Fluxograma de Experimento

Reação Colocamos 05 mL de Enzima Saliva no tubo 0246 Em seguido acrescentamos 29 mL de solução de Na Cl no tubo 0246 Em seguido acrescentamos 10 mL de TCA no tubo 0 Colocamos também 50 mL de solução de amido Colocamos 10 min o tubo 2 na temperatura de 37 graus 20 min o tubo 4 na Temperatura de 37 graus 30 min o tubo 6 na temperatura de 37 graus Usamos para aquecer a águaá chapa aquecedora Neste intervalo do 030 min acrescentamos 10 mL de TCA no tubo 246 acrescentamos 2 gotas de lugol nos tubos 0246 No tubo 0 o tempo denominado tempo zero Nele não ocorre a atuação da enzima no respectivo substrato Resultados Tubo 0 fica Azul escuro Tubo 2 Azul claro Tubo 4 Azul tonalizado para roxo Tubo 6 Roxo escuro Prática Determinação da atividade da amilase salivar de acordo com o tempo de reação Objetivo Testar a atividade enzimática da saliva humana diluída com solução salina fisiológica NaCl 09 em diferentes tempos A reação será paralisada pela adição de ácido tricloroacético TCA a 5 e o resultado observado após a adição de lugol Soluções Amido solução de amido 01 01g100ml em solução de NaCl 09 salina fisiológica Enzima alfaamilase de saliva solução de NaCl 09 solução de Lugol I2 I solução de TCA 5 Ácido Tricloroacético Materiais Tubos de ensaio 14 por bancada Pipeta graduada de 1mL por bancada Pipeta graduada de 10mL por bancada Proveta graduada de 10mL por bancada Procedimento Transfira da boca para um tubo de ensaio 1mL de saliva Pipete exatamente 01ml100uL desta saliva para uma proveta graduada de 10mL Complete o volume até 10mL com solução salina e misture cuidadosamente bem o conteúdo A seguir numere os 5 tubos de ensaio Siga o quadro abaixo para adição dos reagentes Tubo 0 01mL 100uL Tubo 1 01mL 100uL Tubo 2 01mL 100uL Tubo 3 01mL 100uL Tubo 4 01mL 100uL Tubo 5 01mL 100uL Tubo 6 01mL 100uL Enzima Colocar por último Solução de NaCl 09 29mL 29mL 29mL 29mL 29mL 29mL 29mL TCA 5 10mL Solução de amido 01 50mL 50mL 50mL 50mL 50mL 50mL 50mL Tempo 0min 5 min 10 min 15min 20 min 25 min 30 min NESTE INTERVALO MARCAR O TEMPO DE REAÇÃO 0 30 min TCA 5 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL Lugol gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas Tempo zero O tubo controle é denominado tempo zero Nele não ocorre a atuação da enzima no respectivo substrato Isso significa que a amilase terá sido desnaturada pelo ácido tricloroacético antes de entrar em contato com o substrato Determinação da atividade da amilase salivar de acordo com a concentração enzimática Objetivo Acompanhar a hidrólise do amido utilizando um catalisador biológico enzima Procedimento Coloque em cada um dos tubos previamente numerados 1ml de solução NaCl 09 Posteriormente adicionar 100μL da solução da enzima saliva solução de NaCl 09 no tubo 1 misture bem e retire 1ml da mistura feita neste tubo e transfira para o segundo tubo tubo 2 procedendo da mesma forma Repita a operação nos tubos restantes da série Retire 1ml da mistura do último tubo e despreze Adicione a cada um dos tubos 2ml da solução de amido 01 Misture Coloque a bateria de tubos num banho Maria a 37C por 30 minutos e resfrie para interromper o processo enzimático Revelar o resultado adicionando a cada tubo 1 a 2 gotas da solução de Lugol e misture Fazer também um branco de reação Tubo 0 com água destilada substituindo a enzima O teste é considerado positivo para o amido quando apresenta cor azul intensa Tubo 0 Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Enzima Colocar por último 01mL 100μL 01mL 100μL 01mL 100μL 01mL 100μL 01mL 100μL 01mL 100μL 01mL 100μL Solução de NaCl 09 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL Solução de amido 01 29mL 29mL 50mL 50mL 50mL 50mL 50mL H2O 01mL 100μL tempo 0min 5 min 10min 15min 20 min 25 min 30 min NESTE INTERVALO MARCAR O TEMPO DE REAÇÃO 30 min Lugol gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas Observar a em que tubos aparece a cor azul b qualis as cores que aparecem nos outros tubos c anotar os resultados e explicar o que ocorreu ao se fazer o ensaio com diferentes diluições da enzima Anotar os resultados Prática aminoácidos e proteínas Tubo 1 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N 2 mL albumina Agitar bem lilás Indicador proteína Tubo 2 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N 2 mL gelatina 1 Agitar bem lilás Indicador proteína Tubo 3 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N 2 mL caseina 1 Agitar bem lilás Indicador proteína Tubo 4 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N 2 mL glicina 1 Agitar bem azul Indicador aminoácido Tubo 5 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N Agitar bem azul Indicador aminoácido Tubo 6 10 gotas CuSO4 05 2 mL NaOH 2N 2 mL água destilada Agitar bem azul Indicador aminoácido MODELO