Métodos Parasitológicos: Exame Parasitológico de Fezes

Métodos parasitológicos Profa Lisiery Negrini Paiatto Badú Exame Parasitológico de fezes MÉTODOS EMPREGADOS Técnicas de concentração Sedimentação Simples Hoffmann Pons e Janner Centrífugo sedimentação MIF formol éter Flutuação Simples Willis Centrífugo flutuação Faust e cols Técnicas especiais Fita gomada Kato Exame Direto a fresco INDICAÇÃO MÉTODOS ESTRUTURAS Frascos Coletores Microscopia EXAME PARASITOLÓGICO DE FEZES MODELO DE FICHA DE IDENTIFICAÇÃO DO MATERIAL FICHA NO NOME DATA DE EMISSÃO DAS FEZES DATA DE RECEBIMENTO DAS FEZES CONSISTÊNCIA DAS FEZES FORMADAS PASTOSAS DIARRÉICAS ACONDICIONAMENTO GELADEIRA FORMOL MIF MÉTODOS DE EXAMES SOLICITADOS RESULTADO DO EXAME NEGATIVO POSITIVO RESULTADO POSITIVO PARA TROFOZOÍTAS DE PROTOZOÁRIOS CISTOS DE PROTOZOÁRIOS LARVAS DE NEMATELMINTOS Giardia lamblia Giardia lamblia Strongyloides stercoralis Entamoeba histolytica Entamoeba histolytica Ancylostomatidae Entamoeba coli Entamoeba coli Endolimax nana Endolimax nana Iodamoeba bütschlii Iodamoeba bütschlii OVOS DE PLATELMINTOSNEMATELMINTOS Schistosoma mansoni Taenia sp Hymenolepis nana Ascaris lumbricoides Trichuris trichiura Enterobius vermicularis Strongyloides stercoralis Ancylostomatidae OUTROS FUNCIONÁRIO RESPONSÁVEL RESPONSÁVEL TÉCNICO Principais métodos parasitológicos Os principais métodos de enriquecimento ou de concentração utilizados são Sedimentação espontânea método de Hoffmann Pons e Janer ou método de Lutz Este método permite o encontro de ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários Sedimentação por centrifugação Método de Blagg conhecido por MIFC Método de Ritchie e o Coprotest Usados para a pesquisa de cistos de protozoários e de ovos e larvas de helmintos Flutuação Método de Willis Indicado para pesquisa de ovos leves ancilostomídeos Centrífugoflutuação Método de Faust Utilizado para pesquisa de cistos e oocistos de protozoários e de ovos leves Concentração de larvas de helmintos Método de BaermannMoraes e o método de Rugai usados para pesquisa de larvas de Strongyloides stercoralis As fezes enviadas ao laboratório clínico devem ser submetidas a um desses métodos citados Como não existe um método capaz de diagnosticar ao mesmo tempo todas as formas parasitárias o que se faz de rotina é o emprego de um método geral como o de Lutz ou de Hoffmann Pons e Janer de fácil execução e pouco dispendioso um específico para cistos de protozoários e um para a pesquisa de larvas de helmintos Exame direto a fresco Colocar duas a três gotas de salina a 085 em uma lâmina de vidro Tocar com a ponta de um palito em vários pontos das fezes transferindo uma pequena porção para a lâmina de microscopia Espalhar as fezes fazendo um esfregaço e examinar ao microscópio A espessura do esfregaço não deve impedir a passagem de luz Este método é indicado principalmente para a pesquisa de trofozoitos de protozoários em fezes diarréicas recém emitidas para a identificação de cistos de protozoários e larvas de helmintos corase a preparação com Lugol O uso de lamínula é facultativo Método de Lutz ou de Hoffmann Pons e Janer sedimentação espontânea Colocar aproximadamente 2g de fezes em um frasco cônico ou em um copo plástico descartável com cerca de 5 ml de água e dissolver bem com auxílio de um palito de sorvete descartável Acrescentar mais 20 ml de água Coar a suspensão para isto usase gaze cirúrgica umedecida dobrada em quatro e colocada em um coador de plástico pequeno num cálice cônico de 200 ml de capacidade Completar o volume do cálice com água UNIVERSAL Deixar essa suspensão em repouso durante duas a 24 horas Desprezar o líquido sobrenadante cuidadosamente homogeneizar o sedimento e coletar uma porção do mesmo Colocar parte do sedimento numa lâmina corar com Lugol e cobrir com lamínula facultativo Examinar no mínimo duas lâminas de cada amostra httpswwwyoutubecomwatchv1fkpa5kEkzk Método de Ritchie centrífugo sedimentação cistos de protozoários Diluir e homogeneizar 10g de fezes em 20mL de água filtrada Filtrar com gaze dobrada em 4 partes num copo plástico descartável e transferir para um tubo de ensaio de 5ML Centrifugar por 2 min a 1500rpm Desprezar o líquido sobrenadante e ressuspender o sedimento com 10mL de água Repetir o procedimento 2 ou 3 vezes até ficar claro o líquido Add 8 mL de formol a 10 homogeneizar descansar por 10 a 20min Add 2 mL de éter agitar vigorosamente e centrifugar a 1500rpm por 2min Desprezar o sobrenadante e examinar no microscópio com lugol MÉTODO DE MIFC OU DE BLAGG MESMO PRINCÍPIO USASE ÉTER SULFÚRICO Método de Faust centrífugoflutuação em sulfato de zinco ovos e cistos leves Diluir 10g de fezes em 20 ml de água Homogeneizar bem Filtrar em gaze dobrada em quatro num copo plástico e transferir para um tubo cônico Centrifugar por um minuto a 2500 rpm em tubo de centrifugação Desprezar o líquido sobrenadante e ressuspender o sedimento em água Repetir as operações 4 e 5 vezes até que o sobrenadante fique claro Desprezar o sobrenadante claro e ressuspender o sedimento com uma solução de sulfato de zinco a 33 Ex DIFERENCIAR E coli de E histolytica Centrifugar novamente por um minuto a 2500 rpm Os cistos e os ovos leves presentes estarão na película superficial a mesma é recolhida com alça de platina colocada numa lâmina junto com uma gota de Lugol e coberta com lamínula O material deve ser examinado imediatamente O sulfato de zinco pode deformar os cistos e os ovos httpswwwyoutubecomwatchv2gIERHUxE Método de Faust e cols Pesquisa de cistos de protozoários Método de Willistécnica de flutuação Colocar 10g de fezes num béquer Homogeneízalas com um pouco de solução saturada de sal NaCl ou de açúcar Com o auxílio da peneira e gaze para filtrar o conteúdo Encher um tubo de centrifuga com o conteúdo diluído até formar um menisco na superfície Colocar na boca do frasco uma lâmina que deverá estar em contato com o líquido Deixar em repouso por 10min Findo esse tempo retirar rapidamente a lâmina deixando a parte molhada voltada para cima Ex Ovos de ancilostomídeos e cistos de protozoários Cobrir com lamínula corar com Lugol e examinar com objetiva 10x httpswwwyoutubecomwatchvyadq0Qo8O6A Método de Rugai Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolvêlo em ter gazes fazendo uma pequena trouxa Colocar o material assim preparado com a abertura voltada para baixo num cálice de sedimentação contendo água aquecida 45ºC em quantidade suficiente para entrar em contato com as fezes Deixar em repouso por uma hora Coletar o sedimento no fundo do cálice com ajuda de uma pipeta Corar as larvas com Lugol e observálas com o maior aumento para identificálas Fezes diarréicas as larvas morrem muito rapidamente ou coletadas em conservador não se prestam para esses métodos METODOS DE CONCENTRAÇÃO DAS FEZES MÉTODO DE KATO KATZ Utilizado principalmente na pesquisa de ovos de S mansoni Ascaris e Trichuris 1 Depositar uma pequena quantidade de fezes sobre uma folha de papel higiênico colocando a tela nylon ou metálica por cima e pressionando com a paleta pá 2 Colocar sobre uma lâmina de vidro a placa de plástico e depositar no centro do orifício as fezes que ultrapassaram as malhas da tela 40 60 mg 3 Comprimir as fezes no orifício da placa até completálo 4 Sobrepor a lamínula de celofane embebida em verde malaquita e inverter a preparação realizando pressão com o polegar sobre a lâmina até obter uma uniformidade do material 5 Deixar em repouso por cerca de 60 minutos a temperatura ambiente 6 Contar todos os ovos encontrados httpswwwyoutubecomwatchvGHWFhBHwpQ 1Coloque a placa quantificadora sobre uma lâmina de microscopia Método de Graham fita adesiva transparente Enterobius vermicularis Encostar o lado adesivo da fita na região perianal e no ânus logo de manhã antes da higienização Repetir a coleta em dias sucessivos caso o resultado seja negativo Distender a fita adesiva sobre uma lâmina de microscopia como se fosse uma lamínula Examinar no microscópio com objetiva de 10x Referências bibliográficas DE CARLI G A Parasitologia clínica seleção de métodos e técnicas de laboratório para o diagnóstico das parasitoses humanas 2ª ed São Paulo Aheneu 2007 NEVES D P Parasitologia Humana 9º e 10º ed São Paulo Atheneu 1998 e 2000 REY L Bases da Parasitologia médica Rio de Janeiro 2º ed Guanabara Koogan 1992