Estudo de Caso Genética Forense - Análise de DNA em Crime de Estupro e Homicídio

Universidade Estácio de Sá Campus Norte Shopping Biomedicina Genética Forense 20221 Prof Marcelo A S Baptista ESTUDO DE CASO AV1 1 Um crime bárbaro aconteceu em Porto Alegre RS onde uma menina de 8 anos foi morta por fratura da coluna cervical e estuprada Dois suspeitos foram presos e confessaram ter participado do crime Existiam dúvidas de quem teria estuprado a menor e para o esclarecimento do caso criminal foram coletadas amostras de esfregaço bucal da vítima esfregaço vaginal da vítima além de sangue dos suspeitos As amostras coletadas foram submetidas à extração de DNA e especificamente para a amostra vaginal foi feita uma extração diferencial de DNA separando as frações feminina e masculina Após a extração do DNA uma amplificação por PCR foi realizada usando um kit multiplex com 10 loci de STR mais amelogenina Os resultados obtidos foram compilados na Tabela 1 Tabela 1 Perfis genéticos de 10 loci de STR mais amelogenina obtidos de amostras questionadas e referências visando identificação criminal em caso de estupro Locus Esfregaço bucal vítima Esfregaço vaginal fração feminina Esfregaço vaginal fração masculina Sangue suspeito 1 Sangue suspeito 2 D1S1656 5 7 4 5 7 4 5 4 5 5 11 D7S1517 9 12 6 7 9 12 6 7 6 7 9 10 D20S156 10 15 10 15 14 16 14 16 17 17 D8S369 ND ND 28 331 28 331 27 28 D3S1545 4 7 4 5 6 7 5 6 5 6 5 6 D12S391 ND ND 17 18 17 18 19 20 THO1 6 8 6 8 6 93 6 93 6 93 FES ND ND 11 12 11 12 11 12 VWA31 17 17 14 16 17 14 16 14 16 14 15 CD4 5 10 5 6 10 5 6 5 6 5 6 Amelogenin a XX XY XY XY XY ND não determinado AQual o objetivo investigativo ao se realizar extração de DNA diferencial a partir de esfregaço vaginal da vítima O processo foi bem sucedido Explique B Identifique as amostras questionadas e as amostras referências analisadas C A comparação direta dos perfis genéticos obtidos a partir das amostras analisadas juntamente com a informação do banco de dados de frequências alélicas da população referencial possibilitou a seguinte interpretação estatística referente ao Suspeito 1 É aproximadamente 1000000000000 um trilhão de vezes mais provável que encontremos o perfil genético observado se considerarmos que a amostra questionada é proveniente do doador da amostra referência do que se considerarmos que é proveniente de outra pessoa qualquer da população A expressão verbal acima visa quantificar a força da evidência genética identidade entre o perfil genético da amostra questionada e o da amostra referência estimando a razão de probabilidades ou índice de coincidência cumulativo da evidência genética sob duas hipóteses alternativas mutuamente exclusivas Quais são essas hipóteses Qual hipótese deve ser aceita que conclusão se chega Responda em linguagem técnica pericial DQual a interpretação do resultado referente ao Suspeito 2 E a conclusão Responda em linguagem técnica pericial NOTA TÉCNICA Extração Diferencial de DNA A extração diferencial de DNA é uma técnica de extração modificada que permite a lise seletiva e o isolamento do DNA de uma mistura de espermatozoides e células epiteliais Figura 1 Amostras forenses como as coletadas em casos de violência sexual podem conter espermatozoides evidência misturados com células epiteliais vaginais eou retais referência Técnicas de extração diferencial permitem o isolamento físico seletivo da fração masculina da amostra forense antes da obtenção do perfil genético Durante a extração diferencial as células epiteliais são primeiro seletivamente lisadas através da adição de dodecilsulfato de sódio SDS e proteinase K Os espermatozoides são geralmente resistentes à lise por esses produtos químicos Uma vez que as células epiteliais tenham sido lisadas a centrifugação é usada para sedimentar seletivamente quaisquer espermatozoides intactos O sobrenadante contendo o DNA das células epiteliais pode então ser removido para um tubo separado Os espermatozoides isolados são então lisados pela adição de SDS proteinase K e ditiotreitol DTT Figura 1 O DTT é um forte agente redutor que desestabiliza as pontes dissulfeto de proteínas presentes nas membranas nucleares do espermatozoide liberando o DNA das células espermáticas O DNA na fração epitelial e na fração espermática pode então ser extraído separadamente por métodos orgânicos ou não orgânicos O método de extração diferencial pode simplificar a interpretação dos resultados do perfil genético em casos de crime sexual aumentando a probabilidade de obter perfil de DNA exclusivamente masculino isolado da fração espermática Figura 2 Como a fração epitelial pode conter tanto o DNA feminino quanto eventualmente o masculino por contaminação com células epiteliais masculinas um perfil característico de mistura de amostras biológicas com três ou mais alelos é passível de ser obtido a partir da fração não espermática Figura 1 Fluxograma de extração diferencial de DNA Comumente empregada para o processamento de evidências de violência sexual as células epiteliais são primeiramente lisadas deixando espermatozoides intactos que são facilmente sedimentados por centrifugação A remoção do lisado de células epiteliais para um tubo separado deixa um sedimento enriquecido de espermatozoides A desnaturação subsequente das ligações dissulfeto de proteínas da membrana nuclear espermática pelo agente redutor DTT facilita a lise dos espermatozoides para a extração do DNA SDS e Proteinase K Incubar e Centrifugar Transferir Sobrenadante Lisado da Fração Epitelial Ressuspender Sedimento Espermático Lisado da Fração Espermática SDS Proteinase K e DTT Lisado da Fração Epitelial DNA Epitelial DNA Espermático IsolarPurificar DNA por Extração Orgânica ou Fase Sólida IsolarPurificar DNA por Extração Orgânica ou Fase Sólida DTT Figura 2 Representação esquemática ilustrando os resultados das quatro amostras tipicamente associadas a um caso de violência sexual Durante a extração diferencial de DNA a amostra questionada é dividida em duas frações a fração nãoespermática ou epitelial e b fração espermática O perfil genético do suspeito d é comparado com a fração espermática b para averiguar possível identidade O perfil genético da vítima c fornece confirmação da identidade da amostra referência com a fração não espermática a Amostra Questionada Q Amostra Referência R Fração Epitelial Fração Espermática Vítima Suspeito Extração Diferencial 2 A partir do caso criminal a seguir foi realizada a análise genética das amostras biológicas visando a identificação criminal após o que foi produzido o respectivo laudo pericial de exame de DNA cujas partes relevantes foram transcritas com adaptações abaixo Analise o caso e responda o que se pede Resumo Suposto caso de violência sexual com morte da vítima Foi comparada amostra de sangue do suspeito com esfregaço vaginal e amostra subungueal da vítima Objetivo pericial Determinar se os perfis genéticos das amostras questionadas coincidem com o perfil do doador da amostra referência Extração de DNA as amostras referência e questionadas foram submetidas à extração de DNA Obtenção do perfil genético As amostras de DNA foram submetidas à amplificação pelo método da PCR com emprego do sistema de identificação humana PowerPlex 16 System Promega para análise de 15 quinze regiões de STR autossômico mais o marcador de sexo amelogenina Resultados obtidos Local genético Amostra sanguínea Amostra vaginal Amostra subungueal D3S1358 16 18 15 16 15 16 18 THO1 93 93 7 9 7 9 93 D21S11 29 312 30 34 29 30 34 D18S51 13 13 12 15 12 15 16 17 Penta E 10 11 7 17 7 11 17 D5S818 11 13 12 12 12 12 D13S317 11 12 11 14 9 11 14 D7S820 10 11 11 12 8 9 11 12 D16S539 11 12 12 12 11 12 CSF1PO 10 12 11 12 10 11 12 Penta D 9 12 12 13 8 10 12 13 vWA 15 17 15 18 15 17 18 D8S1179 11 14 14 14 14 14 TPOX 9 11 8 9 8 9 12 FGA 20 24 20 23 20 22 23 AMEL XY XX XY Análise e Interpretação dos Resultados 1 O perfil alélico obtido da amostra vaginal é compatível com perfil originário de um indivíduo do sexo feminino 2 O perfil genético obtido da amostra ungueal demonstra a mistura de pelo menos 02 perfis alélicos sendo que em todos os locais estudados observouse coincidência identidade com o perfil alélico da amostra vaginal 3 O perfil genético da amostra sanguínea não apresentou coincidência com o perfil da amostra ungueal em 12 dos 15 locais genéticos estudados estabelecendo assim a condição de não contribuidor Conclusão Com base na análise comparativa entre a amostra sanguínea e as amostras vaginal e ungueal fica estabelecida a condição de não contribuidor não coincidência entre os perfis alélicos de STR autossômicos obtidos a partir destes materiais AIdentifique as amostras questionadas e as amostras referências analisadas Justifique a resposta B Que evidências observadas no perfil genético obtido da amostra ungueal demonstram a mistura da materiais biológicos de indivíduos diferentes C Por que os marcadores genéticos de STR são úteis para discriminação de misturas de amostras biológicas