Planilha de Atividades a - Kreuzer H

Ao adicionar a sonda à amostra é possível observar se ela hibridizará com alguma região do DNA Se a sonda é hibridizada ela aderirá ao DNA da amostra mas se não ela pode ser facilmente removida por lavagem Após enxaguar a sua amostra você expõe o material a um filme fotográfico para determinar se a sonda aderiu ao DNA e quando examinar o filme você saberá se houve hibridização ou não ou seja se a sequência de DNA da sonda está presente também em sua amostra Na planilha de atividades A você tem uma sequência de DNA de 380 pares de bases pb que representa sua amostra Toda décima base está em negrito e a base no começo de cada fita está numerada Você também tem uma sequência pequena que corresponde a uma sonda para o gene da hemocromatose HFE Você usará a sonda para determinar se o gene HFE está presente em sua amostra Figura 1 Planilha de atividades A Fonte adaptada de KREUZER H MASSEY A Engenharia Genética e Biotecnologia 2 ed Porto Alegre Artmed 2002 DESENVOLVENDO O TRABALHO Após ler atentamente essas informações faça o que se pede 1 EXAMINE a sequência de DNA da amostra planilha A para ver se a sonda será hibridizada a ela e em seguida RESPONDA se o gene da hemocromatose está presente ou não 2 Se você encontrou um lugar onde a sonda poderia ser hibridizada IDENTIFIQUEO grifar ou circular na sequência de DNA da planilha de atividade A e em seguida ANOTE a sequência 3 SIMULE a atividade de digestão da sua amostra com a enzima de restrição SmaI essa enzima corta a sequência de DNA 5 CCCGGG 3 entre o C e o G no meio da sequência e APONTE com uma seta todos os sítios de clivagem encontrados planilha A 4 INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultaram após a clivagem e os seus respectivos tamanhos Na planilha de atividades B utilize a mesma sequência de DNA da planilha A para responder aos objetivos das atividades 5 e 6 Instruções iniciais Utilize o modelo padrão de MAPA para realizar esta atividade Ele se encontra em Material da Disciplina Siga todas as instruções constantes nesse modelo Assista ao vídeo com as instruções para a realização do MAPA que foi disponibilizado na Sala do Café Baixe a Planilha de Atividades Planilha A e Planilha B que está disponível em Material da Disciplina CONTEXTUALIZAÇÃO Hemocromatose é uma doença genética causada por mutações no gene HFE que causam alterações no metabolismo do ferro levando ao aumento da absorção intestinal e acúmulo progressivo do metal em diferentes órgãos O excesso de ferro causa danos tecidual e fibrose com lesão irreversível e comprometimento funcional de vários órgãos entre os quais os mais comumente afetados são o fígado o pâncreas e o coração Fonte httpssbhepatologiaorgbrfasciculos26pdf Acesso em 8 abr 2024 O QUE DEVE SER FEITO NESTA ATIVIDADE Considerando essas informações imagine que você é um cientista que acabou de isolar uma amostra de DNA de um paciente com suspeita de hemocromatose Para saber se o gene HFE está presente nessa amostra você pode utilizar uma sonda que tem a mesma sequência de parte do gene de interesse e um marcador como um isótopo radioativo que permite que a sonda seja detectada 1 EXAMINE a sequência de DNA da amostra planilha A para ver se a sonda será hibridizada a ela e em seguida RESPONDA se o gene da hemocromatose está presente ou não Resposta Para começar devese mudar a sequência da sonda e substituíla pelas suas bases complementares para que esteja no sentido de 5 para 3 5 CCTACGATGGTATCG 3 A sequência complementar acima foi identificada no fragmento de DNA fornecido por meio de análise o que indica que a sonda se hibridizou com essa sequência Como resultado a hibridização é positiva e o gene responsável pela hemocromatose é encontrado 2 Se você encontrou um lugar onde a sonda poderia ser hibridizada IDENTIFIQUEO grifar ou circular na sequência de DNA da planilha de atividade A e em seguida ANOTE a sequência Resposta Abaixo está a sequência complementar à sonda fornecida 5 CCTACGATGGTATCG 3 3 SIMULE a atividade de digestão da sua amostra com a enzima de restrição SmaI essa enzima corta a sequência de DNA 5 CCCGGG 3 entre o C e o G no meio da sequência e APONTE com uma seta todos os sítios de clivagem encontrados planilha A Resposta Existem quatro sítios de clivagem disponíveis Eles estão grifados na cor cinza abaixo 4 INDIQUE quantos fragmentos de DNA resultaram após a clivagem e os seus respectivos tamanhos Resposta Com a clivagem obtevese 5 fragmentos ao todo Os fragmentos têm o seguinte tamanho A Frag 1 111 pb B Frag 2 82 pb C Frag 3 47 pb D Frag 4 65 pb E Frag 5 75 pb 5 Considerando a eletroforese de seus fragmentos DESENHE o arranjo desses fragmentos de acordo com o seu tamanho no gel esquematizado na planilha B Resposta O gel esquematizado encontrase abaixo 6 No gel APONTE com um asterisco a banda que hibridizaria à sonda da planilha A Resposta O fragmento 4 contém a sequência de genes complementar à sonda como mostra a figura acima Como resultado esta sequência é a que será hibridizada 7 REFERÊNCIAS SILVA J A Simulação da digestão de DNA com a enzima de restrição SmaI São Paulo Universidade de São Paulo 2024 Disponível em sandboxmntdataPlanilhaASitiosClivagemSmaIxlsx Acesso em 19 jun 2024