Iscas Biológicas para Controle de Formigas Cortadeiras Hymenoptera Formicidae

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RECONCAVO DA BAHIA CENTRO DE CIENCIAS AGRARIAS AMBIENTAIS E BIOLOGICAS ISCAS BIOLOGICAS PARA CONTROLE DE FORMIGAS CORTADEIRAS HYMENOPTERA FORMICIDAE Cruz das Almas Fevereiro de 2016 ADLA MERCIA CAROBENSE DA PALMA ISCAS BIOLOGICAS PARA CONTROLE DE FORMIGAS CORTADEIRAS HYMENOPTERA FORMICIDAE Trabalho de Conclusao de Curso apresentado ao Colegiado do Curso de Engenharia Florestal da Universidade Federal do Recéncavo da Bahia UFRB pela estudante Adla Mércia Carobense da Palma como requisito parcial para obtengao do grau de Bacharel em Engenharia Florestal sob a orientagéo da Prof Rozimar de Campos Pereira Cruz das Almas Fevereiro de 2016 ADLA MERCIA CAROBENSE DA PALMA ISCAS BIOLOGICAS PARA CONTROLE DE FORMIGAS CORTADEIRAS HYMENOPTERA FORMICIDAE Trabalho de Conclusio de Curso apresentado ao Colegiado do Curso de Engenharia Florestal da Universidade Federal do Recéntavo da Bahia UFRB pela estudante Adla Mércia Carobense da Palma como requisite parcial para obtengiio do grau de Bacharel em Engenharia Florestal sob a orientagao da Prot Rozimar de Campos Pereira APROVADO 4 re Z NV MWY ADM ih 5 eee ae Dr us Vinicius Masson Prdf DrMarlon Paluch Copener Florestal Ltda UFRB Dr Rozimar de Campos Pereira Ortentadora LFRB A Deus por me permitir chegar até aqui A minha familia pelo amor e por estar sempre ao meu lado AGRADECIMENTOS A minha orientadora Prof Dr Rozimar de Campos Pereira por ter me conduzido com muita paciéncia e sabedoria necessaria para elaboracao deste trabalho Aos meus amigos agradego a cada um que se dispds a me ajudar e tranquilizar com apoio no diaadia Bruna Neybergh Crislane Neves Daniel Lima José Linhares Karol Damasceno Renan Garrido Renata Passos e Thais Soares Aos meus pais Anténio e Alaide Palma pelo amor confianga paciéncia e incentivos tornando possivel a concretizacao deste sonho As minhas irmas Amanda e Andressa Palma por serem as melhores amigas e companheiras Aos meus amados sobrinhos Benicio e Isabela pelo carinho e alegria que me proporcionam As minhas tias que nao viam a hora deu me formar A todos os professores colegas e técnicos pelo conhecimento partilhado A Universidade Federal do Recéncavo da Bahia pela oportunidade de enriquecer a minha vida profissional e pessoal através do Curso de Engenharia Florestal RESUMO As formigas cortadeiras causam grandes prejuizos as culturas florestais e agricolas por ocasionar elevados danos nos plantios O método quimico na atualidade a melhor alternativa no controle as formigas sendo a forma mais usual as iscas granuladas que contém sulfluramida Pesquisas que visam o uso de iscas bioldgicas formuladas com fungos entomopatogénicos poderiam vir a substituir este método O objetivo deste trabalho foi formular e testar iscas bioldgicas a base de fungo entomopatogénico A metodologia foi desenvolvida no Campus da UFRB na cidade de Cruz das Almas com a obtencao de isolados crescimento vegetativo e produgéo de conidios em meio e cultura BDA isolamento dos conidios no corpo dos insetos preparagao das suspencdes concentradas a 10 x 10 e 10 x 10 conidios mL para cada fungo Para o teste de patogenicidade foram coletadas operarias maiores de formigueiros de Atta laevigata satacabecadevidro Na confeccao das iscas foram coletados materiais vegetais como folhas de angicovermelho acalifa rosa e também residuo de laranja e farinha de trigo Depois de prontas foi realizada a avaliacdo de atratividade e carregamento das iscas pelas operarias com a contagem do tempo gasto Os isolados Aspergillus flavus e Trichoderma harzianum foram patogénicos a operarias de A laevigata em laboratorio Todas as iscas formicidas testadas apresentam igual atratividade a A laevigata com tempo médio de carregamento de 067 minutos apresentando o angicovermelho menor tempo para transporte O delineado foi em blocos casualizados com os dados submetidos a analise de variancia com teste Tukey a 5 de probabilidade Palavraschave Fungos entomopatogénicos Controle bioldgico Atrativos ABSTRACT Leafcutter ants cause great loss to forest and agricultural crops by causing significant damage in plantations Nowadays the chemical method is the best alternative to control these ants The most common form of this method is the granulated baits that contain sulfuramide Research that aim at the use of biological baits formulated with entomopathogenic fungi could come to replace this method The objective of this study was to develop and test biological baits using entomopathogenic fungi The methodology was developed on the UFRB campus in the city of Cruz das Almas with isolated fungi vegetative growth and conidia production in culture medium PDA isolation of conidia in the body of insects preparation of suspensions concentrated to 10 x 10 and 10 x 10 conidia mL for each fungus For the pathogenicity test large workers were collected from Atta laevigata colonies In the manufacturing of baits plant materials such as angico vermelho leaves Anadenanthera macrocarpa Benth Brenan acalypha wilkesiana and roses were collected as well as orange and flour wastes Once ready an evaluation of attractiveness and carrying of the baits by the workers was performed recording the time they spent The isolated Aspergillus flavus and Trichoderma harzianum were pathogenic to the A aevigata in laboratory All insecticide baits tested present equal attractiveness to the A laevigata The average carrying time was 067 minutes and the angicovermelho presented the lowest transportation time The design was in randomized blocks and the data was submitted to analysis of variance by the Tukeys test at 5 probability Keywords Entomopathogenic fungi Biological control Attractive SUMARIO i RESUMO 6 ii ABSTRACT 7 1 INTRODUCAO 9 2 REVISAO BIBLIOGRAFICA 12 3 OBJETIVOS 20 4 MATERIAL E METODOS 21 5 RESULTADOS E DISCUSSAO 27 6 CONCLUSAO 36 7 REFERENCIAS 37 1 INTRODUCAO As formigas cortadeiras representam as mais importantes pragas do setor florestal brasileiro elevando os custos de implantacaéo e manutencgao de florestas plantadas MARICONI 1970 DELLA LUCIA 1993 HERNANDEZ JAFFE 1995 O controle desses insetos pode representam altos custos de producao e do tempo gasto no controle de outras pragas VILELA 1986 e 30 dos gastos com a floresta até o terceiro ciclo ALIPIO 1989 o que corresponde a 741 do preco da madeira em pé REZENDE et al 1983 Por ser considerada uma praga em potencial e causar sérios desfolhamento tem se buscado modelo de estudo no desenvolvimento de novos formicidas com a finalidade de serem usados para permitir seu controle reduzindo assim as perdas causadas por sua atividade forrageira NAGAMOTO et al 2004 2007 Estes formicidas tém sido desenvolvidos para serem empregados na forma de isca granulada pois é a principal técnica de controle que tem demonstrado eficiéncia na reducao de danos causados por estas formigas FORTI et al 2007 Entretanto segundo Forti et al 1998 seu desenvolvimento em escala industrial com adicao de ingredientes ativos conhecidos pode ser considerado relativamente recente pois somente a partir de 1960 que foram testadas com resultados satisfatérios Desde entao diversos estudos foram realizados nao somente com a finalidade de tornar esta técnica cada vez mais eficiente como também reduzir sua agresséo aos agroecossistemas BOARETTO FORTI 1997 A maior parte destes estudos se depara com a dificuldade de encontrar um bom formicida pois além de eficiente contra as formigas deve conter caracteristicas fisico quimicas que reduzam seu efeito toxico ao meio ambiente como por exemplo 0 tempo necessario para que ocorra sua degradaao apos a aplicagao no campo BOARETTO FORTI 1997 FORTI et al 1998 Um exemplo de ingrediente ativo cujo uso como formicida foi proibido sao os clorados dodecacloro aldrin e heptacloro NAKANO 1994 devido ao seu poder residual muito elevado persistindo no ambiente por muitos anos podendo contaminar o homem e animais sendo substituido pela sulfluramida LARANJEIRO ZANUNCIO 1995 As empresas de reflorestamento tem empregado o controle quimico de formigas cortadeiras de forma sistematica através de iscas termonebulizacgéo e fumigantes sendo 0 aspecto econdmico das operaées de grande importancia em virtude dos altos custos envolvidos Os produtos comerciais disponiveis até alguns anos atras eram de modo geral formulados 4 base de inseticidas clorados mas cuja fabricagéo foi suspensa pela legislagaéo brasileira O dodecacloro ingrediente ativo mais usado até sua proibigao foi substituido pela sulfluramida mas permaneceram os danos ecoldgicos Além do alto custo ocasionado pelo uso de iscas a base de sulfluramida os aspectos ambientais tém levado as empresas a investir na melhoria do rendimento operacional das técnicas de controle quimico e na experimentacao de novas tecnologias objetivando minimizar os impactos ao meio ambiente e atendendo as demandas de certificagao BOARETTO e FORTI 1997 No ano de 2009 a sulfluramida foi enquadradas como poluente organico e todos os produtos a base dessa substancia registrados no Brasil foram proibidos em empresas que desejam manter ou obter o selo verde FSC Forest Stewardship Council ou Conselho de Manejo Florestal O FSC 0 selo de maior reconhecimento mundial para industrias florestais e obtélo significa manterse no mercado internacional ARAUJO 2011 Por consequéncia tornase urgente a procura por novos ingredientes ativos para iscas formicidas de eficacia similar ou superior a sulfluramida existindo a necessidade de estimular pesquisas que visam 0 uso de iscas bioldgicas para o controle de formigas Neste contexto novas tecnologias utilizando iscas formuladas com fungos entomopatogénicos poderiam vir a substituir o método quimico LOUREIRO MONTEIRO 2005 AS perspectivas atuais de controle biolégico das formigas cortadeiras encontram se relacionadas principalmente a investigagao de microrganismos agentes de controle bioldgico sendo os fungos os mais usados devido ao modo como atacam o hospedeiro por contato ou por ingestao pela sua grande quantidade na natureza e variabilidade genética OTTATIDELIMA 2007 Com técnicas adequadas de bioensaios é possivel isolar fungos altamente virulentos com caracteristicas adequadas para serem utilizados como inseticidas visando o controle de inumeras pragas de culturas principalmente as formigas cortadeiras ALVES 1998 A formiga Atta laevigata F Smith 1858 cujos nomes populares mais frequentes sao sativacabecadevidro e sativadevidro apresenta vasta distribuigao geografica quase todo o Brasil e nociva Segundo Goncalves 1960 realiza corte de gramineas e dicotiledéneas porém prefere estas Ultimas A literatura menciona seus danos em eucaliptos pinheiros milho mandioca cana de aucar coqueiros novos algodoeiro menstrago guanxuma branca capimgordura gramabatatais e rabodevaca LUEDERWALDT 1926 GONCALVES 1960 Poucos trabalhos foram realizados sobre esta espécie com relaao ao seu controle bioldgico Por isso pesquisas que visem a descoberta ou que ao menos possam servir de subsidios cientificos para o desenvolvimento de novos ingredientes ativos para serem empregados em iscas formicidas sao de extrema importancia pois permitem o uso de produtos fitossanitarios seguros e eficientes tornandose uma opaéo de controle ambientalmente e economicamente viavel Nesse contexto uma alternativa para o controle das formigas satvas é 0 controle biol6gico com o uso de fungos entomopatogénicos O controle bioldgico é especifico permanente e econdmico ALVES 1998 pois em geral os gastos com a utilizacao de produtos biolégicos s4o0 menores em comparaéo com outros produtos Entretanto ha poucas informagoes sobre o efeito desses fungos no controle de formigas cortadeiras ou formigas lavapés PEREIRA et al 1993 2 REVISAO BIBLIOGRAFICA 21 As formigas cortadeiras As formigas cortadeiras que abrangem os géneros Atta conhecidas como salivas e Acromyrmex quenquéns sao insetos da ordem Hymenoptera subfamilia Myrmicinae familia Formicidae tribo Attini SAo de habito social uma vez que se organizam em grupos apresentando diferentes castas e divisao de atividades bem definida Estas desenvolveram o habito de cultivar um fungo simbionte do género Leucoagaricus do qual se alimentam HOLLDOBLER WILSON 1990 Elas ocorrem em muitos paises do novo mundo com excecao do Chile e das ilhas de Cuba e Trinidad e Tobago MICHELS et al 2001 Todas as Attini cultivam um fungo que a principal fonte alimentar das larvas e que também constitui parte da alimentacao dos adultos MUELLER 2002 SILVA et al 2003 Entretanto no Brasil as formigas dos géneros Atta e Acromyrmex tém maior importancia agricola Ambos os géneros tém sido descritos como os herbivoros dominantes da Regiao Neotropical consumindo muito mais vegetacao que qualquer outro grupo de animais de diversidade taxonémica comparavel com a incluséo também de mamiferos hemipteros e lepiddpteros HOLLDOBLER WILSON 1990 Encontramse distribuidos por todo o territério nacional e com intensa atividade durante o ano atacando varias culturas agricolas pastagens e em particular os reflorestamentos HERNANDEZ JAFFE 1995 desde as plantas em viveiros até o campo definitivo ZANETTI et al 2003 A sobrevivéncia da formiga cortadeira Atta sexdens rubropilosa Forel 1908 Formicidae Myrmicinae Attini esta associada ao sucesso no cultivo do fungo simbionte Leucoagaricus gongylophorus Mller Singer Basidiomycota Agaricales o qual lhe serve como principal suplemento alimentar durante milhdes de anos de coevolucao sendo necessario o corte de partes de plantas para ser incorporado como substrato no seu jardim MUELLER 2002 Porém além da estreita relagéo desta espécie com seu fungo simbionte também pode ocorrer uma associacao negativa nao simbionte com outros fungos como por exemplo Escovopsis Ascomycota que um parasita especializado do fungo L gongylophorus com origem conhecida nos jardins de Attini podendo ser horizontalmente transmitido entre as col6nias CURRIE et al 1999 ou por espécies de invertebrados que vivem em associacao com o cultivo do fungo de formigas e que ocasionalmente se movem entre as coldnias transportandoo CURRIE 2001 A comunidade microbiana dentro das col6nias é considerada bastante extensa pois vem sendo reportada por Rodrigues et al 2008 e Mendes et al 2012 os quais relatam a existéncia de associagdes com diferentes espécies de fungos Entretanto estudos relata o comportamento da comunidade microbiana apos o uso de ingredientes ativos em iscas formicidas RODRIGUES 2004 CARLOS et al 2011 principalmente Escovopsis spp Syncephalastrum racemosum Cohn Schréter Zygomycota Trichoderma harzianum Rifai Ascomycota e Fusarium oxysporum Schlechtendal Ascomycota fungos que prevaleceram apds serem tratados com iscas toxicas sendo o rapido crescimento de fungos filamentosos devido provavelmente ao estresse causado na associagao entre formiga e fungo simbionte RODRIGUES et al 2005 As iscas contendo ingrediente ativo com acao rapida dependendo da idade da colonia podem nao matala mas afetala drasticamente com a morte de operarias Com essas infeccdes persistentes o fungo parasita ocasiona um impacto significativo na sanidade e sobrevivéncia dos ninhos diminuindo a taxa de crescimento esta traduzida na reducao da biomassa tanto de formigas como do fungo simbionte CURRIE 2001 Contudo 0 uso de iscas que promovam sinergismo com fungos parasitas pode provocar um impacto inicial muito grande na col6nia pois além da grande mortalidade de operarias e desorganizacaéo da divisao de trabalho pode ainda favorecer o estabelecimento do fungo parasita dentro do ninho potencializando o controle destas As formigas cortadeiras desempenham diferentes fungdes de acordo com suas castas que sao divisdes morfofisiol6gicas dos individuos de uma colénia de acordo com sua fungao na sociedade As castas sao divididas em temporarias e permanentes Temporarias alados sexuados sao as fémeas tanajuras ou icas e machos bitus Permanentes apteros sexuados as rainhas sao férteis poem os ovos e mantém a colénia organizada As operarias sao estéreis divididas em a Jardineiras cultivam o fungo b Cortadeiras cuidam da prole cortam e transportam o alimento e constroem o ninho c Soldados defendem a colénia e auxiliam as cortadeiras ZANETTI et al 2002 32 Importancia econémica Os géneros Atta e Acromyrmex sao de grande importancia econdmica devido ao desfolhamento de plantas na maioria das vezes atacam monoculturas como substrato para o fungo mutualista o qual cultivado nos interior de cameras subterraneas HOLLDOBLER WILSON 1990 As formigascortadeiras utilizam diversas plantas para cultivar o fungo do qual se alimentam Elas podem cortar flores e folhas ou utilizar porgdes j4 desprendidas Sao conhecidas pela complexidade de suas preferéncias dependentes em parte das caracteristicas fisicas dos vegetais REIS FILHO et al 2007 Parametros quimicos e fisicos influenciam na aceitagao desses materiais pelas formigas FOWLER STILES 1980 De modo geral as formigas cortadeiras tém preferéncia pelas partes tenras das plantas REIS FILHO et al 2007 Segundo Amante 1967 dez sauveiros adultos ha cortam aproximadamente 21 Kg de folhas dia reduzindo em mais de 50 a capacidade de pastagem além de proporcionar maior desenvolvimento de plantas daninhas Os prejuizos causados pela atividade de A sexdens rubropilosa Forel 1908 Hymenoptera Formicidae numa densidade de 4 colénias ha1 foram calculados em 14 para plantagdes de Eucalyptus spp e 145 para a producao de Pinus spp AMANTE 1972 A sexdens rubropilosa popularmente conhecida como sauvalimao e encontrase distribuida pelos Estados de Sao Paulo Minas Gerais Espirito Santo Rio de Janeiro Mato Grosso Goids e Parana DELLA LUCIA et al 1993 Segundo Zanetti et al 2003 as formigas cortadeiras sao consideradas as principais pragas de reflorestamentos no Brasil 33 Métodos de controle Devido aos grandes prejuizos que as formigas cortadeiras podem causar em plantacoes florestais medidas de controle devem ser adotadas como forma de minimizar seus danos e perdas de produtividade Os principais métodos de controle de formigas cortadeiras estudados sao quimico cultural fisico bioldgico mecanico e resisténcia de plantas ARAUJO et al 2003 Em razao de sua importancia econémica a escolha na utilizagao do método de controle se torna essencial para manter a produtividade dos cultivos Existem diversas formas de controle porém todas sem grande sucesso DELLA LUCIA 1993 Na década de 50 com o desenvolvimento de inseticidas sintéticos os métodos quimicos tém sido efetivamente utilizados no controle destes insetos seja pelos pequenos produtores ou grandes empresas OLIVEIRA et al 2011 O controle cultural consiste na aracdéo e gradagem do solo para formigueiros com até quatro meses de idade pois nesta fase a col6nia tem uma unica camara que se localiza a aproximadamente 20 centimetros de profundidade do solo havendo grande probabilidade das laminas do equipamento atingir e matar a rainha DELLA LUCIA 1993 OLIVEIRA et al 2011 O método de controle cultural é com uso de culturas armadilhas ao redor da cultura principal Essas plantas podem ser atrativas ou provocarem efeitos toxicos ou repelentes para as formigas cortadeiras afastandoas da cultura principal por um tempo DELLA LUCIA 1993 BOARETTO FORTI 1997 O controle mecanico assemelhasse ao cultural consistindo na escavacao dos formigueiros até que a rainha seja localizada e morta E um método para pequenas areas e ninhos iniciais DELLA LUCIA 1993 O meétodo fisico consiste no uso de barreiras para proteger a copa das arvores é um método antigo e muito utilizado para se evitar o ataque das formigas no qual sao usados cones plasticos invertidos e tiras plasticas cobertas com graxa ou vaselina colocadas nos troncos das arvores impedindo que as formigas subam para desfolhar Este 6 um método eficiente que necessita de vistorias e reparos constantes para que a protecao das arvores seja prolongada JUSTI JUNIOR et al 1996 331 Controle Quimico de formigascortadeiras Considerados insetos eficientes no corte e transporte de folhas as formigas cortadeiras possuem varias caracteristicas bioldgicas e comportamentais que lhes conferem tal denominagao Contudo tais caracteristicas constituem uma barreira para a utilizagao de novas moléculas e técnicas de controle dessas pragas MARINHO et al 2006 Entretanto o controle quimico dessas formigas tem sido efetivamente utilizado desde a década de 50 do século passado quando os inseticidas foram sintetizados variando na formulagao e modo de aplicagao sendo o unico com tecnologia disponivel para utilizacao pratica no controle de formigascortadeiras principalmente com o uso de iscas toxicas BOARETTO FORTI 1997 Outros métodos de controle vém sendo testados para formigascortadeiras biol6gico por exemplo no entanto o controle quimico o unico com tecnologia disponivel para uso em grande escala destacandose a termonebulizaao e as iscas toxicas como as técnicas mais eficientes MOREIRA et al 2004 O controle quimico 0 unico que detém tecnologia disponivel para ser utilizado em escala comercial no controle de formigas cortadeiras apesar de todas restricdes no seu uso BUENO 2013 Apresenta varias formulag6des entre elas os pds que sao formulados a base de deltametrina clorpirifos malation ou fention e aplicados com equipamento manual denominado polvilhadeira A morte das formigas acontece pelo contato direto com o produto OLIVEIRA et al 2011 A termonebulizacgao consiste na producéo de uma fumaga toxica a partir da queima de 6leo diesel ou querosene no qual é liberada junto ao formicida A aplicacao feita diretamente nos olheiros através de equipamentos denominados termonebulizadores Esse método é considerado eficiente para o controle de grandes ninhos em areas extensas sendo atualmente uma das formas mais empregadas no controle de formigas cortadeiras BOARETTO FORTI 1997 OLIVEIRA et al 2011 A isca granulada consiste na mistura de um ingrediente ativo dissolvido em dleo de soja e incorporado a um substrato atrativo geralmente polpa citrica desidratada prensados na forma de pellets E um método eficiente embora apresente limitagdes de uso em dias chuvosos e em areas muito extensas além da possibilidade de intoxicagao de outros animais BOARETTO FORTI 1997 OLIVEIRA et al 2011 Dentre as formas existentes de controle das formigas cortadeiras o destaque é para o controle quimico principalmente pela formulacao iscas granuladas No Brasil os ingredientes ativos registrados para uso em iscas sao o fipronil o clorpirifés e a sulfluramida BOARETTO FORTI 1997 A sulfluramida é derivada de um composto quimico pertencente a familia do PFOS um poluente organico persistente biocumulativo e carcinogénico OECD 2002 COMISSAO de Revisdo dos POPs 2006 Em maio de 2009 o Brasil e outros 182 paises participaram da 4 reuniao da Convengao de Estocolmo na qual tratavam sobre o tema Poluentes Organicos Persistentes POPs A convenao deliberou a incorporacao do acido perfluooctano sulf6nico PFOS que incluem compostos derivados como a sulfluramida e do perfluorooctano sulfonil fluoreto PFOSF na lista dos POPs CONFERENCIA das Partes 2009 Porém por nao existir um substituto para a sulfluramida a Convencao decidiu aceitar a continuidade de seu uso na produgao exclusiva de iscas formicidas alertando para o a diminuicao desse poluente CONFERENCIA das Partes 2009 Além dessa limitagéo empresas que desejam manter ou obter o selo FSC Forest Stewardship Council devem adaptarse O FSC é hoje o selo mais reconhecido mundialmente com presenca em mais de 75 paises Seu objetivo difundir o uso racional da floresta garantindo sua existéncia no longo prazo Para atingir este objetivo o FSC criou um conjunto de regras reconhecidas internacionalmente chamadas Principios e Critérios que conciliam as salvaguardas ecoldgicas com os beneficios sociais e a viabilidade econdmica WWF 2016 Uma das estratégias para se alcancar este selo e diminuir 0 uso desses quimicos poluentes esta no controle bioldgico com uso de fungos entomopatogénicos Este método certamente uma area promissora de pesquisa mas ainda sao necessarios conhecimentos bioldgicos para que estratégias de controle para formigas cortadeiras possam ser de fato aplicadas Varios autores ja testaram a acdo de entomopatogénicos sobre as formigas BUSARELLO 2008 CASTILHO et al 2010 JACCOUD et al 1999 LOUREIRO MONTEIRO 2005 LOPEZ ORDUZ 2003 QUIROZ 1996 SANTOS et al 2007 332 Controle biologico de formigascortadeiras O controle biol6gico consiste no emprego de um organismo predador parasita ou patdgeno que ataca outro que esteja causando danos econémicos as culturas E uma forma que visa diminuir a populacdo praga No entanto a introducdo de inimigos naturais no ambiente ainda nao pode ser visualizada como estratégia de controle para as formigas cortadeiras devido aos poucos estudos nesta area BOARETTO FORTI 1997 DELLA LUCIA 1993 Por outro lado pesquisas relacionadas as condicdes ambientais como luz e temperatura ja foram exploradas por alguns autores para explicar respostas comportamentais e formas de controle alternativo PARRA et al 1974 ROCES KLEINEIDAM 2000 bem como o uso de plantas com propriedades inseticidas podendo provocar efeitos diretos sobre as operarias de formigascortadeiras ou indiretos sobre 0 crescimento de seu fungo simbionte Outro campo bem explorado é 0 uso de agentes entomopatogénicos como Beauveria bassiana BalsCriv Vuill Ascomycota Hypocreales e Metarhizium anisopliae Metschn Sorokin Ascomycota Hypocreales para o controle de formigas JACCOUD et al 1999 LOUREIRO MONTEIRO 2005 ou combinados com inseticidas SANTOS et al 2007 Porém apesar dos esforgos envolvendo o conhecimento de areas relacionadas a outros métodos 0 controle quimico de formigas cortadeiras ainda se constitui no método mais amplamente utilizado por ser considerado o mais eficiente dentre os métodos de controle disponiveis OLIVEIRA et al 2011 No Brasil a maioria dos estudos tem sido realizada com os fungos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae contudo os resultados ainda nao sao conclusivos BOARETTO FORTI 1997 O fato dos entomopatdgenos serem muito estudados devese as suas caracteristicas pois atuam por contato e ingestéo existem em grande quantidade na natureza sendo o solo o seu maior reservatorio e devido a sua grande variabilidade genética tornandose dificil do inseto se tornar resistente ALMEIDA BATISTA FILHO 2006 O ciclo das relacdes fungohospedeiro depende das condides ambientais como temperatura luz umidade radiaao solar e condigées nutricionais e suscetibilidade do hospedeiro e apresenta as seguintes fases adesdo germinagao formagao de apressorios formagao do grampo de penetraao penetracao colonizacao e reprodugao ALMEIDA BATISTA FILHO 2006 Nas fase de adeséo os mecanismos envolvidos ainda nao sao totalmente conhecidos Sabese que existem forcas eletrostaticas envolvidas além de relagdes de umidade e temperatura A germinagao ocorre quando o fungo encontra condigées favoraveis de umidade acima de 90 temperatura de 23 a 30C pH 55 a 70 oxigénio e nutrigao o fungo germina produzindo o tubo germinativo A formagao de apressorios acontece numa dilatagao na extremidade do tubo germinativo Onde ocorre a migracdo de contetido citoplasmatico tornando esta area num ponto de intensa atividade metabodlica A formacaéo do grampo de penetragcdo pode ocorrer uma diferenciagao da hifa no apressorio tornandoa mais saliente transformandoa numa espécie de grampo para perfuracgaéo da cuticula do inseto Na penetracao estado envolvidos os processos fisico e quimico sendo que neste ocorre a liberagao de enzimas como quitinases lipases e proteases que facilitam a penetragéo mecanica A colonizagao ocorre quando a hifa penetra e inicia 0 crescimento e colonizacao do corpo do inseto a partir dos corpos gordurosos passando para o tubo digestivo causando paralisacao da alimentagao e interrupao alimentar atinge 0 sistema nervoso causando a paralisacao do inseto os musculos tornando o inseto rigido e atinge a traquéia por onde sai 0 corpo do inseto para se reproduzir O fungo pode se reproduzir por processos sexual ou assexual sendo que a maioria dos trabalhos realizada para o controle de pragas é com a fase assexuada ALMEIDA BATISTA FILHO 2006 Para uma melhor dinamizacao no uso de fungos criouse formulagdes para que pudessem ser aplicadas de maneira mais eficiente Alves 1998 descreve formulagdes de produtos bioldgicos que sao de grande utilidade na obtencao de granulos de micélios de fungos imobilizados como sua adiao em iscas granuladas que é um método econdémico e pratico Nesse sentido uma consideraao importante é com relaao a aceitagao das iscas que deve apresentar caracteristicas como atratividade caracteristicas fisicas como massa e diametro compativeis para o bom carregamento além da influencia de varios fatores bidticos e abidticos que interferem diretamente na sobrevivéncia e propagacao dos entomopatogenos SILVA 2007 3 OBJETIVOS Geral O objetivo deste trabalho formular e testar uma isca bioldgica a base de fungos entomopatogénicos confeccionadas com diferentes substratos bem como testar sua atratividade em campo Especificos 1 Avaliar a patogenicidade de quatro isolados de fungos entomopatogénicos em laboratério sobre formigas cortadeiras de Atta laevigata F Smith 1858 Hymenoptera Formicidae 2 Testar atratividade das iscas confeccionadas com diferentes substratos no campo 4 MATERIAL E METODOS 42 Area experimental O presente trabalho foi desenvolvido no Laboratério de Entomologia e area experimental do Campus da Universidade Federal do Recéncavo da Bahia localizado na cidade de Cruz das Almas na regiéo do Recéncavo Baiano no planalto pré litoraneo a uma latitude de 124019 Sul longitude de 390622 WGr e a 220 m de altitude A regiao apresenta clima subumido com umidade relativa média do ar de 80 temperatura média anual de 24C e precipitacéo média de 1224 mmano EMBRAPA 1993 Os meses mais chuvosos sao abril e maio 150 mmmés e os mais secos setembro e outubro 60 mmmés Parte dos trabalhos foram desenvolvidos em formigueiros selecionados de Atta laevigata no Campus da UFRB em Cruz das Almas 421 Procedéncia dos isolados de fungos entomopatogénicos Os isolados testados usados no bioensaios foram obtidos da Colegao de Fungos Entomopatogénicos da Universidade Federal do Recéncavo da Bahia isolados coletados em Campo Insetos mortos foram coletados utilizando pincgas entomoldgicas na area de plantio da Copener Florestal em Inhambupe Bahia e em areas da UFRB sendo estes ja encontrados mortos com indicio de desenvolvimento fingico figura 1 Os insetos coletados foram acondicionados em pequenos recipientes de vidro e identificados com data e local de coleta Os recipientes foram levados ao laboratorio e em seguida colocados em camara umida por trés dias para favorecer a esporulacao 281C 801 de UR medido por termohigr6metro modelo 303C Aa f P a mo nae r b i he So See pe el 4 s F 4 ny a mI pe Be 8 2 eae Fr SF P a3 P r ae om rae é ee a re A ys Figura 1 Fungos encontrados em pupas de lepiddpteros da espécie Sarsina violascens A com extrusao fiingica B coletados na Copener Florestal em Inhambupe Lepidopteros com extrusao fingica em pupas de Dione juno juno na cidade de Cruz das Almas C D Posteriormente 0 corpo dos insetos foram esterilizados externamente inserindo os por um minuto em hipoclorito de sédio a 1 e em seguida em alcool 70 por 30 segundos transferindoos para solucao de tiossulfato de sddio a 10 para remogao do cloro por mais 30 segundos enxaguando por trés vezes em agua destilada Apés a esterilizacgao os insetos foram colocados em placa de petri com algodao umedecido em agua destilada colocados em camara umida para esporulagao 412 Crescimento vegetativo e producao de conidios em meio e cultura O isolamento dos conidios no corpo dos insetos se deu com auxilio de uma agulha fina e esterilizada Esses esporos foram colocados em lamina com corante azul de metileno a 1 diluido em agua destilada para microscopia e identificagao preliminar no microscopio dtico Olympus CX21 com objetiva de 100x Em camara de fluxo laminar vertical previamente esterilizada com alcool 70 cada fungo foi inoculado em um ponto central nas placas através de uma alga de platina previamente flambada sobre placas de Petri contendo meio de cultura BDA 200 g de extrato de batata 20 g de agaragar e 20 g de dextrose em 1000 mL de agua destilada sendo necessaria a realizacao de repicagens visando a purificagao das coldnias de fungos As placas foram armazenadas em temperatura ambiente e umidade relativa do ar 281C 801 de UR medido por termohigrémetro modelo 303C O periodo de incubagao foi de 15 dias 413 Identificacao dos isolados Posteriormente foram preparadas laminas para identificagéo desses fungos em microscopio dtico com auxilio de chaves dicot6micas e ajuda de um taxonomista especialista em micologia Dr Thais Feij6 utilizando de literatura especifica Humber 1998 e Rifai 1969 414 Preparacao das suspensdes Para as suspensdes foram utilizados quatro fungos Aspergillus flavus Trichocomaceae Paecilomyces lilacinus Trichocomaceae Trichoderma harzianum Hypocreaceae e Cladosporium sp Davidiellaceae Tabela 1 Os conidios foram removidos por meio de raspagem com auxilio de espatula de metal previamente flambada do meio de crescimento BDA a seguir foram preparadas em solugao em agua destilada estéril A contagem do numero de esporos foi feita em camara de Neubauer em microscdpio 6tico 100x e suas concentracgdes foram ajustadas por meio de diluicdes em série de 10 x 107 e 10 x 10 conidios mL de acordo com a literatura para cada fungo Tabela 1 Procedéncia dos isolados testados em condic6es de laboratorio Espécie Caracteristicas Origem Hospedeiro Aspergillus flavus Smopolita produz Copener Atta sp micotoxinas aflatoxinas responsaveis por grandes perdas econdmicas Causam infeccdes oportunistas em humanos Produtor de enzimas de interesse alimenticio Paecilomyces Saprofita encontrado na Campus da Lagarta lilacinus rizosfera de muitas UFRB Cruz culturas Pode desenvolverse num das Almas amplo intervalo de BA temperatura dos 8C aos 38C e tem grande tolerancia ao pH Apresenta resultados promissores para 0 controlo biol6gico contra os nematodes das galhas das raizes Trichoderma Utilizado como fungicida Copener Cochonilha foliar e tratamento de harzianum Florestal sementes Os produtos biotecnolégicos comerciais como 3Tac tém sido Uteis para o tratamento de Botrytis Fusarium e Penicillium sp E também utilizado para a fabricagao de enzimas Cladosporium sp 4dofitico importante no Inseto nao controle biolégico de identificado insetos e de fungos fitopatogénicos envolvidos na deterioragéo do grao de café Atua como regulador das populacoes de pulgoes 415 Teste de Patogenicidade a Atta laevigata em laboratorio Para o teste de patogenicidade foram coletadas no més de dezembro de 2015 operarias maiores de formigueiros de Atta laevigata satuvacabecadevidro obtidos de sauveiros com intensa atividade localizado no campus da UFRB 1265S 3908W com o auxilio de pinca entomoldgica As operarias maiores foram transportados para o laboratério em frascos plasticos de 145 mL com tampa sendo esses materiais previamente esterilizados As operarias foram mantidas no laboratorio em condigdes ambientais de temperatura e umidade relativa do ar 281C 801 de UR por uma hora até a realizacao do teste Estas foram divididos em grupos de oito para cada tratamento T9 numero total de formigas 288 previamente desinfestadas em hipoclorito de sddio a 1 e imergidas em suspensdes com concentracées de 10 x 10 e 10 x 10 conidiosmL e um tratamento contendo apenas agua destilada testemunha Em seguida as formigas foram colocadas no interior de camaras umidas e mantidas em local com temperatura ambiente de 28 1C com umidade relativa do ar acima de 80 mantendose assim condig6es ideais para os insetos e fungos Durante a conducao do experimento nao foi oferecido alimento as operarias A avaliacao foi realizada computando a mortalidade diaria dos individuos de cada tratamento durante 168 horas Nesse periodo foi calculada para cada isolado a mortalidade acumulada numero de individuos mortosnumero total de individuos100 Para confirmacao da mortalidade pelo fungo as operarias maiores mortas foram desinfestados externamente com alcool 70 e agua destilada Para confirmagao da morte as formigas foram colocados em placas de Petri mantidas a 281 C com umidade relativa do ar acima de 80 A confirmacao da mortalidade pelo patogeno se deu pela observacdéo do crescimento micelial e conidiogénese do fungo sobre cadaver das formigas O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com quatro repetides por tratamento sendo 8 operarias por repeticao Para o teste de mortalidade acumulada as médias foram transformadas em Raiz de Y10SQRT Y10 pelo programa Sisvar Para obtenao dos valores de TLSO em horas procedeuse analise de Probit 43 Confeccao das iscas atrativas Para confecao das iscas foram feitas coletas de plantas Tabela 2 no campus da UFRB enquanto a laranja e o trigo foram obtidas comercialmente A confeccao das iscas foi feita de forma artesanal as folhas e bagaco da laranja foram secas em estufa a 50C durante 48h Em seguida foram trituradas em liquidificador até pd Misturouse entao a farinha de trigo aglutinante dleo de soja lubrificante e agua destilada na proporgao em peso de 1451 farinha de trigo material triturado dleo de soja Posteriormente a pasta formada foi colocada em uma seringa de 60 mL e confeccionado os pellets As iscas foram deixadas para secar a temperatura ambiente por 48h e posteriormente cortadas com o comprimento de aproximadamente 2 mm semelhante a isca comercial padrao trés marcas muito utilizadas apresentam diametros 215 012 258 015 e 260 016 mm A testemunha nos testes de atratividade consistiu de granulos de farinha de trigo sem atrativo As iscas foram confeccionadas com granulos de massa semelhante a da carga média transportada por operarias de Atta bisphaerica determinada previamente em 1200 forrageadoras com carga média de 8 mg Lima et al 2003 com formato e diémetro semelhantes ao das iscas granuladas comerciais Tabela 2 Espécies vegetais utilizadas como atrativos no desenvolvimento das iscas artesanais Nome vulgar Espécie Familia Acalifa Acalypha wilkesiana Euphorbiaceae Angicovermelho Anadenanthera macrocarpa Fabaceae Benth Brenan MinirosaRosa chinensis varminimaRosaceae 421 Avaliacao da atratividade e carregamento das iscas no campo Foram utilizados quatro formigueiros previamente marcados de Atta laevigata medindo em média 10 m de area de terra solta conforme Della Lucia 1993 distantes aproximadamente 50 m um do outro Localizados no Campus da Universidade Federal do Recéncavo da Bahia Cruz das Almas Os testes foram realizados no més de julho de 2015 Para avaliagao da atratividade das iscas seguiuse os seguintes tratamentos iscas de folhas iscas de polpa citrica e iscas sem atrativo As iscas foram oferecidas aos formigueiros de A aevigata Inicialmente observouse o horario e o carreiro de maior atividade de forrageamento dos ninhos Em seguida foram oferecidos 10 granulos a cada lado do carreiro a uma distancia de 10 cm dos tratamentos Durante o teste foram realizadas observagoées visuais a partir das 17 horas horario de inicio das atividades de forrageamento nos ninhos Dentro do periodo de observacao foi verificado 0 tempo gasto para o primeiro contato fisico o tempo para o inicio do recrutamento das iscas e 0 tempo gasto para transportar todos os pellets Os testes foram realizados seis vezes em cada formigueiro O experimento foi delineado em blocos casualizados em que cada formigueiro correspondeu a um bloco Para analise do tempo gasto no recrutamento e no transporte das iscas realizouse analise de variancia com teste Tukey a 5 de probabilidade 5 RESULTADOS E DISCUSSAO 52 Crescimento dos fungos O isolado de P lilacinus mostrou colénia com micélio flocoso coloragao vinho e reverso incolor abundante esporulacao sendo os conidios elipsdéides com parede lisa As colénias do Trichoderma harzianum sao de rapido crescimento micelial brancoverde da origem rapidamente a conididforos agregados muito ramificados em tufos O Aspergilus flavus apresentou micélio de cor verde e conidios esféricos ou semi esféricos levemente rugosos O Cladosporium sp apresentou colonias forma aveludadas com dobras radiais em tons verdes oliva ao marrom Figura 2 i i Pre f Ml WY eA IM ne Dao ia b 4 iY i yA Me y y Figura 2 Crescimento das col6nias em meio BDA dos fungos A Paecilomyces lilacinus B Trichoderma harzianum C Cladosporium sp e D Aspergillus flavus 53 Teste de patogenicidade Por meio dos resultados apresentados no experimento em laboratério os fungos testados foram visualizados a partir das 72 horas apos a inoculaao provocando mortalidade superior a observada no tratamento Testemunha agua e continuou até 168 h apos inoculagao quando ocorreu mortalidade total para maioria dos tratamentos com fungos Figura 3 O fato da mortalidade das formigas ser maior de 50 pode estar associado além da morte pelo isolado com a falta de alimento doena ou senescéncia dessas 100 10036 100 100 938 9387 a 875 90 75 80 75 w 70 625 a 6 563 bi 50 3 E 40 o Lu 2 30 Tc fe 20 o 10 0 Test a 1x10 w 1518 a stor 2 ie AisioF Ai 21x07 2 1108 Isolados Testados o Testemunha e Trichoderma harzianum Q Clodosporium sp A Paecilomyces lilacinus Aspergillus flavus Figura 3 Mortalidade acumulada de operarias de Atta laevigata ao final de 168 horas apos a inoculagéo com Trichoderma harzianum Cladosporium sp Paecilomyces lilacinus e Aspergillus flavus nas concentragées de 10 x 107 10 x 10 em condicées de laboratério Dos quatro isolados testados sobre operarias maiores da espécie de sativa os isolados de Cladosporium sp e Paecilomyces lilacinus causaram menos de 2813 de mortalidade apos 168 horas da inoculacéo dos fungos figura 4 por ser considerada baixa foram excluidos para futura consideragao como agentes de controle bioldgico dessas formigas c c 9688 E 100 8750 s 90 c 3 80 b b 6583 70 5938 60 oO 3 E 50 40 ab b 9 2813 30 a 2500 z a 1563 a ZS 20 4 125 1250 cI 5 10 0 Test 1x107 1x108 2 1x107 2 1x108 41x107 41x108 0 1x107 1x108 Isolados Testados Letras iguais nao diferem entre se pelo teste Tukey a 5 de probabilidade o Testemunha e Trichoderma harzianum Q Clodosporium sp A Paecilomyces lilacinus Aspergillus flavus Figura 4 Mortalidade confirmada de operarias de Atta laevigata apos 72 horas e ao final de 168 horas da inoculagéo com isolados de Trichoderma harzianum Cladosporium sp Paecilomyces lilacinus e Aspergillus flavus em condioes de laboratorio Analisando a patogenicidade dos isolados em fungao do tempo apos a inoculaao observouse que os isolados Trichoderma harzianum e Aspergillus flavus foram virulentos para cada uma das duas concentrades sendo as médias 594 e 875 968 656 respectivamente para 10x107 10x10 figura 4 Os fungos T harzianum e A flavus foram capazes de crescer em cadaveres de operarias maiores de A aevigata Figura 5 sendo essa caracteristica favoravel pois sugere que os isolados apresentam potencial epizocdtico ou seja capacidade de causar infeccdes secundarias e portanto de atingirem um maior numero de individuos na col6nia DIEHLFLEIG et al 1988 7 oy A B Figura 5 Extrusao flingica sobre 0 corpo de operarias de A laevigata A Trichoderma harzianum e B Aspergillus flavus Os dois fungos apresentaram capacidade semelhante de crescer em cadaveres de formigas Todavia houve diferengas entre isolados quanto as concentragédes tendo os isolados de Trichoderma a 10 x 10 e Aspergilus com a concentracdo de 10 x 10 apresentando alta mortalidade mostrando maior capacidade de esporular em cadaveres de A lavigata Isolados de B bassiana esporulou sobre 88 dos cadaveres de operarias de S invicta PEREIRA et al 1993 dado esse inferior ao encontrado no presente trabalho 968 para o isolado de Aspergillus em Alaevigata Aspergilus flavus embora considerado saprofitas DOMSCH et al 1980 podem causar doengas em insetos em determinadas circunstancias HUGHES BOOMSMA 2004 Segundo QUIROZ 1996 os fatores de mortalidade mais importantes para rainhas de A mexicana sao os fungos entomopatogénicos Em levantamentos realizados pelo autor no México foram identificadas varias espécies destacandose nos ensaios de patogenicidade B bassiana Paecilomyces farinosus como oS mais promissores no controle bioldgico Os fungos B bassiana M anisopliae e P farinosus se mostraram eficientes patégenos pois provocaram alta mortalidade matando mais que 80 de soldados de A sexdens sexdens em condicoées de laboratorio nos quatro primeiros dias de aplicaao LOUREIRO MONTEIRO 2005 Os melhores resultados de controle de formigas cortadeiras utilizandose fungos foram obtidos em condicgées de laboratério onde se pode observar mortalidade de até 100 de grupos isolados de formigas ALVES SOSA GOMES 1983 JACCOUD 1996 A baixa efetividade em campo é atribuida a diversos fatores comportamentais e fatores quimicos JACCOUD et al 1999 Contra a formiga S invicta 0 fungo B bassiana demonstra ser uma forma promissora de controle bioldgico causando mortalidade em todos os estagios de desenvolvimento OI et al 1994 Quanto ao teste de atratividade nao houve diferenga significativa entre as médias referentes ao primeiro contato dos granulos em nenhum dos formigueiros avaliados O tempo médio para o encerramento dos testes foi de 647 minutos e neste periodo as operarias carregaram praticamente 100 de todos granulos em todos os testes Figura 6 A isca confeccionada apenas com trigo por nao apresentar atrativos foi a que apresentou menor atratividade pois foi a que apresentou maoior tempo para ser trasnportada Durante os testes as operarias tocaram intensamente com suas antenas nos granulos de folhas de acalifa angico vermelho laranjeira e roseiras Primeiro Toque Primeiro Toque Formigueiro 01 Formigueiro 02 o 1 Acalifa a ot 2 Angico Vermelho 3 Laranja 4 Rosa a 2 5 Trigo 2 e B 8 S a er Bo 3 1 2 3 4 5 Q 2 4 Primeiro Toque Praero Toque Formigueiro 04 Formigueiro 03 a g2 3 23 28 Q q Qo 5 s Kw 4 oS 1 2 3 4 5 Figura 6 Tempo médio minutos para o primeiro toque de antenas de operarias de Atta laevigata com seus respectivos EP Teste Tukey 5 de probabilidade O primeiro toque das formigas na isca aconteceu em menos de meio minuto para todos os quatro formigueiros testados O tempo de carregamento é importante pois em condicgdes de campo maior rapidez no carregamento de iscas implica em menor exposicao das mesmas as condides climaticas adversas roedores aves insetos benéficos e outros animais presentes na area podendo aumentar a eficiéncia de controle e evitar possiveis intoxicacgdes de animais silvestres LIMA et al 2003 AS operarias tocaram intensamente com suas antenas sobre os granulos de iscas de angicovermelho apresentando menor tempo para contato e inicio de carregamento das iscas De acordo com Hubbell e Wiemer 1983 apud LIMA et al 2003 as formigas cortadeiras percebem diferengas na qualidade das folhas e propriedades quimicas e fisicas estariam associadas na preferéncia dessas formigas Quanto ao carregamento nao se detectou diferenga significativa a 5 de probabilidade entre as médias do tempo para o primeiro contato das operarias nas iscas Figura 7 Da mesma forma nao houve diferenga significativa a 5 de probabilidade para o carregamento total Figura 8 Carregamento Carregamento o Formigueiro 01 Formigueiro 02 1 Acalifa o Angico Vermelho 3 Laranja 3 4 Rosa 33 4 Trigo g a a Ee 2 Q Ea 5 2 Bw amr ee oe 2 1 2 4 6 1 2 3 4 5 Carregamento Carregamento Formigueiro 03 Formigueiro 04 Q Q a 5 FI By BO 1 3 4 5 qd 2 3 4 5 Figura 7 Tempo médio minutos para o inicio do carregamento das iscas artesanais pelas operarias de A laevigata apos primeiro toque com os respectivos valores de EP Carregamento total Carregamento total Formigueir 01 Formigueir 02 a 2AL SS fo eryLtirq st gq a 9 PL Pele By eo a 1 Acalifa 5 2 Angico Vermelho 3 Laranja 4 Rosa o 4 5 Trigo oO qd 2 3 4 5 2 4 6 Carregamento total Carregamento total Formigueiro 03 Formigueiro 04 PSo7Te 1 2 G3 5 1 2 3 4 5 Figura 8 Tempo médio minutos para o carregamento total das iscas artesanais pelas operarias de A laevigata com os respectivos valores de EP Nao houve diferencga significativa a 5 de significancia Lopez e Orduz 2003 também verificaram aceitagaéo e carregamento de iscas formuladas com M anisopliae Trichoderma viride e com a combinacao dos dois fungos por operarias de A cephalotes em colénias de laboratorio Specht et al 1994 testando isca formulada com esporos de B bassiana verificaram carregamento para Acromyrmex crassispinus e Acromyrmex striatus porém nao verificando tal comportamento para Acromyrmex heyeri De acordo com Delabie et al 2000 diversos parametros devem ser considerados para confeccao das iscas como pode ser visto na confeccao das iscas tais como a aparéncia o cheiro a consisténcia a cor a resisténcia 4 umidade o sinergismo com os adjuvantes de fabricacao ou o inseticida o tamanho dos granulos sua textura etc Estas sao as caracteristicas mais importantes na formulagao de iscas para o controle de formigas cortadeiras As iscas produzidas em laboratorio apresentaram boas caracteristicas qualitativas cor textura consisténcia como sugere Delabie et al 2000 Para Forti et al 1998 2003 Nagamoto et al 2004 e Verza et al 2006 o incremento do transporte de iscas e a reducdo no tempo de permanéncia destas no campo sao importantes pois reduzem as chances de contato do principio ativo com espécies naoalvo e a perda dessas iscas no campo 6 CONCLUSAO Isolados dos fungos entomopatogénicos Aspergillus flavus e Trichoderma harzianum nas concentragdes de 1x10 e 1x10 conidiosmL foram patogénicos a operarias de Atta laevigata em laboratorio Todas as iscas formicidas testadas apresentam igual atratividade a Alta laevigata apresentando o angicovermelho menor tempo para contato e inicio de carregamento das iscas 7 REFERENCIAS ALIPIO A S Controle de formigas cortadeiras normas técnicas da Pains Florestal S1 sn 1989 8 p ALMEIDA JEM BATISTA FILHO A Controle biologico da cigarrinhadaraiz da canade acucar com o fungo Metarhizium anisopliae Boletim Técnico do Instituto Biolégico Sao Paulo 19pp 2006 ALVES S B Controle microbiano de insetos 2 Ed Piracicaba Fealq 1998 1163p ALVES S B SOSA GOMEZ D R Viruléncia do Metarhizium anisopliae Metsch Sorok e Beauveria bassiana Bals Vuill para duas castas de Atta sexdens rubropilosa Forel 1908 Poliagro Bandeirantes v 5 n 1 p 19 1983 AMANTE E A formiga sativa Atta capiguara praga das pastagens O Bioldgico Campinas v 33 p 113120 1967 AMANTE E Influéncia de alguns fatores microclimaticos sobre a formiga sativa Atta laevigata F Smith 1858 Atta sexdens rubropilosa Forel 1908 Atta bisphaerica Forel 1908 e Atta capiguara Goncalves 1944 Hymenoptera Formicidae em formigueiros localizados no estado de SAo Paulo 1972 175f Tese Doutorado em Agronomia Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz Universidade de Sao Paulo Piracicaba 1972 ARAUJO M S DELLA LUCIA T M C SOUZA D J Estratégias Alternativas de Controle Bahia Agricola Salvador v6 n 1 p7173 2003 ARAUJO G 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