Eletroforese em Gel e Western Blot - Análise da Expressão da Proteína Gfp Recombinante

4361 2322 2027 M 1 2 Eletroforese em gel de agarose a 10 corado com brometo de etídeo M Marcador de massa molecular Lambda HindIII BioBasic Os valores estão expressos como pb 1 pQE 30 Qiagen não digerido com as endonucleases de restrição Bam HI e Hind III 2 pQE 30 digerido com as endonucleases de restrição Bam HI e Hind III 23130 2027 564 M 1 2 3 Eletroforese em gel de agarose 10 corado com brometo de etídeo M Marcador de massa molecular Lambda Hind III BioBasic Os valores estão expressos como pb 13 Produto da PCR amplicon gfp utilizandose os oligonucleotídeos iniciadores gfpF e gfpR 1 G1 2 G2 3 G3 Eletroforese em gel de agarose 08 corado com brometo de etídeo Análise dos clones recombinantes pela técnica de tooth pick C pQE30 sem inserto 112 Colônias de Escherichia coli transformadas com a ligação entre plasmídeo pQE 30 e inserto gfp selecionados para análise C 1 2 3 5 6 7 9 11 12 C 1 2 3 4 5 6 Eletroforese em gel de agarose 08 corado com brometo de etídeo Análise dos clones recombinantes pela técnica de tooth pick C pQE30 sem inserto 16 Colônias de Escherichia coli transformadas com a ligação entre plasmídeo pQE 30 e inserto gfp selecionados para análise M 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 35 25 Expressão da proteína Gfp recombinante em Escherichia coli I Eletroforese em gel de poliacrilamida 15 II Western blot utilizando anticorpo monoclonal antihistidina primeiro M Marcador de massa molecular BenckMarker Ladder Invitrogen 135 Extrato proteico de cultura bacteriana transformada com pQE30 gfp não induzida com IPTG 10 mM 246 Extrato proteico de cultura bacteriana transformada com pQE30 gfp induzida com IPTG 10 mM