Relatorio de Aula Pratica Contagem Bacterias e Pesquisa de Coliformes em Alimentos

Fonte12 semnegrito S u b t í tu lo e s p e c í f ic o f o n te 1 4 n e g r i to Fonte 12 sem negrito 3cm INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SANTA CATARINA CURSO TÉNICO EM Fonte Arial ou Times 12 maiúscula sem negrito BELTRANO DE TAL FULANO DE TAL 3cm RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO CONTAGEM DE BACTÉRIAS TOTAIS E PESQUISA DE COLIFORMES COLIFORMES FECAIS E ESCHERICHIA COLI EM ALIMENTOS Fonte 14 maiúscula em negrito Cidade Mês 31 MATERIAIS UTILIZADOS Fonte12 maiúsculaemnegrito 2linhas embranco espaçode15do títuloaosubtítulo Fonte12emnegrito R e c u o d e p a rá g ra fo 1 2 5 c m 2 linhas em branco espaço de 15 RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO Fonte 12 maiúscula em negrito 1 IDENTIFICAÇÃO Título subtítulo do relatório Discentes alunos Docentes professores Unidade Curricular disciplina envolvidas na elaboração do relatório Curso Curso Técnico de Nível Médio em Agroindústria Modalidade Integrado Período 09032014 data da realização do experimento Objetivo Constatar número de bactérias em alimento e sanidade do alimento iniciar com verbo no infinitivo 2 INTRODUÇÃO A presença de bactérias em alimentos é algo recorrente A carne crua vendida ao público é portadora de bactérias e fungos pois tratase de um meio nutritivo favorável ao desenvolvimento de alguns microrganismos tais como coliformes coliformes fecais e Escherichia Coli SILVA 2003 Esse último comumente provoca no ser humano infecção urinária podendo causar também várias outras infecções como abscesso no fígado pneumonia meningite artrite colecistite PINHEIRO 2014 O consumo de carne e o número de bactérias prejudiciais à saúde que podem nela estar presentes vem estimulando muitas pesquisas experimentos e trabalhos Nesta prática experimental decidiuse utilizar um bife de carne de vaca comprado em um mercado local o qual foi analisado em dois estados diferentes cru e grelhado análise imediata A utilização desse alimento proveniente de fonte não conhecida proporcionou legitimidade a experiência fazendo com que se verificase na prática o aprendido na teoria Ainda para o experimento levouse em conta dados constantes em Vera 2003 que as bactérias na sua maioria morrem ao serem submetidas a altas temperaturas durante um considerável período de tempo no ar que respiramos existem naturalmente inúmeros esporos e microrganismos em suspensão o agar nutritivo é um meio ideal ao desenvolvimento de colônias a partir de microrganismos bactérias e fungos nele presentes ufc unidades fundadoras de colônias os coliformes são fermentadores rápidos que liberam das suas reações de fermentação CO2 e H2 21 OBJETIVO Fonte 12 maiúscula sem negrito Constatar os níveis de bactérias em um mesmo tipo de alimento submetido a diferentes estados de preparação e conservação 22 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Detectar presença ou ausência de bactérias coliformes Determinar o número de bactérias coliformes se existentes Verificar a presença e quantidade de Escherichia Coli Apontar a condição de sanidade do produtocom o resultado da verificação por bactérias 3 MATERIAIS E MÉTODOS Microbiologia Agar MacConkey meio de cultura seletivo usado para selecionar determinados grupos de bactérias a partir de substâncias que inibem o crescimento de outras bactérias indesejadas seletivo para coliformes Agar Nutritivo meio nutritivo geral contém elementos minerais e metabólitos orgânicos Foram utilizados os seguintes materiais para a prática realizada Autoclav e Balança Balões de Erlenmeyer Bisturi Contador de UFC Estufa Frigideira Frigorífico Homogeneizad or Lamparina Micropipetas volumétricas Placas de petri Placas de aquecimento Tubos de ensaio Varetas 32 PRODUTOS UTILIZADOS Foram utilizados os seguintes produtos na prática realizada Bife de carne bovina 200g Diluente Soro fisiológico Reagente ErlichKovacs 1 l de agar nutritivo 100 ml de Verdebrilhante a concentração normal 100 ml de Verdebrilhante a concentração dupla 100 ml de água de peptona Água de peptona Água destilada Álcool Algodã o A partir das proporções configuradas pelo fabricante diluise o soluto meios em água destilada a ferver 33 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Utilizouse a autoclave para esterilizar o material da experiência o que foi realizado pelas alunas O material que não foi imediatamente utilizado ficou conservado num frigorífico a fim de evitar a sua contaminação Para procederse o experimento preparouse a suspensão pesando cerca de 1 g da carne que foi introduzida num balão de Erlenmeyer Depois foram adicionados 90 ml de diluente soro fisiológico ao balão até a balança marcar um valor próximo de 100 g de forma a obter uma concentração de 110 1 g de alimento 10 ml de diluente e agitouse a suspensão obtida Logo após em cada um de 5 tubos de ensaio foram colocados 9 ml de diluente utilizando a micropipeta Posteriormente transferiuse 1 ml da suspensão para um primeiro tubo o qual foi identificado como 102 o correspondente à sua diluição Depois este foi agitado no homogeneizador durante alguns segundos O mesmo procedimento foi repetido para os outros tubos até completaremse as diluições necessárias Quanto à verificação da presença de coliforme na carne bovina usada com o auxílio da micropipeta foram inoculados num tubo de ensaio 10 ml da suspensão correspondente a 1 g de alimento com 10 ml de meio de Verde Brilhante a concentração dupla sendo a inoculação seguidamente incubada a 37ºC durante 48 horas Quanto à pesquisa de coliformes fecais foram inoculadas algumas gotas entre 05 e 1 ml do meio de Verdebrilhante anteriormente inoculado após obter o resultado positivo com 9ml de meio Verdebrilhante em concentração normal Depois incubouse o tubo de ensaio a 445ºC durante 48 horas No tocante à pesquisa de Escherichia Coli procedeuse a inoculação de algumas gotas entre 05 e 1 ml do mesmo meio de Verdebrilhante positivo obtido através do procedimento 7 correspondente à suspensão 110 com 9ml de água de peptona O tubo de ensaio juntamente com o do procedimento 71 foi incubado à mesma temperatura e durante o mesmo intervalo de tempo 445ºC48horas Após a incubação foram adicionadas 5 a 6 gotas do reagente ErlichmanitaKovacs no tubo de ensaio 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO Foram alcançados os seguintes resultados nas pesquisas com a carne crua e com a carne grelhada Na carne grelhada análise imediata não ocorreu alteração do meio Verde brilhante a concentração dupla o que significa que não estavam presentes em 1 ml da suspensão coliformes e consequentemente também não estavam presentes coliformes fecais nem Escherichia Coli Na carne crua todos os resultados foram positivos Nos tubos de ensaio de Verdebrilhante concentração normal e dupla usados foi possível observar a formação de gás no tubo interior e a turvação do meio devido à presença de culturas Pela tabela abaixo constatase que de fato a carne grelhada a que foi analisada imediatamente contém um número de bactérias muito reduzido em relação ao da carne crua uma vez que ao ser submetida a elevadas temperaturas a maioria das bactérias morre persistindo apenas alguns esporos Contudo se for consumida imediatamente estes não terão tempo de se desenvolver minimizando assim os riscos que os potenciais patogênicos presentes nos alimentos portam CARNE ANALISADA GRELHADA CRUA BACTÉRIA POR GRAMA 2750 147000 PERCENTAGEM 187 10000 Tabela 1 Número de bactérias na carne analisada Os resultados da carne crua foram previsíveis visto que é normal a presença de carga microbiana me carne crua Quanto à sanidade do produto este não foi considerado inapropriado para o consumo por ter sido submetido a alta temperatura por tempo suficiente para eliminar as bactérias presentes procedimento recomendado ao consumo deste tipo de alimento 5 CONCLUSÃO Uma vez que apenas foram encontrados coliformes coliformes fecais e Escherichia Coli na carne crua concluímos que todos os coliformes que sejam submetidos a temperaturas muito elevadas são eliminados e visto que eles não produzem esporos não podem subsistir para mais tarde em condições ideais voltarem a se reproduzir Portanto a partir do que foi verificado no experimento pode se dizer que é mais seguro consumir carne logo após ser preparada pois eventuais esporos nela presentes ou outros microrganismos do ambiente não têm tempo de se desenvolver que a carne deve ser submetida a temperaturas altas durante um intervalo de tempo considerável de modo que todos os microrganismos neles presentes sejam eliminados devese evitar o consumo de carnes mal passadas pois a carne crua possui uma elevada carga microbiana 6 REFERÊNCIAS PINHEIRO Pedro Bactéria Escherichia Coli E Coli MD Saúde São Paulo 14 jun 2011 Disponível em httpwwwmdsaudecom201106bacteria escherichia colihtml Acesso em 17 fev 2014 SILVA Carlos Magalhães Estudo Bacteriológico em Experimentos São Paulo Terramar 2003 VERA Sonia Garcia O Caminho dos Coliformes 2 ed Curitiba Valares 2003 Fonte 12 espaçamento simples alinhamento à esquerda 2cm 2cm Experimento 1 Resultado 1 Orelha cor branca Odor cheiro de cloro soro salgado Tamanho célula grande pequena Nº UFC indeterminado Língua Amarelado Claro Grande pequenas indeterminado 146 Dedo Branca Adocicado cachorro molhado Pequena indeterminado Adorno Branca Claro Pequena Grande Média indeterminada Alimento Branco Amarelado Podre Pequena e grande indeterminada Unha Branca Claro Pequena médio grande indeterminada Experimento 2 alça de platina meio de cultura Ágar Macconkey ágar nutritivo microrganismos pescados do meio de cultura de ágar nutritivo placa de petri álcool p esterilização do ambiente lamparina fós alça de platina cabo de couli colônia maior tempo de geração menor precisa de pouco tempo p desenvolver estufa tampa para baixo 6 meios de cultura Ágar nutritivo Alimento adorno Língua Ágar macconkey Unha Língua Orelha brancoagar nutriente Resultado 2 Após o processo de inoculação Alimento 1oo agar mª cor branca grande nº P UFC indeterminados cheiro de podre molhado massa por baixo e polinhas Adorno agar mª cor branca tris tomontros UFC indeterminado cheiro podre cloro massa por baixo e colônias Língua agar mª contaminações esterna UFC pequenas e indeterminadas cheiro es chorro molhado Umba agar macconkey contaminações est UFC pequenas e indeterminadas cheiro raçaõ 2 média 27 Língua agar macconkey cont externa UFC pequenas e indeterminadas cheiro 8 noção Izolla agar mª contaminação esterna UFC pequenas 7 Microscópio Adornoagar natural m Nanda coloração rosa Adornoagar m coloração predominantemente rosa Alimentoagar nutritivo cor rosaroxo cocos Adornoagar m pouco cor roxa Undaagar m cor rosa Adorno cocós corados em azul AdornococosROSA Alimentococos ROSA Pesquisa p que serve óleo de imersão Experimento 3 coloração de Gram alça de platina lâminas lamparina materiais para coloração corante cristal violeta fixador lugol solvente orgânico etanol acetona corante fucsina basica microscópio óleo de imersão Coloração de Gram baseado na capacidade das paredes celulares bac terianas Grampositivas GP de reterem o corante violeta no citoplasma enquanto as Gramnegativas GN não o fazem retenção depende de espessura densidade porosidade e integridade GP e GN absorvem o corante violeta e o lugol mas o solvente dissolve a porção lipídica das mem branas externas das bactérias GN descarandoa partir do retirado do corante violeta Depois as GN coramse com a fucsina básica Óleo de imersão melhora qualidade da imagem a partir da igualação do índice de refração p lâmina e po óleo Resultado 3 Adorno 1 agar nutritivo cocos azul Gram Adorno 2 agar nutritivo cocos azul GP Alimento agar nutritivo cocos vermelhoRosa Gram 1710 Experimento 4 cor inicial vermelha meio de cultura SS seletivo apenas p salmonella e Shigella pipetadora ponteira Alça de Triguescki espalhar solução na placa Lampana Fibra de Pitu inoculação do caldo nutritivo meio SS no com pedaços de frango que dei sou multiplicar meio na estufa com 37ºC por 24 horas 1411 Resultado 4 1 tem cresceu e tem focos de maior desenvolvimento Clareou bastante a cor inicial do meio 2 não cresceu muito Pouco desenvolvimento Cor ficou em degradé do amarelo transparente ao alaranjado 1411 Experimento 5 Antibiograma 1 ml com a pipetadora na placa grande flamba alça esfória espalha flamba viridins pega pinça flamba pega um disco do antibiótico e põe na placa coloca 3 discos Agar nutriente grande para antibiograma 3 antibióticos Alça de Triguesky pinça pipetadora discos de antibiótico Antibioticoo 1 Ampicilina 10 mcg 2 Eritromicina 15 mcg 3 Clindamicina 2 mcg 5 Tetraciclina 30 mcg 4 Amoxicilina Ác clavulânico 30 mcg 6 Nitrofurantoaina 300 mcg 7 Amicasina 30 mcg 8 Gentamicina 10 mcg 9 Cloranfenicol 30 mcg 1411 Experimento 6 Tubo de ensaio com caldo nutriente b dentro tubo de duhan 1 tubo com bolha negativo 2 tubos com bulho positivo Produtores de gás ou não grupo dos coliformes 24 horas 37C na incubadora shaker 100 rpm 1 placa Adreno 100 mcl 1 placa Solot 100 mcl 3 tubos de ensaio com Solo 100 m microrganismos aerobios e produtores de gás microrganismos presentes em alimentos cárneos meio am meio anaeróbio e colocado na estufa 2111 microrganismos anaeróbios e produtores de gás Antibiograma halo de inoculação antibiotico antibióstico inibe o crescimento microbiano ao redor deve ser feita inoculação de uma colônia no antibiograma fomos induzidos ao erro forma certa inocular caldo de galinha em uma placa de petri de agar nutriente pescar uma colônia da placa com alça de platina e inocular para antibiograma em toda a placa