Glicose Enzimatica - Instrucoes de Uso e Reagentes

TEMP0 VELOCIDADE DESLIGALIGA CENTRÍFUGA 802B 1000rpm DAIKI GLICOSE ENZIMÁTICA REF 1256 2 a 8C 181123 60 mL 1200 6020 Conteúdo R1 ENZIMÁTICO 2 x 5000 mL R2 PADRÃO 1 x 30 mL GT group R1 GLICOSE ENZIMÁTICA ENZIMÁTICO 5000 mL 181125 0818 0220 R2 GLICOSE ENZIMÁTICA PADRÃO 30 mL 0718 0220 A1 A2 1000 ul Reagente de uso 10 ul pH 7 1000 ul Reagente de uso 10 ul pH 4 1000 ul Reagente de uso 1000 ul Reagente 10 u1 solucao padrao CLOCK CONSOLIDATE LOTE DATA DE VALIDADE 052023 GT group GLICOSE ENZIMÁTICA INSTRUÇÕES DE USO MÉTODO Teste Enzimático Colorimétrico para a determinação da Glicemia Reagente com FCI Fator Clareante de Lipídeos FINALIDADE Kit para a determinação quantitativa da Glicose em soro plasma liquor e urina Somente para uso diagnóstico in vitro FUNDAMENTO A enzima glicose oxidase GOD no reagente em presença de oxigênio catalisa a oxidação da glicose presente na amostra do paciente o que leva a formação de peróxido de hidrogênio A enzima peroxidase POX também presente no reagente catalisa a reação de oxidação do fenol pelo peróxido de hidrogênio em presença de 4aminoantipirina formando um composto violeta com absorção máxima em 505nm A concentração desse composto quimiométrica é conseqüentemente a concentração da cor no directly proporcionales a concentração de glicose na amostra Glicose O2 H2O GOD Ácido Glucônico H2O2 H2O2 4Aminoantipirina Fenol POX Quinonimina 4 H2O SIGNIFICADO CLINICO Níveis elevados de glicose estão associados a diversas condições clínicas A hiperglicemia pode ser resultante de ausência na secreção da insulina ou estar associada a outras doenças endócrinas A elevação da glicose também pode estar associada a uso de fármacos que podem reduzir ou bloquear a liberação da insulina A dosagem de glicose é de grande importância para o diagnóstico e monitoramento do Diabetes Mellitus bem como o diagnóstico das acidoses metabólicas hipoglicemias e desidratações O Diabetes Mellitus é uma condição clínica crônica caracterizada pela elevação da glicemia e glicosúria Indivíduos diabéticos apresentam maior risco para a desenvoltura de complicações das cardiacas e renais A diabetes pode ser dividida em Tipo I ou insulinodependente e Tipo II ou não dependente de insulina Nível reduzido de glicose é característico da hipoglicemia Essa redução da glicose plasmática pode estar relacionada a várias condições clínicas como neoplasias doença hepática grave hipoglicemia alimentar alcoolismo etc A presença de glicose na urina depende da hiperglicemia atingir níveis elevados que ultrapassam o limiar de reabsorção tubular renal O limiar renal apresenta maior importância na glicosúria renal que pode ser congênita ou adquirida IDENTIFICAÇÃO E ARMAZENAMENTO DOS REAGENTES Conservar entre 2 e 8 C R1 Enzimático Tampão fosfato 100 mmolL pH 75 4aminoantipirina 03 mmolL fenol 10 mmolL peroxidase 15 KUL GOD 15 KUL R2 Padrão Solução de Glicose 100 mgdL ESTABILIDADE O Reagente Enzimático e o Padrão estão prontos para uso não necessitando de preparo Os reagentes são estáveis até a data de validade impressa no rótulo quando armazenados a temperatura de 2 a 8 C bem vedados e se for evitada a contaminação durante o uso Após aberto o frasco o reagente é estável por 12 semanas quando armazenado entre 2 e 8 C e por 2 semanas entre 15 e 25 C TRANSPORTE O kit não é afetado pelo transporte desde que seja entregue ao destinatário no período máximo de 07 dias e em uma temperatura de até 37 C TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA O fabricante garante a qualidade do produto se este for armazenado entre 2 e 8 C e em sua embalagem original PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos reagentes Não ingerir ou aspirar Evitar contato com a pele e mucosas Recomendamos a aplicação das Boas Práticas em Laboratórios Clínicos para a execução dos testes De acordo com as instruções de biossegurança todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes Para o descarte seguro dos reagentes e materiais biológicos seguir sempre as regulamentações normativas locais estaduais ou federais para a preservação ambiental Não misturar reagentes de lotes diferentes ou trocar as amostras evitando assim contaminação cruzada O R1 Enzimático não deve ser utilizado quando sua absorbância média contra água em 50mm apresenta resultado superior a 0300 e também quando apresentar turbidez ou sinais de contaminação MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS Espectrofotômetro UVVIS Tubos e pipetas Banhomaria ou termostatizador na temperatura constante de 37 C Cronômetro AMOSTRAS BIOLÓGICAS SORO E PLASMA fluoreto soros plasmas devem ser separados até 30 minutos após coleta para evitar a glicólise Se armazenado sob refrigeração 2 a 8 C a glicose é estável por até 24 horas URINA Utilizar amostra de 24 horas Acondicionar em frasco fechado e manter sob refrigeração de a 8 C A amostra deve ser centrifugada e o sobrenadante utilizado nas análises A glicose na urina é estável por até 6 horas LIQUOR A dosagem deve ser realizada imediatamente após a coleta Se não for possível centrifugar a amostra e armazenar o sobrenadante de 2 a 8 C por até 24 horas INTERFERÊNCIAS Citrato EDTA Heparina e Oxalato podem produzir resultados falsamente diminuídos Não devem ser utilizados soros ictéricos Amostras com Triglicérides até 1000 mgdL hemoglobina até 200 mgdL e ácido ascórbico até 5 mgdL não interferem no teste PROCEDIMENTO DO TESTE 1 Observações O nível de água no banhomaria deve ser superior ao dos reagentes nos tubos A observação minuciosa da limpeza e secagem da vidraria da estabilidade dos reagentes da pipetagem da temperatura e do tempo de reação são de extrema importância para se obter resultados precisos e exatos A água utilizada nos laboratórios deve ser ser purificada utilizandose métodos adequados para as finalidades de uso Colunas deionizadoras saturadas liberam diversos íons animais e agentes oxidantes que deterioram os reativos 2 Termostatizar o reagente Ajustar a temperatura do banhomaria ou termostatizador para 37 C A temperatura deve permanecer constante durante a realização do teste 3 Leitura do teste Comprimento de onda 500 nm Hg 546 nm Cubeta 1 cm Temperatura 37 C Medição Bater a absorbância contra branco É necessário apenas um branco por bateria de testes 4 Procedimento Pipetar na cubeta Branco Amostrapadrão Amostra ou Padrão 10μL R1 Enzimático 1000μL 1000μL Homogeneizar e manter incubar por 10 minutos a 37 C A absorbância deve ser lida dentro de 60 minutos contra o reagente branco 5 Cálculos GlicosemgdLAbsorbância da amostra Concentração Padrão Absorbância Padrão Fator de Calibração FC Concentração do PadrãomgdL Absorbância do Padrão GlicosemgdL Absorbância da Amostra FC 51 Exemplo com Padrão Concentrado do Padrão 100 mgdL Absorbância da Amostra 0204 Absorbância do Padrão 0302 GlicosemgdL 02040302 100 676 mgdL 52 Exemplo com Fator de Calibracao FC 1000302 331 GlicosemgdL 331 0204 6759mgdL CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO 1 Linearidade da reação A linearidade do método é de até 500mgdL Para amostras com concentrações mais elevadas diluir em 1 2 com solução salina a 09 e repetir a determinação Multiplicar o resultado por 3 2 Valores de referência Amostra Valor mgdL Interpretação SoroPlasma jejum de 1 horas 70 99 mgdL Glicemia jejum normal 100 125 mgdL Glicemia jejum alterada 125 mgdL Provável diabetes Recémnascidos Mellitus Prematuros 20 a 80 mgdL Normal 20 a 50 mgdL normal Líquor 40 a 75 mgdL Normal Urina 20 mgdL Normal Urina de 24 h 250 mgdL Normal Estes valores devem ser utilizados como uma orientação É recomendado que cada laboratório estabeleça seus próprios valores de referência 3 Sensibilidade 248 mgdL 4 Comparação de métodos O kit para a dosagem de Glicose foi comparado com outros kits comercialmente disponíveis Amostras diversas foram utilizadas na comparação dos testes dentre essas soros controle e amostras de pacientes Os resultados obtidos mostraram boa concordância 5 Repetibilidade e reprodutibilidade Foram utilizados soros controle comercialmente disponíveis para a avaliação da repetibilidade e reprodutibilidade do kit Os soros foram reaconituidos eou preparados segundo as recomendações do fabricante Trinta determinaçoes dos soros controle foram realizadas com o kit de Glicose da GTgroup para a determinação da repetibilidade e 10 determinações por soro controle para a reprodutibilidade As médias das determinações foram calculadas e comparadas com os valores alvo 51 Repetibilidade Soro Controle N Média dos valores obtidos DP CV SC1 30 5350 0765 143 SC2 30 11273 2876 255 SC3 30 38612 11323 293 52 Reprodutibilidade Soro Controle N Média dos valores obtidos DP CV SC1 10 5630 0873 155 SC2 10 10934 2782 254 SC3 10 38289 12092 316 6 Controle de qualidade Foram utilizados soros controle comercialmente disponíveis para a avaliação do kit Os soros foram reconstituídos eou preparados segundo as recomendações do fabricante Dez determinações dos soros controle foram realizadas com o kit de Glicose da GTgroup As médias das determinações foram calculadas e comparadas com os valores alvo Soro Controle Valor alvo Média dos valores obtidos de Recuperação SC1 211 20834 9873 SC2 302 30021 9941 SC3 283 28634 10118 Todo soro controle com valores determinados para Glicose pelo método enzimáticocolorimétrico pode ser utilizado APRESENTAÇÃO DO KIT CÓDIGO REAGENTE VOLUME NUMERO DE DETERMINAÇÕES 1116 R1 ENZIMÁTICO 2 X 250 mL 500 1256 R2 PADRÃO 2 X 50 mL 1000 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1 Trinder P Determination of Glucose in blood using glucose oxidase with an alternate oxygen acceptor Ann Clin Biochem V6 p2427 1969 2 Schettler G And Nusselt Arib Med Soz Med Parv Med 10 25 1975 3 BARHAM D TRINDER P An improved colour reagent for the determination of blood glucose by oxidase system Analyst 427p142145 1972 4 YOUNG DS Effects of drugs on clinical laboratory tests vol 2 5 ed Washington DC AACC Press 2000 5 WESTGARD J O et al A multirule shewhart chart quality control in clinical chemistry Clin Chem v27 n8p3501 1981 INFORMAÇÕES AO CONSUMIDOR A GTgroup garante o desempenho deste produto dentro das especificações até a data de expiração indicada nos rótulos desde que cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nas instruções sejam seguidos corretamente N DO LOTE DATA DE FABRICAÇÃO E DATA DE VALIDADE VIDE RÓTULO DO PRODUTO PRODUZIDO POR VIDA Biotecnologia SA CNPJ 11308334000185 Avenida José Cândido da Silveira 2100 Horto Florestal CEP 30385350 Belo Horizonte Minas Gerais wwwvidabiotecnologiacombr Departamento de Serviços Associados 31 34663351 desativadoodelgcombr Regd Tecni Renata Silva CRBIO4 5736004D RegMS 201875007040 Rev 112017 DISTRIBUIDOR POR Biospil Produtos Diagnósticos LTDA Rua Mucuri nº255 Bairro Floresta Belo HorizonteMG BRASIL CEP 30150190 CNPJ 05905525000190 Rt Virgínia Lane Oliveira CRF MG 28414 Informações de contado SAC FoneFax 553135895000 Email sacgtgroupnetbr SIGNIFICADO DOS SÍMBOLOS UTILIZADOS NO RÓTULO DO PRODUTO Conteúdo suficiente para n testes Data limite de utilização do produto mmaaaa CAL Material Calibrador Limite de temperatura conservar a Consultar instruções de uso REF Código do produto MD Produto para Diagnóstico In Vitro LYOPH Liofilizado Corrosivo Risco Biológico Tóxico R Reagente VV Data de Fabricação ddmmaaaa LOT Número de Lote Glicose No text present GLUCOSE MONOREAGENTE Glucose Monoreactiva Glucose Monoreagent R1 2500 mL Reagente Enzimático Enzymatic Reagent Lot 0079 202312 Ms 10269360136 Serum Clot Activator Biocon No text found Espectrofotômetro SP22 MODE OA 0T Print INC DEC ENT L CONT FACTOR SPECTROPHOTOMETER IN USE GLUCOSE MONOREAGENTE K082 INSTRUÇÕES DE USO FINALIDADE Método para a determinação da Glicose em amostras biológicas de Plasma fluoreto soro líquido cefalorraquidiano ascítico pleural e sinovial Testo enzimático colorimétrico somente para uso diagnóstico PRINÍCIPIO DE AÇÃO Metodologia Enzimática Colorimétrica GOD PAP Trinder Oxidase GOD cácido cianurico e agente realça Glicose O2 H2O Ácido Glucónico H2O2 Peróxido de Hidrogênio em presença da Peroxidase POD reage com 4Aminaptipirina e Fenol formando um cromogênio vermelho cereja cuja intensidade de cor é proporcional a concentração de Glicose REAGENTES Número 1 Reagente Enzimático Conservante entre 2 e 8 C Contém Tampo 36 mmoll Fenol 20 mmoll 4Aminopirina 5 mmoll Glucose Oxidase 10000 UI Peroxidase 20 UI estabilizantes surfactante e conservante Número 2 Reagente Conservar entre 2 e 8C ver abaixo validade Contém Glicose 1000 mgdL e conservante APRESENTAÇÃO Apresentação Reagente N1 Reagente N2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 250 mL 2 x 250 mL 4 x 250 mL 5 x 20 mL 40 mL 10 x 40 mL 2 x 60 mL 4 x 60 mL 6 x 60 mL 8 x 60 mL 10 x 60 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotômetro ou colorímetro banhomaria 37C relógio ou cronômetro pipetas tubos de ensaio Bioclín N e Biocontrol P BioclinEstes itens são encontrados no mercado especializado de artigos para Laboratórios de Análises Clínicas CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento deverá ser de 2 a 8CO transporte em temperaturas até 30C não deverá exceder 5 dias Manter ao abrigo da luz e evitar umidade Não congelar CUIDADOS ESPECIAIS 1 Somente para uso diagnóstico in vitro 2 Seguir com rigor a metodologia proposta para obtenção de resultados exatos 3 Água utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes 4 Colunas desviadas das amostras e barras água alcalina ions certos e reagentes alcalinos e redutores que podem alterar de força e um agente contaminante que pode alterar significativamente os resultados pontuação ou materiais utilizados paraentalização dos testes devem ser adequadamente lavado e os lisquem deve ser residuo 6 O nível de água no banhomaria deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio 7 Os reagentes N1 e N2 contém AZIDA Sóldica que pode ser irritante para pele e mucosas Manusear com cuidado 8 O desenvolvímento de coloração rósea no reagente N1 não interfere na qualidade e estabilidade do reagente desde que seja utilizado o Branco correspondente e dosagens periódicas do padrão 9 Determinar o fator periodicamente e a cada lote do produto 10Recomendase ajustar as normas locais estaduais ou nacionais de política de código que o descarte acorda com a legislação vigente 11 Para obtenção de informações relacionadas a biossegurança ou em caso de acidentes ou produto consultar a FISPQ Ficha de Informações de Segurança de Produtos Químicos disponibilizadas no site wwwbioclincombr ou através de solicitação pelo SAC Serviço de Assessoria ao Consumidor da Quibasa 12 Não utilizar o produto em caso de danos na embalagem 13É imprescindível que os instrumentos e equipamentos utilizados estejam devidamente calibrados e submetidos às manutenções periódicas AMOSTRAS Plasma fluoretado soro líquido cefalorraquidiano líquido ascítico pleural e sinovial O uso do anticoagulante Fluoreto Biólin è recomendado por ser inibidor da glicólise Usar 1 gota para cada 3 mL de sangue O soro só pode ser usado se for centrifugado separado das células e dosado imediatamente após a coleta Em outros líquidos biológicos adicionar um inibidor da glicólise na mesma proporção descrita para o sangue centrifugando a amostra antes de iniciar a dosagem Plasma ou Soro estável por 7 dias entre 2 e 8C 1 líquido Cefalorraquidano estável por 3 dias entre 2 e 8C e 1 mês a 20C DESCRIÇÃO DO PROCESSO A estabilidade de calibração do kit Glicose Monoreagente instalado em equipamento com refrigeração é de pelo menos 30 dias Esta estabilidade pode variar de acordo com as condições do teste do equipamento e do ambiente Portanto sugerese acompanhar o desempenho do produto utilizando soros controles TÉCNICA A Bioclin recomenda para uso do kit utilizar como soro controle os kits Biocontrol N e Bioclin Marcar 3 tubos de ensaio o Branco A Amostra P Padrão e proceder como a seguir Amostra Branco Padrão Amostra 16µL 10µL 10µL 10µL Reagente N2 Reagente N1 10 mL 10 mL 10 mL Homogeneizar bem e colocar em banhomaria 37C por 10 minutos Ler a absorbância da Amostra e do Padrão em 505 nm 490 550 nm acertando o zero com o Branco A cor é estável por 30 minutos CÁLCULOS Glicose mgdL Absorbância da Amostra x 100 Absorbância do Padrão Exemplo Absorbância da Amostra 0347 Absorbância do Padrão 0250 Glicose mgdL 0347 x 100 99 0350 Como a reação segue a Lei de LambertBeer o Fator de Calibração pode ser constante Fator de Concentracão do Padrão 100 mg dL Calibração Absorbância do Padrão Glicose mgdL Absorbância da Amostra x Fator de Calibração Exemplo Fator de Calibração 100 286 0350 Glicose mgdL 0347 x 286 99 Os resultados serão expressos em mgdL LIMITAÇÕES DO PROCESSO O método proposto não é indicado para dosagem de Glicose na urina INTERFERENTES Amostras com concentrações até 20 mgdL de Bilirrubina 750 mgdL de Triglicerídeos e 160 mgdL de Hemoglobina não produzem interferência significativa Nos casos de interferências produzidas pela amostra realizar também um Branco da Amostra a fim de minimizar a ação dos interferentes Proceder como a seguir Marcar 1 tubo como Branco da Amostra e colocar 10 mL de Cloreto de Sódio 085 com 10 µL da Amostra Determinar a sua absorbância em 490 550 nm acertando o zero com água destilada ou ionizada Subtrair a absorbância assim obtida da absorbância do tubo da Amostra Calcular a concentração multiplicando o resultado pelo Fator de Calibração O uso de medicamentos altamente redutores como Ácido Ascórbico Vitamina C interferem na reação pois competem com o composto de H2O2 removendo valores falsos diminuindoos Por esta razão devese suspender o uso no pós meses 12 a 180 dias antes da coleta da amostra CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE Laboratório Clínico deve possuir um programa interno de controle da qualidade onde procedimentos normas limites e tolerâncias para variações sejam claramente estabelecidos É importante ressaltar que todos os sistemas de medição apresentam uma variabilidade analítica característica que deve ser monitorada pelo critério laboratórios Para tanto é recomendado a utilização de materiais de gases pertencem anzam para a exatidão das dosagens RASTREABILIDADE O padrão kit é rastreável ao material de referência SRM 917 do NIST National Institute of Standards and Technology VALORES DE REFERÊNCIA Os valores de referência em mgdL para o presente método foram obtidos através da determinação de Glicose em populações sadias do sexo masculino e feminino Prematuro 2060 mgdL Plasma 0 a 1 dia 40 60 mgdL 1 dia 50 89 mgdL Crianças e adultos 80 99 mgdL 1 dia 50 70 mgdL Liquor Para converter os valores de mgdL em mmolL SI multiplicar por 00556 Estes valores devem ser usados como orientação sendo que cada laboratório deverá criar sua faixa de valores de referência de acordo com a população atendida Os resultados fornecidos por este kit devem ser interpretados pelo profissional médico responsável não sendo o único critério para a determinação do diagnóstico eou tratamento do paciente DESEMPENHO DO PRODUTO EXATIDÃO Recuperação A análise de recuperação foi feita com 05 determinações de amostras As exatidões foram calculadas e se encontraram em boa concordância com os valores de referência obtendo uma recuperação entre 94 e 104 Comparação de Métodos O kit Glicose Monoreagente foi comparado com outro método para dosagem de glicose comercialmente disponível Foram realizadas 42 análises e os resultados foram avaliados A equação linear obtida foi Y 10053X 04653 e o coeficiente de correlação 09982 Com estes resultados podese concluir que o kit apresenta boa especificidade metodológica PRECISÃO Repetibilidade A repetibilidade foi calculada a partir de 40 determinações sucessivas utilizando 3 amostras com concentrações diferentes obtendose os seguintes resultados Repetibilidade Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentração Média mgdL 24075 11501 7359 Desvio Padrão mgdL 372 415 192 Coeficiente de Variação 155 361 261 Reprodutibilidade A reprodutibilidade foi calculada à partir de 40 determinações sucessivas durante 3 dias consecutivos utilizando 3 amostras com concentrações diferentes obtendose os seguintes resultados Reprodutibilidade Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentração Média mgdL 24229 11458 7406 Desvio Padrão mgdL 256 060 056 Coeficiente de Variação 106 052 076 SENSIBILIDADE A sensibilidade foi calculada a partir de 40 determinações de uma amostra isenta de glicose A média de 055 mgdL com desvio padrão de 025 mgdL A sensibilidade que indica o limite de detecção do método corresponde à média mais 3 vezes o desvio padrão e é igual a 131 mgdL LINEARIDADE A reação é linear até 500 mgdL Para amostras com valores acima de 500 mgdL diluir a amostra com Cloreto de Sódio 085 repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição SIGNIFICADO DIAGNÓSTICO A homeostase glicêmica é controlada pela ação de diversos hormônios especialmente a insulina que mantêm o equilíbrio da concentração de glicose Alterações hormonais e outros fatores levam a variações nesta homeostase desencadeando hiper e hipoglicêmia A Hiperglicemia ocorre em vários tipos de Diabetes Mellitus onde são frequentes retinopatias lesões renais neuropatias e aterosclerose O Diabetes Mellitus é classificado em Diabetes mellitus insulino dependente Tipo I Diabetes mellitus insulino não dependente Tipo II Diabetes mellitus associado à certas condições e sindromes classificado anteriormente como diabetes secundário e Diabetes gestacional Nas Hipoglicemias HG os níveis glicêmicos que levam às suas manifestações são extremamente variáveis As manifestações podem ocorrer no jejum ou pós prandial Ocorr HG de jejum no insulionoma tumores não pancreáticos doenças hepáticas hipoadrenalismo doença de Addison hipopituitarismo doença de Simmond enfermidade do armazenamento retardado do glicogênio doença de Von Gierke A hipoglicemia pósprandial ocorre devido a causa reativa sintomas de HG 1 a 3 horas após a refeição podendo ainda ser de origem alimentar ou em consequência da diabetes mellitus Tipo II e de intolerância à Glicose REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1 TRINDER P Ann Clin Biochem 624 1969 2 TONKS DB Quality Control in Clinical Laboratories 1983 3 LOTT JA TURNER K Clin Chem 1987 211754 1970 4 CARL A B and EDWARD R A Tietz Textbook of Clinical Chem 2nd ed 928997 5 WHO Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations and stability of blood plasma and serum samples WHODILAB991 rev 2 200231 6 QUIBASA Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo todos os reagentes Bioclin são testados pelo Departamento de Controle de Qualidade A qualidade dos reagentes é assegurada até a data de validade mencionada na embalagem de apresentação desde que armazenados e transportados nas condições adequadas QUIBASA QUÍMICA BÁSICA Ltda Rua Teles de Menezes 92 Santa Branca CEP 31565130 Belo Horizonte MG Brasil Tel 31 34395454 Email bioclinbioclincombr CNPJ 19400787000107 Indústria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Serviço de Assessoria ao Cliente Tel 0800 0315454 Email sacbioclincombr Número de registro do kit de Glucosae Monoreagente na ANVISA 10269360136 Revisão Junho2022 SIMBOLOGIA UNIVERSAL LOT MD DOSE DO PRODUCTO 040 0315454 1 CENTRO DE ENSINO SUPERIOR DE ILHÉUS RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA REFERENTE À DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA DOSAGEM DE GLICOSE SÉRICA ILHÉUSBAHIA 2023 2 ILHÉUSBA 2023 Relatório de aula prática para obtenção de nota parcial apresentado à docente Francine Pinto referente à disciplina de Citologia Clínica pela discente Ludmilla Silva Teles Vieira 3 RESUMO O presente relatório tem como objetivo discorrer sobre a aula prática ocorrida no dia 22 de maio de 2023 referente à Técnica de dosagem de glicose sérica ministrada pela professora Francine Pinto da disciplina de Citologia Clínica da Faculdade de Ilhéus CESUPI Faculdade Madre Thaís Na aula prática estavam presentes os alunos do curso de Biomedicina e Farmácia devidamente paramentados para a prática laboratorial A turma foi dividida em equipes de cinco integrantes para facilitar de forma dinâmica a realização dos procedimentos Todos os materiais necessários e utilizados estavam disponíveis na bancada bem como os reagentes tubos galerias centrifuga espectrofotômetro e dentre outros Após a prática foram observados seus resultados levando a interpretação das reações bioquímicas de modo a contextualizar a aprendizagem prévia teórica Palavraschave Bioquímica Clínica Glicose ABSTRACT This report aims to discuss the practical class that took place on May 22 2023 referring to the Serum Glucose Measurement Technique taught by Professor Francine Pinto from the Clinical Cytology discipline at Faculdade de Ilhéus CESUPI Faculdade Madre Thais The students of the Biomedicine and Pharmacy course were present in the practical class duly equipped for laboratory practice The class was divided into teams of five members to dynamically facilitate the performance of the procedures All necessary and used materials were available on the bench as well as reagents tubes galleries centrifuge spectrophotometer and others After practice the results were observed leading to the interpretation of biochemical reactions in order to contextualize previous theoretical learning Keywords Clinical Biochemistry Glucose 4 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO05 11 APLICAÇÔES DA BIOQUÌMICA05 12 OBJETIVO DO ESTUDO DO CARBOIDRATO05 2 OBJETIVOS06 3 MATERIAIS06 4 METODOLOGIA11 5 RESULTADOS12 6 DISCUSSÃO13 7 CONCLUSÃO15 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS16 5 1 INTRODUÇÃO Na bioquímica não obstante da grande existência de seres vivos muitas reações e estruturas compartilham as mesmas funções Essas funcionalidades importantes para auxiliar em pesquisas científicas são empregados seres de maior reprodutibilidade tais como ratos e camundongos Assim todas as espécies são formadas por elementos químicos como o carbono hidrogênio oxigênio e nitrogênio que em diferentes combinações constituem novas moléculas Tendo em vista que as moléculas produzidas pelas diferentes combinações ainda podem se recombinar dando origem a novos compostos biologicamente ativos Esses compostos são analisados de forma isolada mas atuam em conjunto para o melhorar o funcionamento do organismo Em seu conhecimento as principais fontes estudo são a água carboidratos proteínas ácidos nucleicos e não menos importante os lipídios O entendimento acerca destas estruturas moleculares nos permitirá obter um vasto conhecimento ao longo da vida Enfim saber separalas distintamente é uma questão muito difícil já que são bem íntimas em seu pleno funcionamento 11 APLICAÇÕES DA BIOQUÍMICA O profissional bioquímico tem a utilização da tecnologia a seu favor para o melhoramento não apenas orgânico mas também ao nível industrial Tais conhecimentos podem auxiliar no aprimoramento de diversas áreas de interesse econômico da indústria Das importantes aplicabilidades em que consiste o conhecimento bioquímico posso mencionar as áreas alimentícias farmacológicas cosmetológicas e a biotecnologia Contudo o principal foco do aprendizado segue na aplicação perante a população como as análises clínicas ambientais e químicas 12 OBJETIVO DO ESTUDO DO CARBOIDRATO O estudo do carboidrato tem como principal objetivo o reconhecimento da sua estrutura bem como de suas propriedades físicas e químicas 6 Sendo assim o mais importante para o entendimento das suas transformações no interior das células O carboidrato também chamado de glicídio sacarídeo ou simplesmente açúcar Sendo assim possuem função energética importante tanto de forma imediata em forma de armazenamento ou como parte integrante dos nucleotídeos energéticos ATP Desse modo tratase da substância orgânica mais abundante na Terra devido às múltiplas utilidades aos seres vivos Portanto o carboidrato produzido pelos seres autótrofos através da fotossíntese 2 OBJETIVOS GERAL Oferecer aos discentes o conhecimento prático com o conteúdo teórico apresentado em sala de aula ESPECÍFICOS Aprender a realizar a técnica específica da dosagem da glicose sérica desde a coleta da amostra biológica em que incluem sua identificação condições de armazenamento transporte processamento bem como a interpretação dos resultados envolvendo a análise no espectrofotômetro 3 MATERIAIS Os materiais utilizados durante a aula prática para a realização da Coloração Papanicolau foram Espectrofotômetro Tubo de ensaio Tubos de coleta Galeria Pipetas em volumes variados Centrifuga Cubeta de Quartzo Ponteiras Banho Maria Reagente para dosagem de glicose 7 Água destilada Imagem 1 Espectrofotômetro 8 Imagem 2 Centrifuga Imagem 3 Tubos de coleta 9 Imagem 4 Cubetas de Quartzo Imagem 5 Pipetas Seringas Agulhas 10 Imagem 6 Reagente para Glicose Imagem 7 Soro centrifugado 11 Imagem 8 Reação Enzimática Imagem 9 Reações Prontas para análise 4 METODOLOGIA A princípio para obtenção dos resultados bioquímicos é necessário a obtenção de amostras biológicas para sua análise Todos os materiais 12 biológicos podem fornecer informações importantes acerca do que acontece no organismo O sangue é o principal tecido utilizado na aquisição dos resultados da bioquímica clínica Visto que este material biológico considerado o deposito de todos tipos de substância desde o biologicamente ativo até o metabólito Assim para a obtenção do mesmo é necessário à sua coleta do paciente realizada pelo profissional flebotomista Toda amostra de sangue com finalidade de diagnóstico deve ser acondicionada em locais próprios para a sua manipulação Sendo assim o sangue deve ser coletado e colocado em tubos de colete específicos para cada tipo de exame Desse modo o tubo ideal para mensurar a glicose contém fluoreto de sódio um reagente que impede a utilização da glicose pelas hemácias A cor da sua tampa é cinza No entanto caso o laboratório não possua pode ser acondicionado em um tubo seco com tampa vermelha ou amarela a cor depende do fabricante Assim que obtemos a amostra fundamental que a mesma passe pelo processo de centrifugação Esse passo é importante visto que ele que permite separar os componentes sólidos da fase líquida do sangue Desse modo para o diagnóstico da diabetes utilizaremos apenas o soro sanguíneo e não a porção celular Relembrando que soro é a porção líquida sem a presença de anticoagulante já o plasma é porção líquida com anticoagulante Com a obtenção da amostra podemos obter o diagnóstico da diabetes Desse modo o exame solicitado é o de glicemia em jejum Sendo assim o paciente deve chegar em jejum ao laboratório para realizar o seu procedimento Desse modo ao sair o resultado devemos comparar com o valor de referência para dar o respectivo resultado Portanto os resultados podem ser Não diabéticos valor de 40 à 99 mgdl Pré diabéticos 100 à 124 mgdl Diabéticos acima de 125 mgdl 5 RESULTADOS Foi possível observar após o procedimento prático que houve duas colorações distintas das amostras sendo as quais a rosa e outra cor laranja 13 A cor rosa referese a presença da reação enzimática redutora para obtenção da glicose A presença da cor rosa é diretamente proporcional a quantidade de glicose na amostra ou seja quanto mais glicose mais rosa será podendo chegar a tons vermelhos em pacientes com diabetes descontrolada Já a coloração laranja deve se ao fato de ocorrer reação oxidativa no reagente ou seja o mesmo foi mal acondicionado interferindo no resultado e assim chegando a um processo inconclusivo 6 DISCUSSÃO Acerca da atividade laboratorial necessária para o diagnóstico de algumas patologias em suma importância a investigação é fundamental Sendo assim vários indícios sugerem a análise de amostras biológicas afim de elucidar o que está de errado com o organismo Desse modo através de métodos analíticos podemos concluir o diagnóstico de certas patologias Portanto as amostras devem seguir regras para garantir os melhores resultados Para a obtenção do diagnóstico e consequente resultados excelentes fundamental que o paciente realize jejum de algumas horas Desse modo certos exames requerem poucas horas de jejum cerca de quatro horas como o ácido úrico e enzimas Contudo outros exames necessitam de um um tempo maior de jejum cerca de doze horas como o colesterol total e suas frações Sendo assim para o diagnóstico da diabetes precisamos dosar a quantidade de glicose presente no sangue Portanto o tempo de jejum ideal para a glicemia é de oito horas No entanto importante mencionar que o tempo máximo de jejum permitido é de quatorze horas Pois se esse tempo for prolongado existe o risco do paciente desmaiar em plena coleta de sangue devido a utilização das fontes energéticas do indivíduo A diabetes mellitus é definida como uma patologia do sistema endócrino e de origem multifatorial Entretanto pode ser decorrente da falta da produção da insulina ou simplesmente pela má utilização desse hormônio na corrente sanguínea Desse modo nos dois casos a falta ou mal 14 desempenho do hormônio vai acarretar no aumenta da taxa da glicose na corrente sanguínea Portanto esse aumento é denominado de hiperglicemia hiper muito glicemia açúcar no sangue A diabetes é uma patologia crônica caracterizada pela deficiência ou pela má utilização do hormônio insulina Desse modo caracterizada como uma doença multifatorial que ainda pode ser multi sistêmica Entretanto diagnosticado a diabetes em uma pessoa não significa sua sentença de morte Sendo assim muitos indivíduos conseguem levar uma vida perfeitamente normal com a doença instalada em seu organismo A insulina é definida como um hormônio produzido pelas células beta do pâncreas Essas células beta são responsáveis pela produção de hormônios endócrinos que vão atuar na corrente sanguínea em seus tecidos alvos Desse modo podemos concluir que o pâncreas é o responsável indireto pela presença ou não da insulina no corpo humano A insulina pode atuar em diversos tecidos do corpo humano tais como fígado músculos estriado esquelético gordura e não menos importante as células Contudo a insulina não atua em células que não possuem receptor específico para esse hormônio como as células do sistema nervoso Acerca do mecanismo de ação da insulina ou seja como a mesma realiza a sua função necessitamos entender como ela funciona Por apresentar vários mecanismos diferentes por atuar em diversos tecidos alvo vou apenas explicar de modo direto sobre os carboidratos A ação da insulina inicia quando se liga ao seu receptor específico na membrana da célula o receptor de substrato da insulina do tipo1IRS1 Logo pode atuar também no receptor de substrato da insulina do tipo 2IRS2 Sendo estes um receptor do tipo tirosina quinase que vai ativar outras moléculas no conteúdo citoplasmático os segundos mensageiros Desse modo esses segundos mensageiros vão realizar diversas respostas a nível celular Portanto posso explicar sobre como esses segundos mensageiros vão permitir a entrada da glicose na célula Através da ação insulínica a glicose possui a capacidade de sair do meio extra celular e entrar no meio intracelular Desse modo para tal 15 movimento necessitase de um portal de entrada específico para a glicose Essa porta de entrada daremos o nome de transportador de glicose do tipo 4 GLUT4 Sendo assim para que esse portal se abra precisamos de um gatilho para dar início a todo o processo Logo o iniciador a insulina vai se ligar ao seu receptor específico e ativar toda a cascata de sinalização celular Conforme for ocorrendo a sinalização os segundos mensageiros vão ativar internamente o GLUT4 Após ativado esse transportador permite a passagem da glicose para o interior da célula para desempenhar as suas funções orgânicas Contudo como em todo processo pode existir falhas correndo o risco da instalação das doenças Desse modo por fatores genéticos quando o IRS 1 não é expresso ou seja não existe no organismo pode ocorrer a resistência a insulina Porém o indivíduo não apresentará uma hiperglicemia elevada Sendo assim pelos mesmos fatores genéticos quando o IRS2 não é expressado o paciente pode não reconhecer de forma alguma a ação da insulina Logo nesse caso a hiperglicemia será bastante elevada Conforme alguns autores a falta de expressão do IRS1 está associada ao diabetes mellitus do tipo2 Esse tipo da diabetes conhecida como insulino resistente Sendo assim a falta da expressão do IRS2 está associada ao diabetes mellitus do tipo1 Portanto conhecida por não apresentar nenhuma ação da insulina em virtude de não existir seu receptor ou por falta da sua produção 7 CONCLUSÃO A contextualização do conteúdo teórico ao aprendizado colocado em prática é de grande importância para que os discentes saiam do imaginário e ativem a experimentação no processo do fazer A aula prática nos possibilitou compreender melhor como é realizada a dosagem da glicose sérica bem como sua devida importância para a Bioquímica Clínica auxiliando em diretrizes preventivas e de controle às demais patologias que podem comprometer o metabolismo como a diabetes 16 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BERG JM TYMOCZKO JL STRYER L Bioquímica 6 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2008 CAMPBEL M K FARRELL SO BioquímicaSão Paulo Thomson Learning 2007 CHAMPE PC HARVEY RA FERRIER DR Bioquímica Ilustrada 4 ed Porto Alegre Artmed 2009 DEVLIN TM Manual de Bioquímica com Correlações Clínicas 7ª ed Ed Blucher 2011 HARVEY RA FERRIER DR Bioquímica Ilustrada 5ª ed Artmed 2012 NELSON David L COX Michael M Princípios de bioquímica de Lehninger 7 Porto Alegre Artmed 2019 1278 p SOUZA K A F D NEVES V A Fatores que afetam a atividade enzimática Disponível em httpwwwfcfarunespbralimentosbioquimicapraticasproteinas atividadeenzimaticahtm WAVELENGTH biospectro Espectrofotômetro SP22 MODE OA T Print INC DEF ENT CONCFACTOR SPECTROPHOTOMETER IN USE No text extracted HS LAB CENTRÍFUGA BANHO MARIA DIGITAL CONTROLE NOVUS MV LABOR EQUIPAMENTOS LIGA DESL