Lista Quantificação de Ácidos Nucleicos

1 Explique o princípio da quantificação de ácidos nucleicos por espectrofotometria UV Por que o comprimento de onda de 260 nm é utilizado 2 O que significa a razão A260A280 Qual o intervalo esperado para DNA e RNA puros e o que indica um valor abaixo do ideal 3 Descreva duas limitações importantes da quantificação por espectrofotometria UV 4 Um estudante obteve leitura A260 052 de uma amostra de DNA e realizou uma diluição de 150 para a leitura Calcule a concentração final da amostra considerando que 1 unidade de absorbância A260 corresponde a 50 μgmL de DNA duplahélice 5 Durante a purificação de RNA o aluno observou uma razão A260A230 11 Cite duas possíveis substâncias que podem estar contaminando a amostra e como elas podem ser removidas 6 Compare a quantificação por espectrofotometria UV com métodos fluorimétricos como Qubit Quais são as vantagens e desvantagens de cada abordagem 7 Uma leitura em espectrofotômetro gerou os seguintes valores A260 020 A280 015 A230 032 a Calcule as razões A260A280 e A260A230 b Avalie a pureza da amostra e indique possíveis problemas 8 Por que proteínas fenóis e sais interferem na leitura espectrofotométrica de ácidos nucleicos Relacione essa interferência aos picos de absorção de cada classe de moléculas 9 Em um experimento as leituras de DNA com nanofotômetro variam significativamente entre replicatas biológicas Cite três fatores experimentais que podem causar essas variações e como controlálos 10 Explique a importância de quantificar adequadamente DNA e RNA antes de técnicas como PCR RTqPCR clonagem RNAseq e NGS Dê um exemplo prático de consequência negativa causada por uma quantificação inadequada