Grafico da Reta Peso Seco e Turbidimetria

Acompanhamento de cultivo em batelada de Saccharomyces cerevisiae OBJETIVO Determinar a concentração celular em cultivos em batelada INTRODUÇÃO A fermentação em batelada pura tem sido aplicada para obter dados cinéticos fundamentais para analisar o comportamento do microorganismo frente à ampliação de escala tensão de cisalhamento inibições por substrato células ou produtos Essas primeiras informações norteiam a configuração do processo Quando essas informações são conhecidas o objeto de pesquisa é testado na configuração batelada alimentada em que altas produtividades e conversões são alcançadas O estudo cinético de um processo de crescimento de microrganismos consiste inicialmente na análise da evolução dos valores de concentração de um ou mais componentes do sistema Por componentes do sistema entendese microrganismo biomassa X substratos do meio de cultura S produto ou metabólito P MATERIAL E MÉTODOS MATERIAIS POR TOMADA DE AMOSTRA Ponteiras autoclavadas 1000 μL e 100 μL Micropipetas de 1000 μL e 100 μL Tubos eppendorfs Estantes para tubos Eppendorf Cubetas de plástico de 15 mL Tubos de ensaio Estantes para tubos de ensaio Água destilada para diluição Álcool 70 Luvas METODOLOGIA PARA TOMADA DE AMOSTRA 1 Inicialmente devese passar álcool 70 dentro do fluxo laminar 2 Colocar micropipetas ponteiras Eppendorf tubos de ensaio e demais materiais no fluxo laminar 3 Ligar a luz UV e aguardar 20 minutos 4 Retirar os frascos Erlenmeyers do shaker e levar para o fluxo laminar 5 Para cada ensaio repetir o seguinte procedimento Para determinação de concentração celular por peso seco Usando luvas coletar 1000 μL de amostra em quadriplicata em tubos Eppendorf previamente pesados Centrifugar os tubos a 12000 rpm por 5 min Descartar o sobrenadante e ao tubo contendo a massa celular lavar com 1000 μL de água agitar em vórtex e centrifugar novamente Descartar o sobrenadante e levar os tubos para estufa até peso constante Para determinação de concentração celular por turbidimetria Coletar 100 μL de amostra em triplicata e colocar em tubos de ensaio Fazer a diluição apropriada usando água destilada e fazer as leituras em espectrofotômetro a 600 nm RESULTADOS ESPERADOS 1 Faça um gráfico apresentando a concentração celular pelas duas metodologias eixo Y em função do tempo eixo X usando a média e apresentando as barras de desvios para cada metodologia em cada tempo de cultivo 2 Explique as possíveis diferenças entre os resultados de concentração celular pelas duas metodologias 3 O que seria necessário analisar experimentalmente para calcular o parâmetro cinético YXS Eppendorf Peso Eppedorf g Peso Eppendorf bmassa seca 1 40 657 1 3 μL h 2 μL 10 3 int 3m 4hr 198 L 6 0 1 1 1 80m 40m 4h 0 40 m 4 hr 47 42 40m 40m 4hr X gL