Resumo Completo Microbiologia Clínica Meios de Cultura Coloração Exames e Antibióticos

Olá gostaria de um resumo bem rico e didático sobre Microbiologia Clínica com os seguintes assuntos para estudar para a prova Meios de cultura Coloração Material de Laboratório Exame de água Antibiótico Bactérias Patogênicas Gostaria também de algumas questões com gabarito para exercitar sobre esses assuntos por gentileza Microbiologia Clínica Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus É muito usado para Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos Gram negativos e leveduras Agar Mueller Hinton Ágar padronizado por Kirby e Bauer e pelo NCCLS que oferece condições de crescimento das principais bactérias É um Meio utilizado para a realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e etest para enterobactérias não fermentadores Staphylococcus Enterococcus sp Agar MacConkey O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios por isso não é tão seletivo para Gram negativos como por exemplo o ágar SS Utilizado para Isolar bacilos Gram negativos enterobactérias e não fermentadores e verificar a fermentação ou não da lactose Agar Salmonella Shigella SS O SS Agar possui componentes sais biliares verde brilhante e citrato de sódio que inibem microrganismos Gram positivos A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo é lactose positivo bactérias que fermentam lactose produzem ácido que na presença do indicador vermelho neutro resulta na formação de colônias rosa ou não Utilizado para selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella em amostras de fezes alimentos e água Agar Sabouraud Dextrose É um meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos É utilizado para Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos particularmente associados a infecções superficiais Caracterização macroscópica do fungo filamentoso colônia gigante Agar Sal Manitol O meio consiste na caseína digerida e tecido animal extrato de carne manitol sais e vermelho de fenol Os estafilococos podem crescer na presença de elevadas concentrações de sal eo S aureus pode fermentar o manitol produzindo colônias de cor amarela Meio seletivo utilizado para o isolamento de estafilococos Coloração de Gram É uma técnica de coloração secular descrita em 1884 pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que consiste na preparação de um esfregaço em lâmina de vidro para microscopia de preferência da porção mais purulentasanguinolenta da amostra No caso de líquidos corporais podese realizar uma citocentrifugação para se concentrar o material obtendo assim uma melhor visualização das estruturas A amostra é então mantida em ar ambiente para sua secagem e fixada por metanol ou por meio de um leve aquecimento Um corante cristal violeta é adicionado por um a dois minutos e em seguida inserido o lugol também por um a dois minutos Dessa reação formase o complexo iodopararrosalina na parede celular das bactérias que se coram de roxo nessa fase tanto as bactérias Grampositivas e Gramnegativas retêm o corante Na próxima etapa após a lavagem da lâmina iniciase a etapa de descoloração acrescentandose uma solução de álcooléter ou de álcoolacetona ao material Nesse momento em virtude das diferenças entre a constituição das paredes celulares as bactérias Grampositivas possuem uma espessa camada de peptideoglicanos e de ácidos teicóicos já nas Gramnegativas essa camada é mais delgada com maior proporção lipídica as Grampositivas resistem à descoloração retendo o corante permanecendo roxas Em contrapartida as finas e lipídicas paredes celulares das bactérias Gramnegativas quando expostas ao álcool fazem com que elas percam o corante tornandose incolores Na fase de contracoloração após uma lavagem da lâmina com água é adicionado safranina corante de cor vermelha o qual é o responsável pela coloração avermelhada das bactérias Gramnegativas Nova lavagem com água é realizada secandose cuidadosamente o material em seguida A lâmina é então colocada no microscópio sendo primeiramente visualizada em objetiva de pequeno aumento para em seguida ser observada em objetiva de imersão em óleo aumento de mil vezes Essa técnica possui algumas limitações dentre elas podemos destacar Fornece um diagnóstico presuntivopreliminar Só é capaz de identificar até o gênero bacteriano não sendo possível na maioria dos casos o diagnóstico a nível de espécie Necessita de um grande númeroconcentração de patógenos na amostra para uma melhor sensibilidade Baixa acurácia em espécimes clínicas que possuem naturalmente alta presença de flora bacteriana normal ex fezes swab orofaríngeo e retal pele Alguns microrganismos não se coram adequadamente pelo Gram ex Treponema pallidum espécies de Legionella Mycoplasma e Mycobactérias Alguns exemplos de bactérias suas características morfotinturiais e respectivas infecções mais relacionadas Cocos Grampositivos Staphylococcus aureus infecções de pele e partes moles síndrome do choque tóxico bacteremia Streptococcus pyogenes infecções de pele e partes moles faringite e suas complicações não supurativas Streptococcus agalactiae meningite bacteremia neonatal Streptococcus pneumoniae pneumonia comunitária meningite Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium bacteremia e infecções nosocomiais do trato urinário Cocos Gramnegativos Neisseria meningitidis meningite Neisseria gonorrhoeae gonorreia Moraxella catarrhalis otite média em crianças sinusite pneumonia Bacilos Grampositivos Listeria monocytogenes meningite bacteremia Nocardia sp pneumonia infecções de partes moles abscesso cerebral Bacillus anthracis infecções de pele e partes moles pneumonia utilizado como um agente de bioterrorismo Corynebacterium diphtheriae difteria Bacilos Gramnegativos Escherichia coli infecção do trato urinário diarreia bacteremia Klebsiella pneumoniae e Klebsiella oxytoca infecção do trato urinário diarreia bacteremia Proteus sp infecção do trato urinário Salmonella sp diarreia febre tifoide Shigella sp diarreia Enterobacter sp pneumonia nosocomial infecção do trato urinário bacteremia Serratia sp pneumonia nosocomial Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannii Campylobacter Helicobacter Legionella sp Bordetella sp Brucella sp Haemophilus sp Materiais do laboratório Placa de petri Tubo de ensaio Destilador de água Estufa de esterilização Estufa de cultura Ponteira descartável Micropipeta Autoclave Microscópio Antibióticos Basicamente estes agentes antimicrobianos podem ser conceituados como compostos produzidos por microrganismos que possuem atividade antimicrobiana bactericida ou bacteriostática Devem ser diferenciados das bacteriocinas que também são produtos do metabolismo secundário de microrganismos As bacteriocinas peptídios variam entre as bactérias e a atividade antimicrobiana destes compostos é ainda pouco conhecida Não são utilizados usualmente no tratamento de doenças infecciosas por serem tóxicas Atualmente existem pomadas apenas para uso tópico Alguns pesquisadores são referências conceituais e históricas Paul Ehrlich considerou a toxicidade seletiva como uma base no uso eficaz de drogas no tratamento de doenças infecciosas Assim a droga ideal seria aquela que destrói o agente infeccioso e que não seja tóxica para o paciente Salvarsan composto 606 de Ehrlich arsênico combinado com compostos orgânicos foi o primeiro quimioterápico elaborado em laboratório e foi utilizado por muito tempo utilizado no tratamento da sífilis e que concedeu ao pesquisador o Prêmio Nobel de medicina em 1908 Somente em 1935 Gehard Domagk trabalhando na Alemanha na Companhia Bayer com corantes na cura de camundongos infectados com estreptococos sem intoxicálos descobriu um corante vermelho chamado de Prontozil Esta descoberta também conferiu o prêmio Nobel em 1939 Mas tarde verificouse que este composto era uma sulfonamida Até 1945 produziramse milhares de derivados da sulfonamida e alguns são utilizados até hoje no tratamento de algumas infecções A descoberta acidental da penicilina porAlexander Fleming em 1929 baseouse na observação de que culturas e de estafilococos eram inibidas por um bolor contaminante Penicillium Mas somente em 1941 obtevese uma purificação bruta do composto por Chain e Florey Em seguida a droga começou a ser aplicada geralmente com sucesso como agente antimicrobiano no tratamento de infecções bacterianas Em 1945 os pesquisadores ganharam o prêmio Nobel Diversas outras descobertas importantes nesta area ocorreram e ainda ocorrem Os agentes antimicrobianos no tratamento de doenças infecciosas podem ser divididos em aqueles obtidos de microrganismos chamados de antibióticos e os obtidos não naturalmente apresentando compostos químicos sintéticos e semisintéticos chamados de quimioterápicos Neste conjunto estes produtos podem ser chamados também de antimicrobianos quimioterápicos Entretanto este termo não pode ser genericamente confundido com desinfetantes outros agentes químicos que também possuem atividade antimicrobiana porém extremamente tóxicos como medicamentos Os antimicrobianos possuem atividade antibacteriana antifúngica antiparasitária antiviral e antiblástica usualmente utilizados no tratamento de neoplasias O resultado é a morte microbiana microbiocida ou causam inibição de crescimento microbiostático Existem antimicrobianos de largo espectro que têm atividade contra diversos microrganismos e os de curto espectro que agem contra poucas espécies e os específicos para determinados grupos bacterianos Os antimicrobianos podem ser agrupados em betalactâmicos aminoglicosídios tetraciclinas rimfam icinas macrolídios cloranfenicol quinolônicos sulfonamidas trimetropim e metronidazol A diversidade da estrutura química destas drogas confere farmacodinâmicas e farmacocinéticas variadas Certos compostos apresentam alta toxicidade e são aplicados às vezes apenas topicamente ou após a sua administração os pacientes devem receber monitoramento hospitalar Além disso deve ser considerada o tipo e a localização da infecção tipo de microrganismo envolvido tipo de infecção a via de inoculação intramuscular venosa oral ou parenteral dose peso idade existência de gravidez ou outro estado do paciente A associação de antimicrobianos é realizada em situações não usuais e esta alternativa deve ser bastante criteriosa Pode ocorrer um sinergismo ou antagonismo na atividade antimicrobiana entre as drogas Em algumas infecções importantes onde há facilmente o diagnóstico clínico administrase o antimicrobiano sem o exame laboratorial pois alguns antibióticos são de largo espectro e o controle da doença deve ser rápido Em situações menos frequentes ainda os antimicrobianos podem ser utilizados na prevenção de infecções como nos procedimentos précirúrgicos ou em indivíduos que se dirigem a locais onde existe uma epidemia conhecida e a vacinação é ineficaz ou não existe tempo suficiente para adquirir proteção pela vacina ex militares grupos de pesquisadores expedicionários ou voluntários que se dirigem emergencialmente a um local com epidemia Considerando a importância da toxidade seletiva apresentamos resumidamente os principais mecanismos de ação dos antimicrobianos contra bactérias e que servem como modelos O mecanismo de ação dos antibióticos possuem os seguintes principais alvos na célula bacteriana a Síntese da parede celular b Interferência na integridade da membrana celular c Interferência na síntese proteica d Atividade antimetabólica e Síntese e integridade de ácidos nucleicos Parede celular Esta estrutura inicia sua síntese intracelularmente na formação de seus precursores seguida de etapas de transporte através da membrana e a sua finalização Assim a penicilina cefalosporina monobactâmicos e carbapenemas são conhecidos como antibióticos betalactâmicos que são estruturalmente semelhantes à transpeptidase enzima que permite a obtenção da rigidez da parede Estes antibióticos por competição substituem a atividade da transpetidase e interferem principalmente na rigidez da parede levando a célula a lise osmótica De maneira geral as bactérias gram positivas são mais sensíveis Especialmente estafilococos e estreptococos Outros mecanismos de ação das penicilinas são descritos como a sua fixação as proteínas fixadoras de penicilinas PBPs e na ativação de autolisinas Devese no entanto lembrar de que se a bactéria se encontrar em ambiente isotônico a célula bacteriana pode sobreviver e se multiplicar em forma de esferoplasto ou protoplasto Ainda neste contexto temos os Mollicutes micoplasmas que também são resistentes à estes antibióticos por não possuírem naturalmente a parede celular A bacitracina cicloserina fosfomicina e a vancomicina interferem na síntese da parede celular interferindo nos precursores da parede celular A bacitracina por exemplo interfere na etapa do transporte dos precursores pela membrana tornandose portanto relativamente tóxica para célula do hospedeiro pois as membranas biológicas são semelhantes A bacitracina pode ser utilizada topicamente em forma de pomada nas infecções cutâneas mas não nas sistêmicas A penicilina em termos de toxicidade seletiva pelo mecanismo de ação seria um antibiótico ideal pois as células humanas não possuem a parede celular Os efeitos colaterais alergias das penicilinas são mediados por mecanismos de resposta imunológica do hospedeiro à droga Membrana celular Esta estrutura pode ser outro alvo microbiano mas a toxicidade seletiva tornase mais crítica pela semelhança das membranas celulares entre eucariotos e procariotos As polimixinas por exemplo são polipeptídios cíclicos e agem como detergentes catiônicos rompendo a estrutura fosfolipídica das membranas Estas drogas possuem melhor eficácia contra bactérias gram negativas especialmente Pseudomonas aeruginosa A Anfotericina B e Nistatina são antifúngicos que apesar de agirem sobre o ergosterol das membranas celulares dos fungos possuem também toxidade ao hospedeiro A anfotericina B por exemplo é administrada sob monitoramento hospitalar Os Cetoconazóis inibem a síntese do ergosterol e são utilizados no tratamento de micoses superficiais e sistêmicas Síntese protéica Diversas drogas interferem a síntese proteica sem interferir nesta maquinaria em células eucarióticas principalmente pela variação das subunidades ribossomais Contudo devese lembrar que os ribossomos de mitocôndrias são semelhantes e por esta razão alguns antibióticos podem apresentar hepatotoxicidade nefrotoxicidade toxicidade vestibular no 8º nervo craniano entre outras interferências A Atividade na subunidade 30S Aminoglicosídios Estreptomicina Neomicina Canamicina Tobramicina Gentamicina Sisomicina Amicacina e Netilmicina são derivados sintéticos da Canamicina e Sisomicina respectivamente Estas drogas bactericidas são pouco absorvidas no intestino e portanto não devem ser administradas via oral Basicamente estes compostos ligamse as proteínas ribossomais 30 S resultando na inibição da iniciação da síntese proteica ou na produção de proteínas defeituosas decorrente da leitura errada dos codons A estreptomicina é utilizada na terapia da tuberculose causada por bactéria multirresistente e a Gentamicina pode ser associada com penicilina G por exemplo contra enterococos Tetraciclinas Antimicrobianos bacteriostáticos atuam basicamente na inibição da incorporação de aminoácidos na cadeia peptídica do RNAt Apesar destes compostos inibirem igualmente a síntese proteica de células procarióticas e eucarióticas as bactérias mostramse mais susceptíveis as tetraciclinas do que células humanas As tetraciclinas interferem na microbiota normal causando diarreia e na coloração dentaria pois são agentes quelantes do cálcio Desta maneira este antibiótico é contraindicado para gestantes B Atividade nas subunidade 50 S Cloranfenicol Possui largo espectro de ação bactérias gram positivas e gram negativas Este antimicrobiano é bacteriostático contra Salmonella thyphi mas é bactericida contra Haemophylus influenza Streptococcus pneumoniae e Neisseria meningitidis Basicamente a droga age inibindo o alongamento da cadeia peptídica Esta droga possui toxicidade sobre a medula óssea e um a cada 30000 pacientes que recebem altas doses podem desenvolver anemia aplástica irreversível Eritromicina e derivados macrolídios Bacteriostático de amplo espectro adere à unidade 50s e bloqueia o deslocamento do RNAt após a formação da ponte peptídica A droga possui toxicidade menor e é utilizada via oral nas infecções gastrointestinais Clindamicina Bacteriostático usualmente utilizado contra anaeróbios Impede a formação da ponte peptídica por um mecanismo desconhecido esta droga não adere a unidade 60S de células eucarióticas Causa supressão da microbiota intestinal favorecendo o desenvolvimento de amostras resistentes Clostridium difficile que por sua vez elimina uma exotoxina e causa pseudomembrana no cólon Antimetabólitos Sulfonamidas Bacteriostáticos análogos ao ácido paraminobenzoícoPABA e por competição interferem na produção de ácido fólico principal doador de carbono na síntese de nucleotídios As células humanas são incapazes de sintetizar seu próprio ácido fólico e portanto possui toxicidade seletiva ideal Utilizada no tratamento de infecções urinárias por Ecoli otites por S pneumoniae ou H influenza em crianças shigeloses nocardiose e cancro mole É também utilizada no tratamento da toxoplasmose e pneumonias Raramente causa febre medicamentosa exantemas e supressão da medula óssea Trimetropim Inibe a síntese do ácido fólico em etapa posterior desta via de síntese inibe a enzima dihidrofolato redutase Usualmente utilizado em associação com sulfonamida pois resulta em efeito sinérgico Com espectro e funções semelhantes das sulfonamidas a combinação é utilizada também na profilaxia de infecções oportunistas em pacientes granuloleupênicos Ácidos nucleicos Quinolonas Bactericidas que inibem a ação das girases bacterianas As girases de células eucarióticas são diferentes das células eucarióticas e portanto apresentam toxicidade seletiva As girases impedem o enrolamento do DNA Assim temos a norfloxacina ciprofloxicina entre outras quinolonas Utilizada em infecções respiratórias intestinais urinárias tecidos esqueléticos e moles O ácido nalidíxico é o menos eficaz e pela sua propriedade de se concentrar na urina é usualmente utilizado no tratamento de infecções urinárias Rifampim Bloqueia a síntese de RNAm inibindo a polimerase das bactérias e não das células humanas apresentando também toxicidade seletiva Inicialmente utilizada no tratamento da tuberculose em associação com outras drogas e na profilaxia de contactantes com indivíduos com meningite meningocócica ou por Haemophilus influenza É usada em combinação com outros antimicrobianos contra bactéria mutantes É uma droga de cor vermelha e portanto um pigmento de cor laranja é eliminado no suor saliva urina de indivíduos medicados com este antimicrobiano Rifabutin um derivado do Rifampim é utilizado na prevenção da tuberculose por Mycobacterium avium intracellulare em pacientes HIV positivos Principais bactérias patogênicas Clostridium botulinum min ou a 100ºC em poucos minutos O congelamento assim como a refrigeração não tem nenhum efeito prático na destruição de células vegetativas esporos ou neurotoxinas botulínicas Clostridium perfringens O C Perfringens é encontrado no solo sendo também comum no conteúdo intestinal do homem e de muitos animais Sabese atualmente que o Clostridium perfringens produz uma toxina no intestino de indivíduos que tenham ingerido alimentos contaminados com alta taxa de contagem Alimentos envolvidos na contaminação por Clostridium perfringens Alimentos à base de carne bovina e de carne de frango principalmente com molhos e mantidos após o cozimento em temperatura ambiente de até 50ºC têm sido os principais causadores de intoxicação alimentar por C Perfringens A maioria dos surtos relatados é associada à alimentação em estabelecimentos institucionais restaurantes hospitais escolas O Clostridium perfringens é responsável por dois tipos diferentes de toxinfecção alimentar Intoxicação alimentar do tipo A que causa dores abdominais agudas diarreia com náuseas e febre O período de incubação é de 8 a 12 h após a ingestão A duração dos sintomas é de 12 a 24 h É uma toxinfecção geralmente branda e é rara a morte de indivíduos infectados Enterocolite necrótica causada por C Perfringens do tipo C É rara sendo frequentemente fatal Os sintomas são dores abdominais agudas muito intensas diarreia sanguinolenta vômitos e inflamação necrótica do intestino delgado Está associada ao consumo de carne de porco mal cozida Campylobacter Campylobacter jejuni é responsável por cerca de 1 a 7 dos casos de diarreia em humanos A transmissão desses microrganismos ao homem ocorre pela via fecaloral pela água por alimentos contaminados e pelo contato direto com material fecal de animais ou pessoas infectadas Alimentos envolvidos leite nãopasteurizado e derivados carnes bovinas suínas de aves e seus derivados Período de incubação da doença varia de dois a cinco dias podendo se estender até 10 dias Sintomas típicos febre mal estar geral dores de cabeça além de dores musculares generalizadas e cólicas abdominais As náuseas são comuns mas os vômitos raros A diarreia pode aparecer rapidamente ou de forma gradual e permanecer por três a cinco dias Medidas de controle são rapidamente destruídas pelo calor não sobrevivendo aos processos de tratamento térmico utilizados em alimentos Não sobrevivem ao processo de pasteurização nem ao aquecimento a 60ºC por 10 min São inativos em alimentos conservados em geladeira 4ºC Um meio de cultura é uma solução nutriente utilizada para promover o crescimento de microrganismos Sobre meios de cultura assinale a alternativa INCORRETA AA composição química exata de um meio definido de forma qualitativa e quantitativa é conhecida BUm meio complexo não tem a sua composição química exata conhecida CUm meio seletivo contém compostos que inibem seletivamente o crescimento de alguns microrganismos mas não o de outros DOs meios de cultura não precisam ser esterilizados antes do uso E Os meios de cultura destinamse ao cultivo em laboratório de microrganismos como bactérias e fungos Dentre as bactérias patogênicas listadas abaixo a que não é encontrada em cereais e grãos é Alternativas A a Salmonella B o Bacillus cereus C o Aspergillus flavus D o Clostridium perfringens Gabarito C