Resumo RNAi e CRISPR-CAS9: Mecanismos de Silenciamento Gênico e Edição Genômica

ATIVIDADE NÃO PRESENCIAL DP BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR 2 MEDICINA PROF MARCUS VINICIUS DE OLIVEIRA Instruções para alunos de DP em Biologia 2 29052023 Tema RNA reguladores CRISPRCAS9 RNAi 1 Ler o capítulo do livro na biblioteca virtual httpsintegradaminhabibliotecacombrbooks9788582712092cfi73444000000 para acessar o livro o aluno deverá estar previamente logado na biblioteca virtual Assistir os vídeos indicados httpswwwyoutubecomwatchvLhWK1IZLtFk httpswwwyoutubecomwatchvt5jroSCBBwk httpswwwyoutubecomwatchvN1uz8AYx8h0 Para consolidar os conhecimentos os alunos devem fazer um resumo sobre RNAs de interferência e sobre a técnica de CRISPRCAS9 máximo 3 páginas ATIVIDADE NÃO PRESENCIAL DP BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR 2 MEDICINA PROF MARCUS VINICIUS DE OLIVEIRA Em 2006 os mecanismos de RNA de interferência ficaram bastante conhecidos por ter sido o tema dos pesquisadores que ganharam o prêmio Nobel de Medicina e Fisiologia daquele ano Tecnicamente a interferência por RNA RNAi é conhecida por ser um mecanismo celular onde ocorre o silenciamento gênico pós transcricional sobre o RNA mensageiro Teremos uma fita dupla de RNA dsRNA double stranded RNA que será incorporada no citoplasma e se ligara a uma sequência de nucleotídeos no mRNA alvo causando um silenciamento por inibiçãodegradação da tradução do mRNA Os dsRNAs podem ser classificados de acordo com sua origem e função em miRNAs microRNAs conhecidos como dsRNA endógeno possuem 22 nucleotídeos e dentre suas funções a principal é o silenciamento pós transcricional inibidor da tradução do mRNAalvo em proteínas Atualmente ele é amplamente usado como regulador da expressão genica de animais e plantas Além disso os miRNAs tem genes que são transcritos pela RNA polimerase II e em seguida o microRNA primário primiRNA é clivado por um complexo proteico RNase III proteína Pasha ou DGCR8 siRNAs short interfering RNAs possuem dupla fita de 19 a 30 pb causam a degradação do RNA mensageiro alvo a partir do pareamento de sequencias complementares com o mesmo shRNAs short hairpin RNAs possuem fita dupla com estrutura semelhante aos miRNA Podem introduzidos já prontos na célula ou transcrito pela Dicer de forma semelhante ao miRNA O potencial conhecido do RNAi é sua capacidade no silenciamento de uma variedade de genes codificadores de proteínas e por ter uma alta especificidade esse método permite uma interferência em alelos relacionados a doenças que são diferentes dos alelos normais apenas por poucos nucleotídeos Visto isso o emprego do mesmo tem sido uma abordagem terapêutica promissora para o combate a expressão anormal de genes que contribuem para doenças infecções virais doenças autoimunes doenças genéticas dominantes e câncer Outrossim técnicas de edição genica são ferramentas de larga escala e parceiras na prevenção e promoção de doenças com elas conseguimos a produção de insulina atuam contra tumores malignos são usadas em vacinas e também tem seu uso para permitir o cultivo de plantas mais nutritivas e com mais agilidade entre outros Uma dessas técnicas é a ferramenta CRISPRCas9 Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas que tem um potencial para ser um instrumento de tratamento de várias enfermidades O sistema CRISPRcas9 foi descoberto por meio do estudo de mecanismos de defesa de bactérias onde endonucleases especificas Cas9 atuam na clivagem de genes do invasor e transformaos em sequencias de nucleotídeos menores que são inseridos em sítios do genoma bacteriano lócus CRISPR Fundamento a isso esse sistema vem sendo um dos recursos mais explorados para terapias genicas pois nesse lócus podem ocorrer processos de transcrição levando a uma sequencia de RNA direcionadora que tem a função de reconhecimento de genes através do pareamento de bases nitrogenadas e proteínas Cas formando um complexo de degradação do material genético invasor O sucesso nos estudos do sistema CRISPRcas9 se dá a sua facilidade de ajuste em diversas linhagens celulares e de uma variedade de organismos assim em estudos para o tratamento de patologias humanas esperase como resultado a reparação de mutações genéticas Dessa forma a técnica de duplo corte das cadeias de DNA DSB realizada pela Cas9 é a mais explorada e temos duas vias de reparo celular quando ocorre o DBS União de extremidades não homólogas NHEJ e o Reparo direcionado por homologia HDR A União de extremidades não homólogas NHEJ é um via de células eucarióticas nela ocorre a ligação das extremidades do DNA após a DBS unindo as duas pontas de forma direta Porem essa via tem maior chance de ocasionar mutações e por isso ela mais usada para a indução de mutações controladas ou inativação de genes alvos O Reparo direcionado por homologia HDR usa a homologia entre as extremidades usando um DNA que servirá como doador Essa via é mais maleável ou seja ela permite mais modificações de genes alvos incorporando sequencias de DNA ou reestabelecendo a função normal Assim sendo uma tecnologia nova ela é limitada por fatores bioéticas mas isso não impede seu estudo em modelos animais ou em culturas somáticas humanas Seu uso na cardiologia no silenciamento de genes PCSK9 através da via de União de extremidades não homólogas e no tratamento de hemoglobinopatias são as pesquisas que mais chamam atenção no âmbito acadêmico e que corrobora com o sucesso e fama que a mesma vem alcançando entre pesquisadores Ils ont posé la première pierre de limmeuble A2 du futur quartier Griffon Sud le 11 octobre 2022 Une opération immobilière qui marquera la naissance dun nouveau quartier traversé par un vaste parc linéaire et connecté au centreville dAnnecy et au c Hall St Maurice Le groupe Boiron qui devrait quitter ses locaux de Sevrier dici 2030 est lun des principaux acteurs de ce projet urbain qui bouleverse la zone verte de la ville afin de construire plus de logements et de services Annecy est une ville qui se densifie