Imunologia Clínica: Anticorpos Monoclonais e Policlonais

Profa Dra Pollyana Melo MATERIAL COMPLEMENTAR Imunologia Clínica Anticorpo monoclonal x anticorpo policlonal Uso do anticorpos monoclonais Diagnóstico Tratamento Anticorpos monoclonais Fonte adaptado de httpwwwsulbioteccombrptcomosao produzidososanticorposmonoclonaisutilizadosemtratamentos Anticorpo Epítopos Anticorpos monoclonais Anticorpos policlonais Antígenos Laureados com o prêmio Nobel em 1984 Descrição da técnica Georges J F Kohler 19461995 Cesar Milstein 19272002 Fontes httpswwwnobelprizeorgprizesmedicine19 84milsteinfacts httpswwwnobelprizeorgprizesmedicine19 84kohlerfacts Anticorpos Mab Fonte adaptado de httpswikicienciascasadas cienciasorgwikiindexphp AnticorpoMonoclonal Antígeno Células do baço Cultura células do mieloma Células do mieloma Congelar Descongelar Seleção de células que produzem o anticorpo correto Seleção e crescimento de células híbridas Propagação de clones Crescimento em cultura Indução de tumores ANTICORPO ANTICORPO Evolução dos anticorpos monoclonais Fonte httpsdocplayercombr134558216Estrategiaseinovacoesaplicadasao desenvolvimentodeanticorposmonoclonaismariajulianapantaleaoborgesdemacedohtml Aplicações em células tumorais Fonte adaptado de httpsptslidesharenetfacenfermagemanticorpomonoclonal3581383 3 Multistep Targeting 1 Naked MAb 2 Immunoconjugates Biotinylated radioactive ligand Streptavidin Biospecific MAb Tumor Cell Radionuclide ADCC CDC Radioimmunoconjugate Immunocytokine Immunotoxin Cellular Immunoconjugates Immunoliposome ADEPT Cytokine scFvenzyme Prodrug Drug scFV Liposome Killer cell Fonte adaptado de httpaaai asbaiorgbrdetalhearti goaspid1062 Expansão e migração Células killer Célula tumoral Célula dendrítica Células T Ativação Nódulo linfático Fase efetora microambiente tumoral Fase de preparação periférica Ativação das células T Bloqueio da via PD1 nivolumabe pembrolizumabe atezolizumabe durvalumabe Bloqueio da via CTLA4 Ipilimumabe Célula T Célula T Célula tumoral Célula dendrítica Fonte httpswwwboldbusinesscomhealthimmunecancertherapy pioneersnobelprizewinnersinscience São alguns exemplos Herceptin tratamento de câncer de mama previne o crescimento do tumor ao se ligar ao receptor HER2 OKT3 previne rejeição de órgãos transplantados ao se ligarem no CD3 Infliximab promissor em doenças inflamatórias como artrite reumatoide ao se ligar ao TNFα Rituximab tratamento de linfomas de linfócito B ligase ao CD20 do linfócito B Daclizumab prevenção de rejeição a transplante renal ligase em uma porção do receptor de IL2 Anticorpos monoclonais em uso A técnica de produção de anticorpos monoclonais utiliza células de mieloma na cultura in vitro Qual é a função da adição dessas células a Imortalizar as células permitindo a manutenção da cultura in vitro b As células do mieloma são produtoras dos anticorpos monoclonais c Para a humanização do anticorpo d As células do mieloma se fundem com o linfócito B produzindo os anticorpos quiméricos e Os linfócitos B e as células de mieloma irão competir pelo meio de cultivo o que estimula a produção dos anticorpos Interatividade A técnica de produção de anticorpos monoclonais utiliza células de mieloma na cultura in vitro Qual é a função da adição dessas células a Imortalizar as células permitindo a manutenção da cultura in vitro b As células do mieloma são produtoras dos anticorpos monoclonais c Para a humanização do anticorpo d As células do mieloma se fundem com o linfócito B produzindo os anticorpos quiméricos e Os linfócitos B e as células de mieloma irão competir pelo meio de cultivo o que estimula a produção dos anticorpos Resposta Os métodos sorológicos são utilizados para a quantificação de antígenos ou anticorpos A amostra biológica pode ser soro sangue total saliva líquido cefalorraquidiano urina entre outros O conhecimento da resposta imunológica e de seus componentes permitiu a elaboração de diferentes métodos Inicialmente os métodos eram manuais e sem a utilização de conjugados Os conjugados fluoroforos cromógenos radioisótopos enzimas aumentam a sensibilidade dos métodos permitindo a quantificação de pequenas concentrações de analitos Com a tecnologia de produção dos anticorpos monoclonais os métodos ficaram mais específicos e confiáveis com alta reprodutibilidade Outros métodos em imunologia clínica Princípios dos métodos marcados Fenômeno que se obtém energia luminosa a partir de uma reação química Emissão de luz facilitada por enzima luciferase ou uma fotoproteína Outros métodos quimioluminescência Fonte adaptado de httpswwwresearchgat enetfigureReaction mechanismofluminol chemiluminescencefig3 323454159 Luminol Ketoform Enolform Tautomerisation 3aminopthalate in an excited state Cyclic peroxide Light Teste imunocromatográfico testes rápidos ÁREA DE CONTROLE ÁREA DE TESTE CONJUGADO AMOSTRA SOLUÇÃO DILUENTE C T JANELA DE LEITURA Poço CONJUGADO Ouro coloidal Antígeno T pallidum Proteína do T pallidum Anticorpo antiT pallidum Anticorpo da amostra Solução diluente Amostra com anticorpos antiT pallidum Superfície amostra Superfície absorvente Superfície conjugado Membrana nitrocelulose Fonte adaptado de httpstelelabaidsgovbrmoodlepluginfileph p22199modresourcecontent4Sifilis20 20Manual20Aula208pdf Fonte adaptado de httpwwwcremerdiagnosticacombrblogcomoerealizado odiagnosticoportestesrapidos Fonte adaptado de httpsptslidesharenetthgufbaimunocromatografiaeimunodot Tampão Amostra Área A Área I T C INTERPRETAÇÃO Positivo Negativo Inválido C T C T C T C T C T Medidas rápidas em partículas ou células enquanto elas passam por um sensor Citômetro analisa eletronicamente os sinais gerados pelas células em suspensão quando elas são interceptadas por um feixe de luz Citometria de fluxo Fonte httpwwwprofbiocombraulaspraticas aulas08pdf Western Blotting Electrode Gel Membrane Electrophonically transfer of protein sample onto PVDF membrane Sandwich preparation SDS PAGE separation of protein sample Sponge Membrane Gel Filter paper 50 kDa Block the membrane with BSA or milk casein Incubate the membrane with primary antibody specific to the target protein Primary antibody Protein Enzyme Secondary antibody Incubate the membrane with HRP conjugated secondary antibody Xray film Substrate Signal 50 kDa Autoradiography Incubate the membrane with ehemiluminescent HRP substrate Fonte adaptado de httpswwwsciencedirectco mtopicsmedicineand dentistrywesternblotting Ensaios Nefelométricos Soluções com diferentes concentrações de antígenos são adicionadas à solução com concentração fixa de anticorpos Leitura da dispersão da luz espalhamento da luz devido à presença de partículas em suspensão Ensaios de Turbidimetria São analisados em um fotômetro Baseiam na adsorção da luz Sensibilidade chega a subnanogramamL ELISA ELFA ECLIA IFI Métodos empregados na automação Os testes imunocromatográficos são amplamente utilizados principalmente como forma de triagem na detecção de doenças São também conhecidos como testes rápidos esses métodos permitem a detecção de a Antígenos b Anticorpos c Antígenos ou anticorpos d Proteínas do complemento e Citocinas Interatividade Os testes imunocromatográficos são amplamente utilizados principalmente como forma de triagem na detecção de doenças São também conhecidos como testes rápidos esses métodos permitem a detecção de a Antígenos b Anticorpos c Antígenos ou anticorpos d Proteínas do complemento e Citocinas Resposta Doença Hemolítica do RecémNascido DHRN Fator Rh e eritroblastose fetal Mulher Rh rr Organismo materno produz anticorpos antiRh AntiRh Criança Rh Criança Rh 1ª GRAVIDEZ PARTO 2ª GRAVIDEZ Passagem de hemácias fetais Rh para o sangue da mãe Passagem de anticorpos antiRh para a circulação fetal Mulher sensibilizada produz grande quantidade de anticorpos antiRh Fonte adaptado de httpsplanetabiologiacomeritroblastosefetal doencahemoliticadorecemnascidooquee Princípio Imunoglobulinas de um espécie são imunogênicas quando inoculadas em outra produz anticorpos antiimunoglobulina Antiimunoglobulinas reagem com a região Fc de um anticorpo e podem reagir com o antígeno na região Fab aglutinação Duas versões Teste direto de Coombs Teste indireto de Coombs Anticorpos antiimunoglobulina Teste de Coombs Amostra de sangue total Realizado no recémnascido Detecta hemácias sensibilizadas com IgG ou C3 Reagente de Coombs é um soro contendo antiimunoglobulina É necessário lavar as hemácias retirando os interferentes do soro Também utilizado no diagnóstico de anemias hemolíticas Teste de Coombs Direto Fonte adaptado de httpswss0271wordpresscom20110829coombsdiretoeindireto Amostra de sangue de um paciente com anemia hemolítica autoimune eritrócitos sensibilizados Soro de Coombs é adicionado antiIg humana Aglutinação antiIg complexo antígenoanticorpo TESTE POSITIVO LEGENDA Antígenos na membrana da célula Antieritrócitos AntiIg humana Soro de Coombs A amostra é o soro Detecta a presença dos anticorpos contra eritrócito É realizado em duas etapas primeiro são adicionados eritrócitos e após o soro de Coomb Realizado na amostra de mãe Também é realizado para a detecção de anticorpo em reações transfusionais Teste de Coombs Indireto Fonte adaptado de httpadamogamablogspotc om201105testede coombsindiretohtml Amostra de sangue de um doador é adicionada ao tubo com soro O Amostra de soro contendo anticorpos Igs Igs fixamse nas hemácias do doador formando o complexo antígenoanticorpo Soro de Coombs é adicionado AntiIg humana Antígeno na membrana da célula Antieritrócitos AntiIg humana Soro de Coombs Aglutinação ocorre pois as Igs estão fixadas nas hemácias A doença hemolítica do recémnascido ocorre quando as imunoglobulinas maternas que foram produzidas quando há o contato do sangue da mãe com o bebê em uma primeira gestação são transmitidas para o feto de uma segunda gestação Essas imunoglobulinas são da classe a IgA b IgD c IgE d IgG e IgM Interatividade A doença hemolítica do recémnascido ocorre quando as imunoglobulinas maternas que foram produzidas quando há o contato do sangue da mãe com o bebê em uma primeira gestação são transmitidas para o feto de uma segunda gestação Essas imunoglobulinas são da classe a IgA b IgD c IgE d IgG e IgM Resposta ATÉ A PRÓXIMA