Microbiologia Clínica - Resenha de um Artigo com as Regras Pedido no Arquivo

MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLINICA PROF MARIO RENE ESTUDO DIRIGIDO 1º BIMESTRE ORIENTAÇÕES PARA A ELABORAÇÃO 1TEMA DE ESTUDO MÉTODOS DE IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA Elaboração de resenha original do artigo Evolução das técnicas diagnosticas em microbiologia clínica arquivo completo disponibilizado no TOTVS dentro das normas Manual de Normas Técnicas Tuiuti ou ABNT 2REFERENCIA PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZFERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 3ESTUDO DIRIGIDO AVALIAÇÃO 31 RESENHA digitada e impressa em 24 de abril de 2024 040 32 Relatório de aulas práticas 24 de abril de 2024 010 33 Questões sobre o tema do artigo proposto prova parte B 24 de abril 2024 0050 4OBS aResenha não é resumo bA resenha deve ser uma reescrita do alunoautor com ênfase nos aspectos mais relevantes do artigo proposto cO texto da resenha não deve ser fragmentado em itens d Não tem limite máximo de caracteres ou páginas e Resenhas de artigos técnicos não cabe critica subjetiva portanto será valorizada a descrição da visão dos autores originais do artigo Serão bem vindas considerações finais do alunoautor f Este estudo dirigido tem a finalidade de desenvolver competências e habilidades analíticas O artigo deve ser lido com intuito de analisar compreender e desenvolver a capacidade de dissertar sobre o tema 529 EVOLUÇÃO DAS TÉCNICAS DIAGNÓSTICAS EM MICROBIOLOGIA CLÍNICA Evolution of diagnostic techniques in clinical microbiology Larissa Morbi Perantoni¹ Geisiany Maria de QueirozFernandes² PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZFERNANDES Gei siany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiolo gia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 RESUMO Introdução A identificação microbiana é importante por gerar im pacto tanto no tratamento do paciente quanto na saúde pública pois o diagnóstico rápido e preciso propicia o direcionamento adequado da terapia antibiótica e o rápido controle da infecção Por conta disso atualmente os laboratórios de microbiologia clínica estão passando por mudanças significativas com o desenvolvimento de sistemas de automação que aceleram o diagnóstico Esses avanços foram pos síveis devido ao progresso tecnológico e à busca de novas estraté Recebido em 05022019 Aceito em 30042019 ¹Bióloga especialista em Análises Clínicas pela Universidade do Sagrado Coração USC Bauru SP Brasil ²Doutora em Ciências Farmacêuticas com ên fase em Microbiologia e Biotecnologia Faculdade São Leopoldo Mandic Araras SP Brasil 530 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 gias que reduziram os custos dessas ferramentas tornandoas mais acessíveis Objetivo Este estudo buscou ressaltar a importância da implantação de novas e avançadas tecnologias nos laboratórios de microbiologia Metodologia Realizouse revisão de literatura em bases de dados científicas Desenvolvimento As técnicas tradicio nais de diagnóstico microbiológico incluem desde métodos diretos como coloração e microscopia ótica até métodos indiretos como por exemplo cultura e testes bioquímicos O principal problema é o fato de que essas técnicas demandam tempo para fornecer uma resposta ao clínico e em muitos casos necessita de técnicos bem treinados para a interpretação correta dos resultados Por isso tornase cada vez mais importante o desenvolvimento de técnicas rápidas e preci sas As principais técnicas inovadoras incluem a Biologia Molecular os Imunoensaios e a Espectrometria de Massa Considerações fi nais O acesso às novas tecnologias permite resolver questões diag nósticas que estão cada vez mais desafiadoras e também contribuem para a melhoria do cenário clínico e a saúde pública Palavraschave Avanços tecnológicos Biologia molecular Imuno ensaios MALDI TOF ABSTRACT Introduction Microbial identification is important due to its impact on both the patient and public health because the rapid and accurate diagnosis allows of correct antibiotic treatment and control of infection Currently clinical microbiology laboratories are undergoing significant changes due to the development of automation systems which enables faster and more accurate diagnosis These advances were possible due to technological progress and the search for new strategies that reduced the costs of these tools making them more accessible Objective This study aimed to highlight the importance of the implantation of new and advanced technologies in microbiology laboratories Methodology A review of scientific literature was carried out in scientific databases Development Traditional techniques of microbiological diagnosis include direct methods such as staining methods and optical microscopy to indirect methods such as culture and biochemical tests The main problem is the fact that these techniques take time to provide a response to the clinician and in many cases need welltrained technicians for the correct interpretation of the results It is therefore becoming increasingly important to develop rapid and accurate techniques 531 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 The innovative techniques include molecular biology immunoassays and mass spectrometry Final considerations Access to new technologies makes it possible to solve diagnostic issues that are increasingly challenging and also contribute to the improvement of the clinical setting and public health Key words Technological advances Molecular biology Immunoassays MALD TOF INTRODUÇÃO As técnicas desenvolvidas em microbiologia clínica têm como finalidade identificar os microorganismos causadores de determi nadas infecções MÜHLHAUSER RIVAS 2014 Essa identifica ção microbiana assim como a determinação de sensibilidade dos microorganismos aos antimicrobianos é importante devido ao fato de gerar impacto tanto no paciente quanto na saúde pública pois a partir do diagnóstico rápido e preciso é possível direcionar adequa damente o tratamento antibiótico e o controle da infecção ROSSEL LÓ PÉREZ 2016 Notase que aumenta cada vez mais a necessidade de técnicas de diagnóstico rápido principalmente por conta dos elevados núme ros de infecções graves causadas por microorganismos resistentes Consequentemente nos dias atuais os laboratórios de microbiologia clínica estão passando por mudanças significativas devido ao de senvolvimento de sistemas de automação apoiadas pelos avanços tecnológicos como o diagnóstico molecular microbiologia digital e espectrometria de massas o que possibilita um diagnóstico mais rá pido VILA et al 2017 Ao contrário das outras áreas laboratoriais a evolução tecnoló gica na área de microbiologia clínica não foi algo simples e rápido de ser incorporado devido principalmente à diversidade de micro organismos e à grande variedade de amostras quando comparado a outros exames como bioquímicos e hematológicos o que levou inicialmente à implementação de tecnologias menos rentáveis HER VÉ 2015 Os sistemas automatizados foram introduzidos nos laboratórios de microbiologia por volta de 1960 inicialmente com sucesso limita do Atualmente instrumentos automatizados são partes fundamen tais nos laboratórios microbiológicos para o gerenciamento de espé cies detecção microbiana amplificação de ácido nucléico e testes de susceptibilidade QUIROGA 2016 532 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 Todos esses avanços foram possíveis devido ao progresso tecno lógico e a busca de novas estratégias que reduziram os custos dessas ferramentas tornandoas mais acessíveis O acesso às novas tecnolo gias não permite apenas resolver novas questões científicas que estão cada vez mais desafiadoras mas também que possam ser inseridas no cenário clínico e levadas para a comunidade QUIROGA 2016 Nas duas últimas décadas o desenvolvimento de técnicas rápidas de diagnóstico proporcionou um grande e importante avanço pois os resultados podem ser obtidos em poucas horas VILA et al 2017 Além disso a automação trouxe diversos outros benefícios como o aumento da produtividade do laboratório melhor qualidade dos pro cessos analíticos menor probabilidade de erros redução de custos facilidade de realizar estatísticas para o gerenciamento laboratorial e a sistematização na emissão dos laudos PUMAROLA 2010 MATERIAL E MÉTODOS Realizouse revisão de literatura com o intuito de enfatizar as evoluções tecnológicas do diagnóstico em microbiologia clínica As buscas foram realizadas em bases de dados como PubMed Science Direct Google Acadêmico e Scielo Foram selecionados artigos es critos em Língua Portuguesa Inglesa e Espanhola e livros didáticos publicados entre 2000 e 2018 RESULTADOS E DISCUSSÃO Técnicas Tradicionais As técnicas tradicionais de diagnóstico microbiológico incluem desde métodos diretos como métodos de coloração e microscopia ótica até métodos indiretos como por exemplo cultura e testes bio químicos em que características metabólicas específicas são detec tadas nos microorganismos VILA et al 2017 Os métodos fenotípicos de identificação microbiana incluindo a coloração de Gram o crescimento em cultura e testes bioquímicos ainda são os métodos de primeira escolha para a realização do diag nóstico microbiológico na maioria dos laboratórios de todo o mun do por serem técnicas que permitem a identificação da maioria das bactérias isoladas e possuírem menor custo Entretanto demandam tempo para fornecer uma resposta ao clínico e em muitos casos 533 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 necessita de técnicos bem treinados para a interpretação correta dos resultados Por isso tornase cada vez mais importante o desenvolvi mento de técnicas rápidas e precisas MIMICA et al 2013 Durante anos a identificação microbiana nos laboratórios de mi crobiologia foi realizada de acordo com a morfologia a estrutura da parede e a capacidade de crescer em diferentes meios de cultura seletivos e diferenciais ou em condições de temperatura variadas Recentemente algumas dessas técnicas sofreram avanços signifi cativos na miniaturização em formatos que permitiram aumentar o número de testes e eventualmente a automatizatização da leitura desses resultados apresentando melhorias em relação ao tempo de resposta No entanto ainda apresentam limitações em relação à con fiabilidade especialmente quando se trata de microorganismos que demoram a crescer ou que não se desenvolvem em todos os meios de cultura BELLIDO et al 2012 A cultura é um método básico que permite isolar o microorga nismo e posteriormente identificálo sendo ainda a principal etapa para se alcançar o diagnóstico de doenças bacterianas pois possi bilita ainda determinar a sensibilidade microbiana Entretanto essa técnica necessita de meios de cultura especializados e tempo o que muitas vezes é crucial no tratamento do paciente VILA et al 2017 A cultura tradicional requer tempo maior por ser necessário aguardar a reprodução suficiente de células do microorganismo o que pode levar horas 18 a 24 para a maioria das bactérias ou até mesmo dias ou meses caso de micobactérias e fungos filamentosos e como em toda técnica manual pode sofrer interferências devido a falha dos analistas MÜHLHAUSER RIVAS 2014 Após o isolamento do microorganismo a identificação pode ser realizada por diferentes metodologias como pela observação ma croscópica da colônia sendo limitada pois é possível observar ape nas a morfologia da colônia e as reações produzidas no meio de cul tura pela observação microscópica com coloração em que pode ser observada a afinidade do microorganismo pela coloração ou pelo estudo do comportamento bioquímico podendo ser realizado atra vés de testes manuais como culturas cromogênicas testes bioquí micos testes diretos ou através de sistemas automatizados onde é possível a realização de testes bioquímicos e metabólicos de forma miniaturizada MÜHLHAUSER RIVAS 2014 A análise das características morfológicas e alguns testes bioquí micos permitem apenas a identificação presuntiva dos patógenos sendo muitas vezes necessários outros testes complementares para confirmar a identificação PEREIRA PETRECHEN 2011 Essas reações juntamente com a diferenciação sorológica podem demo 534 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 rar cerca de 48 horas para determinar o diagnóstico NOGUEIRA MIGUEL 2013 Um meio cromogênico recentemente desenvolvido é o Chroma gar Orientation em que as culturas assumem diferentes cores de acordo com as suas características enzimáticas SAMRA et al 2008 e é utilizado para identificação direta diferenciação e enume ração de agentes patogênicos comuns do aparelho urinário O meio é apropriado para o isolamento de muitos microorganismos de cres cimento aeróbio e foi introduzido na rotina laboratorial com o intuito de subsituir as técnicas de cultura tradicionais pois a identificação do microorganismo é mais rápida além de possuir um menor custo em comparação às demais técnicas XIMENES 2009 Entretanto possui algumas limitações pois ainda é necessário realizar testes de confirmações e não é seletivo podendo haver o crescimento de outros microorganismos BD A identificação de fatores de virulência é de extrema importância pois determina os fatores responsáveis pela patogenicidade do micro organismo Três métodos podem ser utilizados para identificação de virulência biológicos imunológicos ou genéticos Os testes biológi cos consistem na inoculação de culturas purificadas em linhagens celulares in vitro Uma das utilidades dessa técnica é a pesquisa de enteretoxinas ST e LT de Escherichia coli Os métodos imunológicos consistem na utilização de antisoros específicos contra estruturas associadas à patogenicidade bacteriana e os métodos genéticos são capazes de identificar o o fator de virulência do patógeno através do seu genoma TRABULSI ALTERTHUM 2005 Sistemas de cultura automatizados vêm sendo utilizados em al guns laboratórios como o BD BACTEC Esse sistema consiste em um método sensível e específico para identificação do micro organismo em amostras de sangue em que é possível a incubação simultânea de várias amostras eliminando a necessidade da verifi cação diária e a necessidade de realizar subculturas MINASSIAN et al 2014 Há uma grande variedade de equipamentos automatizados para cultura Dentre os disponíveis nos laboratórios brasileiros podemos citar MGIT Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems Sparks MD USA BacTALERT 3D 60120240 BioMérieux Durham NC EUA e BACTEC modelos FX série 9000 9050 9120 9240 O BD BACTEC MGIT é utilizado para o isolamento de mico bactérias permitindo o crescimento em um menor tempo Entretan to é um método trabalhoso e exige que os laboratórios lidem com diversas normas de segurança associadas ao uso de radioisótopos 535 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 WILLIAMSBOUYER et al 2000 Essas técnicas reduziram o tempo de identificação de microorganismos causadores de septice mias para cerca de 8 a 10 horas HERVÉ 2015 Apesar de a cultura automatizada apresentar benefícios signi ficativos algumas desvantagens podem dificultar sua implemen tação dentre elas o alto custo e o tamanho dos equipamentos que pode ser um problema em laboratórios menores GUAREZE BORDIGNON 2016 Visando sanar as limitações das técnicas tradicionais descritas acima metodologias inovadoras baseadas principalmente em carac terísticas genéticas sorológicas ou de massa molecular dos consti tuintes dos microorganismos começaram a ser desenvolvidas con tribuindo assim em diversos aspectos como para a credibilidade da identificação e o diagnóstico direto da amostra sem a necessidade de cultivo prévio reduzindo o tempo para iniciar o correto tratamen to do paciente BELLIDO et al 2012 Técnicas Inovadoras Biologia Molecular As técnicas que envolvem biologia molecular representam um dos maiores avanços do século XX trazendo grandes benefícios em diversas áreas inclusive no diagnóstico de doenças infecciosas Gerou grande interesse principalmente pela possibilidade de reduzir o tempo necessário para identificar um microorganismo o que é um fator crucial no sucesso do tratamento VALONES et al 2008 CAMARGO SILVA 2014 Estas técnicas têm sido muito aplicadas no diagnóstico de doen ças infecciosas e diferentemente dos métodos imunológicos em que se identifica a doença através de anticorpos as técnicas moleculares amplificam a molécula de DNA na amostra e analisam as caracterís ticas genéticas dos microorganismos CAVALCANTI et al 2008 Os métodos de biologia molecular tiveram grandes avanços na última década devido à sua sensibilidade e especificidade para de tectar e amplificar pequenas quantidades de DNA dos microorga nismos Esse método permitiu também o estudo da resistência bac teriana MÜHLHAUSER RIVAS 2014 A PCR Reação em Cadeia da Polimerase é considerada um mé todo inovador dentro da biologia molecular que consiste na dupli cação de cadeias de DNA in vitro por meio de etapas de variações de temperatura permitindo assim a obtenção de diversas cópias de uma determinada sequência de ácidos nucléicos CAMARGO 536 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 SILVA 2014 É uma técnica altamente flexível pois permite a sua aplicação em uma grande variedade de amostras Dentre as princi pais variações da PCR podemos citar o PCR multiplex a nested PCR e a PCR em tempo real CAVALCANTI et al 2008 HAAS TORRES 2016 No multiplex PCR é possível a amplificação de mais de uma se quência de DNA em uma mesma amostra Essa variação da PCR foi desenvolvida com o intuito de diferenciar as espécies microbianas É considerado um teste altamente específico contando ainda com a vantagem da maior rapidez na obtenção de resultados e um menor custo devido à economia de reagentes afinal a amplificação das di ferentes sequências é realizada simultaneamente CAVALCANTI et al 2008 HAAS TORRES 2016 Na nestedPCR são utilizados dois pares de iniciadores para a amplificação e ao invés de se usar uma amostra primária para fazer a PCR utilizase o produto de amplificação da primeira reação como molde para a segunda ou seja é a PCR do produto da PCR Entre tanto por ser uma técnica de amplificação simultânea pode ocorrer contaminação das amostras LIMA et al 2009 A PCR em tempo real permite o monitoramento e a quantifica ção dos ácidos nucléicos com maior especificidade É uma técnica baseada no uso de sondas fluorescentes e dentre suas vantagens podemos citar a facilidade na quantificação análise rápida e precisa maior sensibilidade e menor risco de contaminação VALONES et al 2008 A possibilidade de resultados falsopositivos e falsonegativos ainda são limitações das técnicas de amplificação de DNA mesmo sendo técnicas consideradas avançadas tecnologicamente Os falso positivos geralmente são decorrentes de possíveis contaminações e os resultados falsonegativos podem estar ligados à presença de inibidores da PCR CAVALCANTI et al 2008 Imunoensaios As técnicas de imunoensaios são utilizadas para detectar eou quantificar antígenos e anticorpos Nos últimos anos os métodos de imunoensaios sofreram significativos avanços tecnológicos na pro dução de antígenos e anticorpos e de analisadores automáticos Esses avanços favoreceram a rapidez na realização dos testes BENDER MÜHLEN 2008 Através dos métodos de diagnóstico imunológicos é possível re alizar a classificação sorológica da bactéria Escherichia coli que é 537 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 baseada em elementos que provocam uma resposta imune Antígeno O encontrado na parede celular Antígeno K encontrado na cápsu la e o Antígeno H encontrado nos flagelos FAÚLA 2016 Diversas técnicas de imunoensaios são utilizadas para o diagnós tico microbiológico Dentre as principais e mais utilizadas está a imunocromatografia que permite detectar o microorganismo di retamente da amostra utilizando uma membrana de nitrocelulose ligada a uma tira de acetato que contém o primeiro anticorpo Para realizar a detecção do antígeno utilizase um anticorpo de captura que fica ligado à membrana e um anticorpo específico para o antí geno pesquisado Para detectar o anticorpo utilizase um antígeno específico ligado à membrana e um anticorpo antiimunoglobulina marcado Com esse método se obtêm resultados qualitativos e de simples interpretação pois basta comparar a olho nu os controles positivos e negativo Além disso é um método rápido e barato CA VALCANTI et al 2008 MÜHLHAUSER RIVAS 2014 A imu nofluorescência que consiste em duas modalidades a técnica de anti corpo fluorescente direto DFA e a técnica do anticorpo fluorescente indireto IFA MÜHLHAUSER RIVAS 2014 e ELISA Enzyme Linked Immunono Sorbent Assay que se baseia em reações antígeno anticorpo detectáveis através de reações enzimáticas Um anticorpo específico para o antígeno pesquisado é fixado em uma fase sóli da O antígeno presente na amostra se liga ao anticorpo específico Posteriormente um segundo anticorpo específico é adicionado ao antígeno ligado a uma enzima Após um período de incubação e lavagem o complexo anticorpoantígenoanticorpo é detectado pela adição do substrato da enzima ligada ao segundo anticorpo A enzi ma atua no substrato produzindo cores que podem ser lidas através de um espectrofotômetro CAVALCANTI et al 2008 MÜHLHAU SER RIVAS 2014 Diversas doenças infecciosas são diagnosticadas pelos métodos imunológicos principalmente por ELISA pois sua simplicidade per mite a análise de um grande número de microorganismos mesmo com um volume menor de amostras A principal desvantagem das técnicas de imunoensaios é a baixa especificidade Além disso ape sar dos avanços ligados à automatização dos imunoensaios a inter venção humana ainda se faz necessária em diversas etapas do pro cesso CAVALCANTI et al 2008 BENDER e MÜHLEN 2008 MALDI TOF A aplicação da espectrometria de massa na análise de biomolécu las para o diagnóstico microbiológico teve um aumento expressivo 538 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 por volta dos anos 70 e 80 MINGORANCE et al 2016 e durante décadas a técnica de MALDITOF Matrix Assisted Laser Desorp tion IonizationTime of FlightMass Spectrometry foi utilizada na análise de diferentes biomoléculas e sua aplicação no diagnóstico microbiológico aparenta ser promissora MIMICA et al 2013 Essa técnica foi utilizada pela Química durante décadas e apenas em 1975 que Anhalt e Fenselau propuseram que essa téc nica fosse utilizada para a identificação bacteriana CROXATTO et al 2011 Nas primeiras experiências apenas moléculas de baixas massas moleculares como os lipídeos foram analisadas Somente depois da evolução da ionização por volta do final da década de 80 que foi possível a análise de biomoléculas maiores como as proteínas CRO XATTO et al 2011 A tecnologia MALDITOF permite a identificação de microor ganismos por meio da análise de proteínas principalmente ribossô micas através da criação de um espectro de massa específico para cada espécie LEGARRADA et al 2013 Os três principais elementos que formam um espectrômetro de massa são uma fonte de ionização um analisador de massas e um detector que são mantidos em uma atmosfera de vácuo Sua função é produzir separar e detectar íons em fase de gás RUIZ et al 2012 Essa técnica consiste em um sistema no qual o material biológico é inserido em uma placa na qual se encontra a matriz polimérica Esse material é irradiado com um laser que vaporiza a amostra e leva à ionização de várias moléculas Essas moléculas são aspiradas em um tubo de vácuo e levadas a um detector O tempo de chegada ao de tector é diferente para cada molécula gerando um gráfico específico para cada espécie de bactéria ou fungo PASTERNAK 2012 o que gera assinaturas de impressões digitais das proteínas de toda a célula microbiana que quando comparada a um banco de dados pode ser rapidamente identificada BIZZINI et al 2010 A capacidade de identificar microorganismos rapidamente favo rece a aplicação da MALDITOF em diversas áreas como diagnós tico médico monitoramento ambiental e controle de qualidade dos alimentos Além disso por ser uma técnica de identificação rápida de alto rendimento e de baixo custo é uma ótima alternativa para laboratórios convencionais CROXATTO et al 2011 Tendo em vista que MALDITOF é uma das técnicas mais revolu cionárias atualmente para o diagnóstico microbiológico podemos ci tar como principal benefício a agilidade na obtenção dos resultados que pode ocorrer em menos de trinta minutos JUNIOR et al 2014 539 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 O baixo custo a possibilidade de se utilizar pouco material bioló gico sua aplicação em larga escala e a detecção de resistência bac teriana por MALDITOF são outras vantagens importantes pois a escolha terapêutica correta impacta diretamente nas taxas de mor talidade causadas por infecções ASSIS et al 2011 JUNIOR et al2014 Além dos itens mencionados há ainda a vantagem de o espectrô metro necessitar apenas de instalação elétrica e atender as exigências ambientais pois não gera nenhum tipo de resíduo ASSIS et al 2011 Apesar dos inúmeros benefícios da técnica MALDI TOF algu mas limitações foram identificadas A principal delas é o fato de que a análise depender de um banco de dados que está disponível ape nas comercialmente e esses bancos de dados necessitam de novas versões que incluam as espécies que ainda não estão representadas Além disso algumas espécies de bactérias podem apresentar per fis de espectrometria de massa idênticos devido à sua similaridade genética ou seja essas espécies não são diferenciadas pela MALDI TOF ASSIS et al 2011 JUNIOR et al2014 CONSIDERAÇÕES FINAIS O diagnóstico microbiológico é extremamente importante por permitir identificar os microorganismos causadores de infecções e apontar o correto tratamento antibiótico evitando a seleção de mi croorganismos resistentes e reduzindo os índices de morbidade e mortalidade especialmente relacionados a cepas multirresistentes Nos últimos anos devido ao avanço da tecnologia os laboratórios de diagnóstico microbiológico evoluíram consideravelmente imple mentando técnicas como espectrometria de massa nas análises be neficiando pacientes médicos e também os analistas clínicos afinal tanto os procedimentos quanto os resultados tornaramse mais sim ples rápidos e seguros contribuindo diretamente para a melhoria da saúde pública uma vez que houve redução do tempo de espera pelos resultados e do número de internações Entretanto muitos laborató rios ainda não implantaram técnicas mais avançadas de diagnóstico principalmente devido ao alto custo dos equipamentos e à necessida de de profissionais bem treinados e constantes atualizações Assim os avanços nas técnicas diagnósticas microbiológicas ainda são necessários com intuito de tornar estas tecnologias mais acessíveis de maneira que possam cada vez mais contribuir com a melhoria do cenário clínico e da saúde pública 540 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 REFERÊNCIAS BD INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR 2011 Disponível em httpwwwbdcomresource aspxIDX9114 BELLIDO J L M CASTAÑO S V FERREIRA L JUANES F S BUITRAGO J M G Aplicaciones de la proteómica en el labo ratorio de Microbiología Clínica Enfermidades Infecciosas y Mi crobiología Clínica Madrid v 30 n 7 p 383393 2012 BENDER A L VON MUHLEN C A Testes laboratoriais aplica dos à Imunologia Clínica Imunologia Clínica na Prática Médica Cap 5 p 73 94 2008 CAMARGO C F SILVA P R Q Aplicação das técnicas de PCR e suas técnicas derivadas em diagnóstico molecular 2014 Dispo nível em httpwwwcpglspucgoiasedubr6mostraartigosSAUDECLEY TON20FLORENCIO20DE20CAMARGO20E20PAULO20ROBER TO20QUEIROZpdf CAVALCANTI M P LORENA V M B GOMES Y M Avanços biotecnológicos para o diagnóstico das doenças infecciosas e parasi tárias Rev Patol Tropical Goiânia v 37 n 1 p 114 2008 CROXATTO A PRODHOM G GREUB G Applications of MALDITOF Mass Spectrometry in Clinical Diagnostic Microbio logy FEMS Microbiol Rev England v 36 n 2 p 380407 2011 FAÚLA L L Fatores de virulência sorotipos e susceptibilidade antimicrobiana de amostras de Escherichia coli isoladas de ali mentos no Estado de Minas Gerais Brasil 2016 Disponível em hometesteDownloadsfatoresdevirulenciasorotiposesuscep tibilidadeantimicrobianadepdf GUAREZE G M BORDIGNON JC Estudo comparativo entre hemocultura automatizada e manual em um laboratório do sudoeste do Paraná Brasil RBAC Rio de Janeiro v 48 n 3 p 2238 2016 HAAS D J TORRES A C D Aplicações das técnicas de PCR no diagnóstico de doenças infecciosas dos animais Rev Científica Med Vet Belo Horizonte n 26 Janeiro 2016 HERVÉ B E Nuevas tecnologías en diagnóstico microbiológico autoatización y algunas aplicaciones en identificación microbiana y estudio de susceptibilidad Rev Med Clin Condes Santiago v 26 n 6 p 753763 2015 541 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 LEDEBOER N A DALLAS S D The Automated Clinical Micro biology Laboratory Fact or Fantasy J Clin Microbiol Washing ton v 52 n9 p 31403146 2014 LEGARRADA P MORAGA M LAM M GEOFFROY E ZU MARÁN C GARCIA P Impacto de la espectrometría de masas por MALDITOF MS en la identificación rápida de bacterias aeró bicas y anaeróbicas de importancia clínica Rev Chilena Infectol Santiago v 30 n 2 p 140146 2013 LIMA J F C MONTENEGRO L M L MONTENEGRO R A CABRAL M M L LIMA A S ABATH F G C SCHINDLER H C Desempenho da técnica nested PCR na detecção específica do complexo Mycobacterium tuberculosis em amostras sanguíneas de pacientes pediátricos J Bras Pneumol Brasília v 35 n 7 p 690 697 2009 MIMICA M J MARTINO M D V PASTERNAK J MALDI TOF MS in the clinical microbiology laboratory J Bras Patol Med Lab Rio de Janeiro v 49 n 4 p 256259 2013 MINASSIAN A M NEWNHAM R KALIMERIS E BEJON E ATKINS B L BOWLER C J W Use of an automated blood culture system BD BACTEC for diagnosis of prosthetic joint infections easy and fast BMC Infect Dis London v 14 n 4 p 233 2014 MINGORANCE J REGUEIRO B MUÑOZBELLIDO J L Perspectiva histórica de la espectrometría de masas en Microbiolo gia Enfermidades Infecciosas Microbiol Clin Madri v 32 n 2 p 37 2016 MÜHLHAUSER M P RIVAS L J Laboratorio de microbiología conocimientos básicos para un clínico Rev Med Clin Condes San tiago v 25 n 3 p 569579 2009 NOGUEIRA J M R MIGUEL L F S BACTERIOLOGIA In Etelcia Molinaro Luzia Caputo Regina Amendoeira Org Concei tos e Métodos para a Formação de Profissionais em Laboratórios de Saúde Rio de Janeiro 2013 v 4 p 221397 PASTERNAK J New methods of microbiological identification using MALDITOF Einstein São Paulo v 10 n 1 p 118119 2012 PEREIRA REP PETRECHEN G G Principais métodos diag nósticos bacterianos Rev Científica Eletrônica Med Vet Garça v16 2011 PUMAROLA T Influencia de las nuevas tecnologías en la micro biología moderna Enfermidades Infecciosas Microbiol Clin Ma drid v 28 n 3 p 5962 2010 542 PERANTONI Larissa Morbi e QUEIROZ FERNANDES Geisiany Maria de Evolução das técnicas diagnósticas em microbiologia clínica SALUSVITA Bauru v 38 n 2 p 529542 2019 QUIROGA C Las tecnologías ómicas situación actual y desafíos futuros Rev Argent Microbiol Buenos Aires v 48 n 4 p 265 266 2016 ROSSELLÓ G A M PÉREZ M A B Antibiograma rápido en Microbiología Clínica Rapid antibiotic susceptibility test in Clinical Microbiology Enfermidades Infecciosas Microbiol Clin Madri v 34 n1 p 6168 2016 SAMRA Z BAHAR J MADARSHAPIRO L AZIZ N N IS RAEL S BISHARA J Evaluation of chromagar KPC for rapid detection of carbapenemresistant Enterobacteriaceae J Clin Mi crobiol Washington v 46 n 9 p 31103111 2008 TRABULSI L R ALTERTHUM F Microbiologia 4 ed São Paulo Atheneu 2005 VALONES M A A GUIMARÃES R L BRANDÃO L A C SOUZA P R E CARVALHO A A T CROVELA S Principles and applications of polymerase chain reaction in medical diagnos tic fields a review Braz J Microbiol Rio de Janeiro v 40 n 1 p 111 2009 VILA J GÓMEZ M D SALAVERT M BOSCH J Métodos de diagnóstico rápido en microbiología clínica necesidades clínicas Enfermidades Infecciosas Microbiol Clin Madrid v 35 n 1 p 4146 2017 WILLIAMSBOUYER N YORKE R LEE H I WOODS G L Comparison of the BACTEC MGIT 960 and ESP culture system II for growth and detection of mycobacteria J Clin Microbiol Wa shington v 38 n 11 p 41674170 2000 XIMENES L A Avaliação técnica e fincanceira entre o chroma gar e os meios usuais de análises Microbiológica 2009 Disponí vel em httpwwwciencianewscombrarquivosACETIMAGENS revistavirtualmicrobiologiaartigoximenespdf No artigo Evolução das técnicas Diagnósticas em microbiologia clínica iremos analisar a importância da implementação de novas e avançadas tecnologias no laboratório de microbiologia Iremos discutir sobre as técnicas tradicionais e também sobre as suas falhas por isso iremos analisar e descrever esse artigo destacando a importância do desenvolvimento de novas técnicas mais precisas e rápidas Porém já observamos que existem algumas técnicas inovadoras como por exemplo biologia molecularos imunoensaios e a espectrometria de massa Como sabemos as técnicas de microbiologia elas servem para identificar microrganismo isso impacta diretamente na vida do paciente e na saúde pública por isso a importância de um diagnóstico rápido e preciso pois influencia diretamente no seu tratamento e no controle da infecção O autor deixa claro a necessidade dessas técnicas de diagnóstico rápido porque já observamos o aumento de microrganismos resistentes mas ele também cita que nos dias atuais já estão ocorrendo mudanças importantes para esse setor como citado no começo dessa resenha Mas uma observação importante a descrever esse setor laboratorial ocorreu mudança porém não foi tão simples como parece diferente de outras áreas como por exemplo área de bioquímica e hematologia devido à área de microbiologia ter uma diversidade de microrganismos muito variadas o que facilita esse processo é a implementação de tecnologias mas o autor cita a necessidade de novas estratégias para reduzir os custos dessas novas ferramentas Como conhecemos as técnicas tradicionais está relacionado a métodos diretos e métodos indiretos são técnicas que englobam tempo porém tem custos menores mas precisam de técnicos bem treinados para conseguir fazer uma interpretação correta dos resultados Podemos analisar que a implementação de tecnologias e automatização melhora em relação ao tempo e quantidade mas existem limitações por existir microrganismos que necessitam de tempo para o seu crescimento ou que só cresce em meios específicos No artigo podemos observar que o setor de microbiologia é complexo devido a sua variação de microrganismos pois além de identificar qual microrganismo é precisamos saber como e onde cultivar fazer testes bioquímicos identificar sua virulência que é de extrema importância para saber o nível de patogenicidade Podemos descrever sobre o artigo que existem meios automatizados para cultura de microorganismos mas possuem desvantagens eles são grandes e de alto custo e se torna um problema em laboratórios menores Nesse momento entram formas de sanar as limitações que as técnicas citadas acima trazem que são os métodos inovadores que usam características genéticas sorológicas ou de massa molecular consistente no microrganismo Uma dessas técnicas é a biologia molecular considerada uma das maiores avanços do século XX pois traz muitos benefícios para o diagnóstico de doenças infecciosas reduzindo o tempo da identificação de um microrganismo que é essencial no tratamento Dentro desse universo de biologia molecular existe o PCR que também é considerado uma técnica inovadora porém pode acontecer muitos falsos negativos e geralmente ocorre devido uma contaminação ou um inibidor de PCR Isso mostra a importância de realizar as técnicas de forma correta e entra uma observação importante da biossegurança dentro dessas técnicas Entra no contexto também os testes imunológicos um bem conhecido é o Elisa pois ele consegue analisar grandes quantidades de microrganismos com menor número de amostra porém existe suas desvantagens que a baixa especificidade apesar de ser considerado um avanço é muito necessário a presença humana muitas etapas do processo A última técnica que é citada no artigo é a técnica de espectrometria de massa na qual ela consegue analisar as proteínas dos microrganismos É importante citar que é uma das técnicas mais revolucionárias dos tempos atuais pois necessita de um baixo custo agilidade na obtenção de resultados e não precisa de muito material biológico Mas também existe desvantagem porque uma técnica que está relacionada a banco de dados e muitas espécies não possuem ou têm similaridade genética Podemos concluir na análise desse artigo que não depende apenas de inovações mas de técnicas bem aplicadas custos e laboratórios preparados para essa inovação