PCR-qPCR-e-NGS-Principios-Metodos-Vantagens-Desvantagens-e-Aplicacoes

Tipos de PCR PCR qPCR nestredPCR PCR Relp PCR digital Princípio do método Vantagens e desvantagens Aplicação NSG Nanopore e ilumina Princípio do método Vantagens e desvantagens Aplicação qPCR Princípios do método Utilização de fluoróforo para se ligar a amplificação permitindo a detecção e quantificação em tempo real Usa primers específicos que se ligam ao DNA ou RNA alvo permitindo a amplificação seletiva do material genético Utiliza ciclo de aquecimento e resfriamento para amplificar o DNA ou RNA para detectar pequenas quantidades de material genético Vantagens e desvantagens Vantagens alta sensibilidade e especificidade na detecção de ácidos nucleicos específicos detecção em tempo real em alta velocidade Desvantagens contaminação da amostra podendo alterar os resultados possibilidade de interferência de inibidores método que necessita equipamentos e reagentes específicos e caros Aplicação Detecção de patógenos Monitoramento da expressão gênica Análise de mutações gênicas em tumores Diagnóstico de doenças genéticas Identificação de espécies em alimentos e produtos agrícolas NestedPCR Princípios do método Utiliza dois pares de primers em duas reações de PCR sequenciais para aumentar a especificidade e sensibilidade da amplificação Vantagens e desvantagens Vantagens maior sensibilidade e especificidade Desvantagens maior risco de contaminação cruzada maior complexidade e demora nos resultados Aplicação Detecção de agentes infecciosos Identifica mutações específicas em genes de doenças genéticas PCR RFLP Princípios do método Combina a técnica PCR e a RFLP A PCR amplifica uma região específica do DNA A RFLP faz a digestão do DNA com enzimas de restrições específicas e separa os fragmentos Vantagens e desvantagens Vantagens sensível e específica Desvantagens requer conhecimento prévio para analisar sequências é necessário uma quantidade suficiente de DNA para amostra Aplicação Diagnóstico de doenças genéticas Mapeamento de genomas Análises forenses Testes de paternidade PCR digital Princípios do método É igual ao PCR tradicional porém as amostras são divididas em partições individuais e são analisadas separadamente Vantagens e desvantagens Vantagens detecção de sequências raras monitoramento de mutações e duplicações detecção de cargas virais Desvantagens custo muito alto especificidade de equipamentos e reagentes específicos demorado complexo Aplicação Diagnóstico e monitoramento de câncer Detecção e monitoramentos de cargas virais Sequenciamento Método Pirosequenciamento Illumina Princípios do método Sintetiza o DNA em ponte e detecção de fluorescência Vantagens e desvantagens Vantagens uma alta precisão permite o sequenciamento análise um grande conjunto de dados Desvantagens leitura curtas dificuldade na montagem do genoma e diferenciação das variações estruturais requer mais tempo Aplicação Pesquisa genômica Diagnóstico clínico Análise forense Sequenciamento Método Oxford Nanopore Princípios do método Sequência do DNA realizado através de uma molécula de DNA por um poro nanométrico Vantagens e desvantagens Vantagens gera leituras mais longas detecta variações estruturais facilita a montagem do genoma sequenciamento em tempo real Desvantagens precisão do sequenciamento é menor Aplicação Pesquisa genômica Diagnóstico clínico Análise forense qPCR Princípios do método Utilização de fluoróforo para se ligar a amplificação permitindo a detecção e quantificação em tempo real Usa primers específicos que se ligam ao DNA ou RNA alvo permitindo a amplificação seletiva do material genético Utiliza ciclo de aquecimento e resfriamento para amplificar o DNA ou RNA para detectar pequenas quantidades de material genético Vantagens e desvantagens Vantagens alta sensibilidade e especificidade na detecção de ácidos nucleicos específicos detecção em tempo real em alta velocidade Desvantagens contaminação da amostra podendo alterar os resultados possibilidade de interferência de inibidores método que necessita equipamentos e reagentes específicos e caros Aplicação Detecção de patógenos Monitoramento da expressão gênica Análise de mutações gênicas em tumores Diagnóstico de doenças genéticas Identificação de espécies em alimentos e produtos agrícolas NestedPCR Princípios do método Utiliza dois pares de primers em duas reações de PCR sequenciais para aumentar a especificidade e sensibilidade da amplificação Vantagens e desvantagens Vantagens maior sensibilidade e especificidade Desvantagens maior risco de contaminação cruzada maior complexidade e demora nos resultados Aplicação Detecção de agentes infecciosos Identifica mutações específicas em genes de doenças genéticas PCR RFLP Princípios do método Combina a técnica PCR e a RFLP A PCR amplifica uma região específica do DNA A RFLP faz a digestão do DNA com enzimas de restrições específicas e separa os fragmentos Vantagens e desvantagens Vantagens sensível e específica Desvantagens requer conhecimento prévio para analisar sequências é necessário uma quantidade suficiente de DNA para amostra Aplicação Diagnóstico de doenças genéticas Mapeamento de genomas Análises forenses Testes de paternidade PCR digital Princípios do método É igual ao PCR tradicional porém as amostras são divididas em partições individuais e são analisadas separadamente Vantagens e desvantagens Vantagens detecção de sequências raras monitoramento de mutações e duplicações detecção de cargas virais Desvantagens custo muito alto especificidade de equipamentos e reagentes específicos demorado complexo Aplicação Diagnóstico e monitoramento de câncer Detecção e monitoramentos de cargas virais Sequenciamento Método Pirosequenciamento Illumina Princípios do método Sintetiza o DNA em ponte e detecção de fluorescência Vantagens e desvantagens Vantagens uma alta precisão permite o sequenciamento análise um grande conjunto de dados Desvantagens leitura curtas dificuldade na montagem do genoma e diferenciação das variações estruturais requer mais tempo Aplicação Pesquisa genômica Diagnóstico clínico Análise forense Sequenciamento Método Oxford Nanopore Princípios do método Sequência do DNA realizado através de uma molécula de DNA por um poro nanométrico Vantagens e desvantagens Vantagens gera leituras mais longas detecta variações estruturais facilita a montagem do genoma sequenciamento em tempo real Desvantagens precisão do sequenciamento é menor Aplicação Pesquisa genômica Diagnóstico clínico Análise forense