Caracterização e Análise de Lipídeos em Bioquímica

Bioquímica Caracterização de lipídeos Objetivos Identificar e compreender a estrutura dos lipídios Compreender a reação de saponificação Compreender os princípios da identificação quantificação de colesterol Compreender os princípios da identificação quantificação de ácidos graxos oxidados Conceitos básicos classes de lipídios Com presença de pelo menos um ácido graxo Conceitos básicos Lipídios de armazenamento Triacilgliceróis Triacilgliceróis ésteres de ácidos graxos de glicerol Possuem 3 ácidos graxos esterificados a um glicerol Conceitos básicos Esterificação de Fisher Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑥í𝑙𝑖𝑐𝑜 Á𝑙𝑐𝑜𝑜𝑙 É𝑠𝑡𝑒𝑟 Á𝑔𝑢𝑎 esterificação hidrólise Conceitos básicos Saponificação Conceitos básicos Transesterificação Biodisel Ester metílico de ácido graxo ácido básico ou enzimático metanol etanol propanol butanol Conceitos básicos Colesterol Lipídios estruturais de membrana maioria dos eucariotos Colesterol importante esteroide nos tecidos animais Anfipático cadeia alquila lateral núcleo esteroidal Delineamento experimental 1 Avaliar a solubilidade de triacilglicerol em diferentes solventes 2 Realizar a saponificação com KOH 3 Separar os ácidos graxos hidrolisados 4 Neutralizar os ácidos graxos 5 Identificar presença do colesterol reação colorimétrica 6 Avaliar autooxidação em amostras de óleo novo e velho Experimento 1 Avaliação e comparação da solubilidade dos lipídeos i Separar 3 tubos de ensaio e colocar três gotas de óleo em cada ii Acrescentar os diferentes solventes em cada tubo e observar o resultado Tubo Reagentes Tubo 1 5 mL de água 3 gotas de óleo Tubo 2 5 mL de acetona 3 gotas de óleo Tubo 3 5 mL de álcool 3 gotas de óleo Experimento 2 Saponificação hidrólise alcalina Adicionar em um tubo de ensaio grande 05 g de gordura vegetal hidrogenada Adicionar 5 mL de solução alcoólica de KOH 10 Levar o tubo ao banhomaria fervente por 3 minutos Acrescentar 10 mL de água e manter o tubo em banhomaria fervente por 2 minutos Observar a formação abundante de espuma ao agitar Experimento 3 Separação dos ácidos graxos Adicionar 10 mL de ácido clorídrico concentrado à solução de sabão e agitar fortemente até que sejam formados ácidos graxos insolúveis que abandonam a fase aquosa e flutuam originando um anel alaranjado na superfície Depois de separados os ácidos graxos mergulhar o tubo em água gelada sem agitar e esperar a solidificação do anel de ácidos graxos Experimento 4 Neutralização dos ácidos graxos Com o auxílio de um bastão decantar a parte líquida do tubo de ensaio da experiência anterior deixando o anel de ácidos graxos solidificado Acrescentar 10 mL de água e manter o tubo em banhomaria fervente por 2 minutos Juntar 05 mL de solução de NaOH 10 e agitar fortemente para obter uma solução clara de sabão Experimento 5 Identificação do colesterol Teste LiebermannBurchard Descrito em 1885 por Carl Theodore Liebermann 1842 1914 químico Quantificação de colesterol Hans Richard Ferdinand Burchard 18641900 médico Reação colorimétrica 620 nm a Adicionar em um tubo de ensaio 2 mL de colesterol 1 b Acrescentar 1 mL de anidrido acético e agitar c Juntar pelas paredes do tubo inclinado 05 mL de ácido sulfúrico concentrado d Agitar lentamente observando a mudança de coloração até o aparecimento de cor verde O reagente se liga ao grupo OH Experimento 5 Identificação do colesterol Teste LiebermannBurchard Experimento 6 Rancidez dos ácidos graxos Teste de Kreis Em um tubo de ensaio coloque 1 mL de amostra de óleo novo e em outro tubo 1 mL de amostra de óleo velho Adicione aos dois tubos 5 mL de ácido clorídrico concentrado e 05 mL de floroglucina Floroglucinol Agite vigorosamente por alguns segundos A intensidade de cor desenvolvida é proporcional à rancidez presença de aldeídos e cetonas derivados do processo de peroxidação