O processo ocorre em etapas 1 O DNA é cortado separadamente por diferentes enzimas de restrição 2 Depois são feitas digestões duplas ou múltiplas combinando duas ou mais enzimas 3 Os tamanhos dos fragmentos gerados são analisados por eletroforese em gel 4 A partir desses tamanhos é possível determinar a ordem dos sítios de corte e montar o mapa físico da molécula 3 Qual é a importância da digestão parcial na elaboração de mapas de restrição e como ela é realizada A digestão parcial é importante para mapear sítios de restrição próximos ou sobrepostos Ela é realizada controlando o tempo da digestão ou a quantidade de enzima de modo que nem todas as cópias do DNA sejam totalmente digeridas Isso gera uma variedade de fragmentos que ajudam a determinar a ordem dos sítios de restrição ao longo da molécula A importância é que permite identificar sobreposição de fragmentos de diferentes comprimentos é essencial para elaborar mapas de restrição completos pois ajuda a determinar a ordem e distância entre os sítios de corte Aula 8 Síntese de Oligonucleotídeos CRISPRCas9 e PCR 4 Explique como ocorre a síntese química de oligonucleotídeos em fase sólida e qual é a direção de síntese adotada nesse processo A síntese de oligonucleotídeos é um processo químico automatizado que produz pequenas sequências de DNA ou RNA até 200 bases A síntese ocorre em fase sólida onde o primeiro nucleotídeo é ligado a um suporte sólido resina São adicionados sequencialmente nucleotídeos protegidos que reagem um a um Após cada ciclo as proteções químicas são removidas e o próximo nucleotídeo é adicionado No final o oligonucleotídeo é liberado do suporte e purificado A Direção da síntese ocorre no sentido 3 5 ou seja o novo nucleotídeo é adicionado à extremidade 5 em crescimento o inverso da direção de síntese biológica que é 5 3 5 O que é o sistema CRISPRCas9 e como ele foi adaptado para edição genômica O sistema CRISPRCas9 é uma ferramenta natural de defesa bacteriana contra vírus As bactérias usam RNA guia gRNA para direcionar a enzima Cas9 ao DNA invasor e cortálo Na edição genômica esse sistema foi adaptado para cortar DNA em locais específicos de interesse em células eucarióticas permitindo a inserção deleção ou modificação de genes com alta precisão A especificidade vem do RNA guia que é desenhado para se complementar ao gene alvo Os cientistas modificaram o sistema para projetar um RNAguia sgRNA que reconhece qualquer sequênciaalvo no genoma A Cas9 corta o DNA da célulaalvo nesse ponto O corte é reparado pela célula permitindo inserção deleção ou correção de genes 6 Compare as técnicas de PCR convencional qPCR e RTPCR em termos de princípio finalidade e aplicações práticas PCR convencional Amplifica fragmentos específicos de DNA Detecta presençaausência de alvos genéticos Aplicações clonagem detecção de patógenos testes forenses qPCR quantitativa Amplifica e quantifica DNA em tempo real usando sondas fluorescentes Permite análise quantitativa da expressão gênica ou carga viral RTPCR Realiza transcrição reversa de RNA para DNA complementar cDNA seguida de PCR É usada para estudar expressão gênica Pode ser combinada com qPCR RTqPCR para quantificação de RNA Técnica Princípio Finalidade Aplicações PCR convencional Amplificação exponencial de um fragmento de DNA por ciclos de desnaturação anelamento e extensão Obter grandes quantidades de um fragmento específico de DNA Diagnósticos genéticos clonagem identificação forense qPCR PCR quantitativa ou em tempo real Igual à PCR mas com detecção da amplificação em tempo real via fluorescência Quantificar a quantidade inicial de DNA em uma amostra Diagnóstico viral expressão gênica controle de qualidade RTPCR PCR com transcriptase reversa Converte RNA em DNA complementar cDNA usando transcriptase reversa e depois amplifica o cDNA Detectar e quantificar RNA expressão gênica vírus de RNA Diagnóstico de COVID19 estudos de expressão gênica