Relatorio de Aula Pratica Contagem de Bacterias e Pesquisa de Coliformes em Alimentos

Fonte12 semnegrito S u b t í tu lo e s p e c í f ic o f o n te 1 4 n e g r i to Fonte 12 sem negrito 3cm INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SANTA CATARINA CURSO TÉNICO EM Fonte Arial ou Times 12 maiúscula sem negrito BELTRANO DE TAL FULANO DE TAL 3cm RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO CONTAGEM DE BACTÉRIAS TOTAIS E PESQUISA DE COLIFORMES COLIFORMES FECAIS E ESCHERICHIA COLI EM ALIMENTOS Fonte 14 maiúscula em negrito Cidade Mês 2cm 2cm 2cm Fonte12 maiúsculaemnegrito 2linhas embranco espaçode15do títuloaosubtítulo Fonte12emnegrito R e c u o d e p a rá g ra fo 1 2 5 c m 2 linhas em branco espaço de 15 RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO Fonte 12 maiúscula em negrito 1 IDENTIFICAÇÃO Título subtítulo do relatório Discentes alunos Docentes professores Unidade Curricular disciplina envolvidas na elaboração do relatório Curso Curso Técnico de Nível Médio em Agroindústria Modalidade Integrado Período 09032014 data da realização do experimento Objetivo Constatar número de bactérias em alimento e sanidade do alimento iniciar com verbo no infinitivo 2 INTRODUÇÃO A presença de bactérias em alimentos é algo recorrente A carne crua vendida ao público é portadora de bactérias e fungos pois tratase de um meio nutritivo favorável ao desenvolvimento de alguns microrganismos tais como coliformes coliformes fecais e Escherichia Coli SILVA 2003 Esse último comumente provoca no ser humano infecção urinária podendo causar também várias outras infecções como abscesso no fígado pneumonia meningite artrite colecistite PINHEIRO 2014 O consumo de carne e o número de bactérias prejudiciais à saúde que podem nela estar presentes vem estimulando muitas pesquisas experimentos e trabalhos Nesta prática experimental decidiuse utilizar um bife de carne de vaca comprado em um mercado local o qual foi analisado em dois estados diferentes cru e grelhado análise imediata A utilização desse alimento proveniente de fonte não conhecida proporcionou legitimidade a experiência fazendo com que se verificase na prática o aprendido na teoria Ainda para o experimento levouse em conta dados constantes em Vera 2003 que as bactérias na sua maioria morrem ao serem submetidas a altas temperaturas durante um considerável período de tempo no ar que respiramos existem naturalmente inúmeros esporos e microrganismos em suspensão o agar nutritivo é um meio ideal ao desenvolvimento de colônias a partir de microrganismos bactérias e fungos nele presentes ufc unidades fundadoras de colônias os coliformes são fermentadores rápidos que liberam das suas reações de fermentação CO2 e H2 21 OBJETIVO Fonte 12 maiúscula sem negrito Constatar os níveis de bactérias em um mesmo tipo de alimento submetido a diferentes estados de preparação e conservação 22 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Detectar presença ou ausência de bactérias coliformes Determinar o número de bactérias coliformes se existentes Verificar a presença e quantidade de Escherichia Coli Apontar a condição de sanidade do produtocom o resultado da verificação por bactérias 3 MATERIAIS E MÉTODOS 31 MATERIAIS UTILIZADOS Foram utilizados os seguintes materiais para a prática realizada Autoclav e Balança Balões de Erlenmeyer Bisturi Contador de UFC Estufa Frigideira Frigorífico Homogeneizad or Lamparina Micropipetas volumétricas Placas de petri Placas de aquecimento Tubos de ensaio Varetas 32 PRODUTOS UTILIZADOS Foram utilizados os seguintes produtos na prática realizada Bife de carne bovina 200g Diluente Soro fisiológico Reagente ErlichKovacs 1 l de agar nutritivo 100 ml de Verdebrilhante a concentração normal 100 ml de Verdebrilhante a concentração dupla 100 ml de água de peptona Água de peptona Água destilada Álcool Algodã o A partir das proporções configuradas pelo fabricante diluise o soluto meios em água destilada a ferver 33 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Utilizouse a autoclave para esterilizar o material da experiência o que foi realizado pelas alunas O material que não foi imediatamente utilizado ficou conservado num frigorífico a fim de evitar a sua contaminação Para procederse o experimento preparouse a suspensão pesando cerca de 1 g da carne que foi introduzida num balão de Erlenmeyer Depois foram adicionados 90 ml de diluente soro fisiológico ao balão até a balança marcar um valor próximo de 100 g de forma a obter uma concentração de 110 1 g de alimento 10 ml de diluente e agitouse a suspensão obtida Logo após em cada um de 5 tubos de ensaio foram colocados 9 ml de diluente utilizando a micropipeta Posteriormente transferiuse 1 ml da suspensão para um primeiro tubo o qual foi identificado como 102 o correspondente à sua diluição Depois este foi agitado no homogeneizador durante alguns segundos O mesmo procedimento foi repetido para os outros tubos até completaremse as diluições necessárias Quanto à verificação da presença de coliforme na carne bovina usada com o auxílio da micropipeta foram inoculados num tubo de ensaio 10 ml da suspensão correspondente a 1 g de alimento com 10 ml de meio de Verde Brilhante a concentração dupla sendo a inoculação seguidamente incubada a 37ºC durante 48 horas Quanto à pesquisa de coliformes fecais foram inoculadas algumas gotas entre 05 e 1 ml do meio de Verdebrilhante anteriormente inoculado após obter o resultado positivo com 9ml de meio Verdebrilhante em concentração normal Depois incubouse o tubo de ensaio a 445ºC durante 48 horas No tocante à pesquisa de Escherichia Coli procedeuse a inoculação de algumas gotas entre 05 e 1 ml do mesmo meio de Verdebrilhante positivo obtido através do procedimento 7 correspondente à suspensão 110 com 9ml de água de peptona O tubo de ensaio juntamente com o do procedimento 71 foi incubado à mesma temperatura e durante o mesmo intervalo de tempo 445ºC48horas Após a incubação foram adicionadas 5 a 6 gotas do reagente ErlichmanitaKovacs no tubo de ensaio 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO Foram alcançados os seguintes resultados nas pesquisas com a carne crua e com a carne grelhada Na carne grelhada análise imediata não ocorreu alteração do meio Verde brilhante a concentração dupla o que significa que não estavam presentes em 1 ml da suspensão coliformes e consequentemente também não estavam presentes coliformes fecais nem Escherichia Coli Na carne crua todos os resultados foram positivos Nos tubos de ensaio de Verdebrilhante concentração normal e dupla usados foi possível observar a formação de gás no tubo interior e a turvação do meio devido à presença de culturas Pela tabela abaixo constatase que de fato a carne grelhada a que foi analisada imediatamente contém um número de bactérias muito reduzido em relação ao da carne crua uma vez que ao ser submetida a elevadas temperaturas a maioria das bactérias morre persistindo apenas alguns esporos Contudo se for consumida imediatamente estes não terão tempo de se desenvolver minimizando assim os riscos que os potenciais patogênicos presentes nos alimentos portam CARNE ANALISADA GRELHADA CRUA BACTÉRIA POR GRAMA 2750 147000 PERCENTAGEM 187 10000 Tabela 1 Número de bactérias na carne analisada Os resultados da carne crua foram previsíveis visto que é normal a presença de carga microbiana me carne crua Quanto à sanidade do produto este não foi considerado inapropriado para o consumo por ter sido submetido a alta temperatura por tempo suficiente para eliminar as bactérias presentes procedimento recomendado ao consumo deste tipo de alimento 5 CONCLUSÃO Uma vez que apenas foram encontrados coliformes coliformes fecais e Escherichia Coli na carne crua concluímos que todos os coliformes que sejam submetidos a temperaturas muito elevadas são eliminados e visto que eles não produzem esporos não podem subsistir para mais tarde em condições ideais voltarem a se reproduzir Portanto a partir do que foi verificado no experimento pode se dizer que é mais seguro consumir carne logo após ser preparada pois eventuais esporos nela presentes ou outros microrganismos do ambiente não têm tempo de se desenvolver que a carne deve ser submetida a temperaturas altas durante um intervalo de tempo considerável de modo que todos os microrganismos neles presentes sejam eliminados devese evitar o consumo de carnes mal passadas pois a carne crua possui uma elevada carga microbiana 6 REFERÊNCIAS PINHEIRO Pedro Bactéria Escherichia Coli E Coli MD Saúde São Paulo 14 jun 2011 Disponível em httpwwwmdsaudecom201106bacteria escherichia colihtml Acesso em 17 fev 2014 SILVA Carlos Magalhães Estudo Bacteriológico em Experimentos São Paulo Terramar 2003 VERA Sonia Garcia O Caminho dos Coliformes 2 ed Curitiba Valares 2003 Fonte 12 espaçamento simples alinhamento à esquerda INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SANTA CATARINA CURSO TÉCNICO EM XXX NOME RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO INOCULAÇÃO DE MICRORGANISMOS ANAERÓBIOS E PRODUTORES DE GÁS Cidade Novembro 2022 RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO 1 IDENTIFICAÇÃO Título Inoculação de microrganismos anaeróbios e produtores de gás Discente XXX Docente XXX Unidade Curricular XXX Curso XXX Período XXX Objetivo Avaliar a presença de microrganismos anaeróbios e produtores de gás em amostras de solo 2 INTRODUÇÃO Bactérias anaeróbias são aquelas que tem baixa ou nenhuma tolerância a presença de oxigênio Uma vez não utilizando oxigênio em sua respiração e consequente produção de energia essas bactérias usam outros mecanismos para aporte energético e desses o mais famoso é a fermentação Dentre os compostos utilizados na fermentação destacamse os sulfatos os carbonatos e os nitratos Essas bactérias estão presentes em diversos ambientes como no trato gastrointestinal humano e animal e no solo e muitas são responsáveis por importantes doenças e problemas relacionados a saúde pública como as bactérias Clostridium tetani e Clostridium botulinum BROOK LONG 2012 Outro grupo bacteriano de importância tanto na medicina quanto em outras áreas como por exemplo na produção de alimentos são as produtoras de gás Diversas bactérias podem produzir diferentes tipos de gases como por exemplo a Escherichia coli bactérias dos gêneros Salmonella e Enterobacter dentre outras Ainda existe destaque para as bactérias metanogênicas presentes em abundância na natureza ligadas principalmente a locais com ampla disponibilidade de matéria orgânica e que podem ter aplicações tecnológicas como na produção de biogás OBATA et al 2022 QU et al 2022 Dessa forma é imprescindível ao estudante da área microbiológica o conhecimento prático acerca das bactérias supracitadas que representam grande importância em diferentes aspectos da nossa vida desde sanitários até tecnológicos 21 OBJETIVO Avaliar a presença de microrganismos anaeróbios e produtores de gás em amostras de solo 22 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Avaliar a presença de microrganismos anaeróbios em amostras de solo Avaliar a presença de microrganismos produtores de gás em amostras de solo Elencar os principais microrganismos anaeróbios encontrados comumente no solo Elencar os principais microrganismos produtores de gás encontrados comumente no solo 3 MATERIAIS E MÉTODOS 31 MATERIAIS UTILIZADOS Foram utilizados os seguintes materiais para a prática realizada Alças de inoculação Autoclave Balança Incubadora microbiológica Incubadora shaker Jarra de anaerobiose Micropipetas Placas de Petri Tubos de ensaio Vidrarias de uso laboratorial Erlenmeyer provetas etc 32 PRODUTOS UTILIZADOS Foram utilizados os seguintes produtos para a prática realizada 100 mL de ágar nutriente 100 mL de caldo nutriente Água destilada Álcool 70 Amostras de solo Ponteiras para micropipetas 33 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Os meios de cultivo caldo nutriente e ágar nutriente foram preparados pela estudante e foram esterilizados em autoclave juntamente com os demais materiais necessários estéreis para utilização como as ponteiras Os materiais foram armazenados em geladeira sob refrigeração antes de serem utilizados para evitar contaminação Para a realização das análises 1 grama de amostra de solo foi diluída em água estéril na proporção de 110 Após homogeneização o conteúdo foi inoculado em tubos de ensaio contendo caldo nutriente incubado em incubadora shaker durante 24h a 37 ºC com 100 rpm de agitação orbital para verificação da presença de microrganismos produtores de gás Ainda o material foi inoculado em placas de ágar nutriente e incubado em jarra de anaerobiose em estufa microbiológica durante 24h a 37 ºC para verificação da presença de microrganismos anaeróbios Após os períodos de incubação os resultados foram interpretados como PRESENÇA ou AUSÊNCIA de bactérias produtoras de gás eou de bactérias anaeróbias 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO Após a incubação foi observada presença de microrganismos produtores de gás e presença de microrganismos anaeróbios Dentre os microrganismos produtores de gás isolados com mais frequência de amostras de solo destacamse os coliformes Os coliformes são um grupo bacteriano frequentemente utilizado como controle de qualidade em diferentes tipos de amostras por ser um indicador principalmente de contaminação fecal Os coliformes são microrganismos gramnegativos oxidase negativos não formadores de esporos aeróbios ou anaeróbios facultativos com forma de bastonetes que podem fermentar a lactose e produzir gás e ácido em incubação a 35 ºC EDEN 2014 A principal bactéria desse grupo é a E coli porém observamos também os gêneros Citrobacter Enterobacter e Klebsiella Alguns pesquisadores ainda definem os gêneros Serratia e Hafnia como pertencentes ao grupo Sua origem é principalmente a partir de dejetos de animais pois são algumas das bactérias mais prevalentes no trato gastrointestinal MARAQA et al 2021 Quando observada a E coli com maior atenção notase que existem grandes variações entre populações da mesma espécie Dessas destacamse as E coli diarreiogênicas importantes bactérias para a saúde pública principalmente em locais com baixo acesso ao saneamento básico Dentre as E coli diarreiogênicas incluemse sete grupos i enteropatogênica EPEC ii enteroinvasiva EIEC iii enterotoxigênica ETEC iv enterohemorrágica EHEC v enteroagregativa EAEC vi difusamente aderente DAEC e vii invasiva aderente AIEC Cada uma delas possui um grau diferente de patogenicidade virulência e mortalidade portanto devem ser monitoradas com cuidado e estratégias devem ser criadas para que seja evitada sua disseminação e consequentemente problemas sanitários OLIVEIRA et al 2022 Ainda nas bactérias produtoras de gás destacamse as bactérias metanogênicas presentes principalmente em áreas como manguezais pela grande presença de matéria orgânica para decomposição Nesse grupo podem ser citadas populações de Methanosaetaceae Methanomicrobiales e Methanobacteriales As bactérias metanogênicas intersectamse largamente com as bactérias anaeróbicas outro grupo avaliado nesse experimento já que a produção de metano se faz na ausência de oxigênio CONRAD 2020 Em solos convencionais as bactérias anaeróbias mais frequentemente isoladas são Clostridium Actinomyces e Propionibacterium Dessas o Clostridium é sem dúvida a mais importante e a mais estudada Algumas das principais bactérias do gênero encontradas são Clostridium perfringens C tetani e C botulinum Como agravante algumas bactérias do gênero podem produzir esporos resistentes o que perpetuam a contaminação ambiental representando um grande risco MERAVI et al 2021 SHAO et al 2022 A bactéria C perfringens tem alta virulência e patogenicidade Uma de suas principais características é a rápida reprodução o que permite que uma população baixa já seja capaz de causar problemas Ainda tem potencial para produzir aproximadamente 20 diferentes toxinas causadoras de diarreia gangrena gasosa enterotoxemia gastroenterite hemorrágica disenteria enterite necrotizante eou hemorrágica enterocolite e choque tóxico GOHARI et al 2021 Já o C botulinum tem potencial para produzir diversos tipos de neurotoxinas dentre elas a mais importante é a causadora do botulismo doença caracterizada por paralisia náusea vômito cólicas abdominais dificuldade para engolir ou falar irritabilidade pálpebras caídas cansaço e dificuldade de sucção ou alimentação Ainda o C tetani é a bactéria causadora do tétano e produz diferentes toxinas para indução de necrose tecidual anaerobiose local e danos no sistema nervoso central ALIZADEH et al 2020 5 CONCLUSÃO Conforme observado as bactérias produtoras de gás e anaeróbias podem ter grande prevalência no solo e representar grandes problemas de saúde pública Dessa forma a monitorização constante é necessária Para isso cabe ao estudante da área microbiológica conhecer as alternativas existentes para a detecção das bactérias Técnicas auxiliares devem ser aplicadas também para identificação bacteriana sempre que possível pois nem sempre uma amostra com alta carga microbiana é um indício de problemas Assim a identificação dos grupos microbianos presentes em uma amostra também é ferramenta essencial para a determinação de possíveis riscos e para a previsão de métodos de controle de qualidade microbiológico 6 REFERÊNCIAS ALIZADEH A M et al Inhibition of Clostridium C botulinum and its toxins by probiotic bacteria and their metabolites An update review Quality Assurance and Safety of Crops Foods v 12 n SP1 p 5968 30 dez 2020 DOI dxdoiorg1015586qasv12iSP1823 BROOK I LONG S S Anaerobic Bacteria In Principles and Practice of Pediatric Infectious Diseases sl Elsevier 2012 p 958966e3 CONRAD R Methane Production in Soil EnvironmentsAnaerobic Biogeochemistry and Microbial Life between Flooding and Desiccation Microorganisms v 8 n 6 p 881 11 jun 2020 DOI dxdoiorg103390microorganisms8060881 EDEN R Enterobacteriaceae coliforms and E Coli Classical and Modern Methods for Detection and Enumeration In Encyclopedia of Food Microbiology sl Elsevier 2014 p 667673 GOHARI I M et al Pathogenicity and virulence of Clostridium perfringens Virulence v 12 n 1 p 723753 31 dez 2021 DOI dxdoiorg1010802150559420211886777 MARAQA M A et al Water quality at Jebel Ali Harbor Dubai United Arab Emirates In 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