Importância Clínica dos Fungos e Aspectos Fisiopatológicos Gerais

99 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Unidade II 5 MICOLOGIA CLÍNICA 51 Importância clinica dos fungos e aspectos fisiopatológicos gerais Fungos são microrganismos de distribuição mundial com uma diversidade de aproximadamente 700 mil espécies na natureza entre elas cerca de 200 mil podem causar doenças com tendência de aumento As infecções causadas por fungos vão desde quadros simples de menor repercussão clínica como as micoses superficiais relativamente fáceis de curar até a quadros mais graves denominados de micoses sistêmicas e invasivas as quais podem ameaçar a vida principalmente quando associadas às condições de vida das populações atingidas as quais afetam sobretudo o diagnóstico precoce comprometendo um processo de terapia oportuna e eficaz Outro fator que também merece o devido destaque é o aumento da resistência dos fungos de diferentes espécies aos antifúngicos disponíveis o que dificulta ainda mais o tratamento Embora existam vários estudos sobre a frequência incidência e prevalência de infecções fúngicas em alguns países a maioria delas está geograficamente localizada isso impede que a dimensão global do impacto na saúde humana seja totalmente conhecido A incidência de micoses é maior nos trópicos e subtrópicos em que provavelmente fatores como temperatura e umidade facilitam o crescimento e a transmissão dos agentes etiológicos Outra consideração epidemiologicamente importante é que tais infecções afetam pessoas de qualquer condição social idade e sexo no entanto pacientes com alterações no sistema imunológico idade avançada em tratamentos com corticosteroides quimioterapia para câncer diabetes e infecção por HIVaids representam as principais condições de risco para agravamento nos casos de infecção As micoses superficiais são talvez as mais estudadas e para as quais a maioria dos dados está disponível a nível mundial Por sua vez as infecções fúngicas invasivas e disseminadas têm uma incidência muito menor do que as micoses superficiais apesar de apresentar taxas de mortalidade muito mais elevadas chegando em alguns casos a mais de 50 dos casos independentemente da disponibilidade de diversos agentes antifúngicos no mercado Estimase que cerca de um milhão de pessoas morrem anualmente devido a infecções fúngicas invasivas excedendo os números de mortalidade devido à tuberculose ou à malária em alguns paises A frequência de infecções por fungos filamentosos vem aumentando muito durante a última década devido sobretudo a um aumento do número de pacientes com fatores de risco associado Entre essas infecções destacase a aspergilose e a fusariose com altas taxas de morbidade e mortalidade principalmente em pacientes neutropênicos ou transplantados de órgãos sólidos ou medula óssea 100 Unidade II Os fungos dos gêneros Candida Aspergillus e Cryptococcus continuam sendo os principais agentes etiológicos de micoses invasivas e disseminadas No entanto espécies de outros gêneros vêm ganhando importância dentro da micologia médica devido à incidência e mortalidade que causam ou a resistência que apresentam a um ou mais antifúngicos No quadro a seguir são apresentados os principais fungos causadores de micose sua classificação quanto à morfologia o mecanismo de infecção os órgãos alvos estruturas que auxiliam no diagnóstico e o tempo que pode levar para o isolamento do fungo em cultura Quadro 10 Principais agentes fúngicos patógenos a seres humanos Fungo Fonte de infecção Estrutura de infecção Via de transmissão Sítio de infecção Tempo estimado de cultura dias Aspergillus spp Ambiente Conídios Inalação Pulmões olhos unhas e ouvido 16 Candida spp Microbiota endógena Blastoconídeos Invasão direta disseminação Mucosa intestinal vaginal oral unhas e sangue 12 Cryptococcus neoformans Fezes de pombos aves Leveduras Inalação Meninges pulmões pele 34 Histoplasma capsulatum Fezes de morcegos e aves Microconídeos Inalação Pulmões medula óssea sangue pele 1030 Paracoccidioides brasiliensis Solo Conídios e fragmentos de hifas Inalação Pulmões pele mucosas 1045 Fungos dermatófitos Antropofílico zoofílico geofílico Conídios e fragmentos de hifas Contato direto Pele cabelo unha 312 Fusarium spp Solo e plantas Conídios e fragmentos de hifas Inalação Pulmões olhos unhas e sangue 26 Malassezia spp Microbiota endógena Blastoconídeos e hifas Direta a partir da microbiota Pele couro cabeludo ouvido 314 As infecções fúngicas podem ser provocadas veiculadas ou manifestarse de formas distintas entre as mais comuns destacamos os quadros clínicos provocados pela ingestão de alimentos contaminados por fungos ou micotoxinas ingestão acidental de fungos venenosos reações alérgicas e micoses A seguir de modo geral alguns desses quadros de infecção e doença Quadros provocados por alimentos contaminados por fungos e ou micotoxinas É sabido que a maior parte dos fungos toxicogênicos surge nas forragens e nos cereais estocados em silos celeiros e depósitos A frequência de infecção entre animais é substancialmente maior do que a revelada em humanos O primeiro grande estudo sobre o assunto ocorreu em 1961 quando muitas aves em especial perus e gansos de criação foram encontradas mortas ou tiveram de ser abatidas por apresentarem sinais e sintomas típicos de toxicoinfecção A partir dessa observação numerosos pesquisadores demonstraram através de diferentes estudos que esses animais haviam sido alimentados com rações contaminadas pelo fungo Aspergillus flavus Os eventos ocorreram em diversas partes do mundo em função da exportação das rações para diferentes portos Logo em seguida descobriuse que o fungo em questão era produtor de uma toxina batizada com o nome de aflatoxina e que se mostrou em ensaios com cobaias de laboratório patos jovens capaz de produzir hiperplasia dos canais biliares e hepatoma 101 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA O gado bovino também se mostrou suscetível à ação da aflatoxina Vacas alimentadas com alimentos contaminados revelaram substâncias tóxicas no leite cujos efeitos no homem não foram ainda bem estudados Alimentos contaminados por diversos aspergilos produziram variadas manifestações patológicas a saber transtornos hepáticos e renais nos bezerros hiperqueratose no gado adulto síndrome hapatohemorrágica em porcos bovinos perus e outros animais A Stachybotryotoxicosis produzida pelo fungo Stachybotrys alternans também é descrita associada à ingestão de grãos mofados por cavalos que ingeriram o alimento contaminado Foi demonstrada a presença de irritação da mucosa oral nasal ou laríngea descamação epitelial adenopatia submaxilar Em alguns casos notouse o agravamento do quadro com febre de 40 a 41 ºC leucopenia progressiva e morte dentro de 1 a 5 dias após grave agranulocitose No homem podem ocorrer eritema axilar faringite leucopenia leve 2000 mm3 A toxina é absorvida pelo tegumento cutâneo ou inalada por manipulação do alimento O ergotismo também é uma manifestação clínica bastante conhecida e provocada pela ingestão de micotoxinas nesse caso associada ao fungo Claviceps purpurea o qual invade o grão de centeio aumenta seu volume transformandoo no que os franceses chamam Ergot esporão do centeio O pão feito com esses grãos contaminados misturados aos sadios provocam desde simples transtornos circulatórios até a gangrena das extremidades Quadros provocados por ingestão acidental de fungos venenosos A ingestão acidental como o próprio nome sugere resulta de um equívoco cometido pela vítima ao ingerir fungos supostamente comestíveis De uma maneira geral os fungos venenosos são muito semelhantes em termos de forma cor e textura aos comestíveis Somente profissionais e pessoas acostumadas com o trato de ambos são capazes de diferenciálos As substâncias tóxicas neles contidas atuam por suas propriedades hemolíticas gastrotóxicas hepatotóxicas nefrotóxicas neurotóxicas e psicotrópicas sendo que alguns fungos podem apresentar uma superposição dessas propriedades o que torna os quadros de infecção potencialmente mais graves Denominase portanto de micetismos os quadros clínicos derivados da ingestão acidental por fungos venenosos e suas repercussões Dessa forma os micetismos são classificados em a saber Micetismo gastrintestinal caracterizado por quadro clínico que envolve a presença de náuseas vômitos diarreia cujos sintomas tendem a ser autolimitados desaparecendo em geral em torno de 48 horas após a ingestão Essa forma de micetismo normalmente está associada a fungos dos gêneros Russula sp Boletus sp Lactarius sp Lepiota sp Enteloma sp Micetismo nervoso caracterizado por uma ação depressiva sobre o coração salivação profusa lacrimejamento cólicas abdominais vômitos diarreia excitação nervosa delírio e coma Os sinais e sintomas normalmente aparecem em média após uma hora da ingestão de diversos fungos Amanita muscaria A pantherina Inocybe infelix I infida Clitocybe illudens A muscarina substância presente nesses casos estimula de forma vigorosa as terminações nervosas mas felizmente seus efeitos podem ser suprimidos pelo emprego de atropina razão pela qual o tratamento desses casos consiste em primeira instância de lavagem gástrica e emprego subsequente desse alcaloide Em pequenas doses a muscarina tem ação semelhante à da Cannabis indica haxixe 102 Unidade II Micetismo cerebral provoca efeitos semelhante com os da psicose mimética em que os indivíduos se identificam com os objetos do meio ambiente ou então com objetos psicodélicos e acabam por despertar o potencial imaginativo latente no indivíduo Podem assim ser encontrados em inúmeros ritos religiosos de diferentes culturas sobretudo indígenas Os sintomas são provocados pela ingestão dos alucinógenos que são por sua vez encontrados em diversos fungos comestíveis tais como Psilocybe mexicana Psilocibina Psilocybe cubensis Psilocina dos gêneros Paneolus e Conocybe O fungo Claviceps purpurea é produtor de inúmeras substâncias com propriedades alucinógenas entre a mais conhecida destacase o LSD 25 Outra substância importante desse grupo é a mescalina extraída de um cacto mexicano Lophophora williamsii Todos esses produtos também são chamados psicomiméticos Micetismo sanguíneo vários fungos podem ser associados aos quadros denominados de micetismo sanguíneo principalmente pela capacidade de muitos produzirem hemolisinas enzimas importantes na fisiopatogenia da infecção mas que felizmente podem ser destruídas pelo calor e pela digestão No entanto como toda regra existe sempre uma exceção Nesse caso tratamos da hemolisina produzida pela Gyromitra esculenta a qual apresentase como uma enzima resistente ao calor e em função de sua ação capaz de produzir hemoglobinúria transitória desconforto abdominal icterícia Em linha geral o prognóstico é bastante favorável mas podem ocorrer óbitos Reações alérgicas Tratase em geral de manifestações do aparelho respiratório como rinites ou asma brônquica produzidas por fungos especialmente quando as pessoas sensíveis vivem em ambiente quente e úmido que favorece sobretudo a formação de bolor Aspergillus sp Alternaria sp Penicillium sp Cladosporium sp Hormodendrum Curvularia sp e outros são geralmente a causa Micoses Os fungos causadores de micoses a seres humanos e animais são classificados como antropofílicos quando causam doença ou o homem é seu hospedeiro zoofílicos quando causam doença ou os animais são seu hospedeiro geofílicos quando o solo é seu hospedeiro e pode ser veiculado através de sua manipulação No entanto alguns fungos podem simultaneamente ser encontrados em humanos e animais e ao mesmo tempo terem seu hábitat no solo Portanto essas características podem se somar a depender de cada agente As micoses humanas e animais são classificadas de acordo com o local onde ocorrem ou seja sítio de infecção a extensão da lesão e a frequência com que possam levar a situações de agravamento As micoses são classificadas em superficiais cutâneas subcutâneas sistêmicas e oportunistas micoses produzidas por fungos habitualmente saprófitos que se tornam parasitas quando se defrontam com hospedeiros imunocomprometidos portadores de doenças graves crônicas ou submetidos a medicação intensiva por antibióticos corticosteroides entre outras 103 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA As micoses recebem a mesma denominação quando são comuns ao homem e a animais como a esporotricose a histoplasmose e as tinhas Já as micoses vegetais apresentam denominações muito peculiares são elas os carvões as ferrugens entre outras Saiba mais Além de os fungos serem importantes como agentes causadores de doença sabese de sua importância peculiar na biotecnologia A biotecnologia consiste no uso de sistemas celulares para o desenvolvimento de processos e produtos de interesse econômico ou social Entre os sistemas celulares os fungos são de grande interesse biotecnológico Talvez sejam eles entre os seres vivos os que mais têm contribuído com produtos e processos de importância fundamental para o bemestar da população Para saber mais sobre a importância dos fungos aplicada à biotecnologia leia SILVA C MALTA D A importância dos fungos na biotecnologia Caderno De Graduação Ciências Biológicas e da Saúde Pernambuco v 2 n 3 p 49 2017 Disponível em httpsbitly3dyBYsz Acesso em 1º jul 2021 52 Características gerais das micoses 521 Micoses superficiais e cutâneas São denominadas de micoses superficiais aquelas que afetam a pele e os anexos cabelos e unhas e as mucosas São as mais frequentes e causadas principalmente por fungos do gênero Malassezia e do grupo dos dermatófitos Entre os agentes mais comumente associados a micoses superficiais destacase a Malassezia furfur uma levedura lipofílica a qual faz parte da microbiota normal da pele especialmente das áreas mais ricas em ácidos graxos como o couro cabeludo Sob determinadas condições esse fungo provoca um quadro de infecção leve e em alguns casos crônica do estrato córneo caracterizada por máculas despigmentadas em tórax abdome e braços A descamação das áreas atingidas é evento comum e a infecção cursa de forma bastante benigna Uma outra infecção fúngica tida como superficial é aquela promovida pela infecção pelo Hortaea werneckii eou Phaeoannellomyces werneckii um fungo demáceo associado a uma micose crônica mais frequente em mulheres É uma infecção fúngica de característica estética ou seja não compromete a vida do paciente É superficial e benigna não contagiosa e apresentase como uma mancha de coloração acastanhada ou marrom escura arredondada não descamativa com bordas delimitadas podendo apresentar discreta elevação Não há resposta inflamatória associada e o paciente portanto não refere dor edema ou outro sinal típico desse processo 104 Unidade II As onicomicoses conhecidas como micoses de unhas são as mais comuns entre as micoses cutâneas e embora ocorram em qualquer região do mundo afetando aproximadamente 25 da população a maioria dos casos é registrada em regiões tropicais Entre os dermatófitos causadores de micoses cutâneas destacamse Trichophyton rubrum e Trichophyton interdigitale anteriormente conhecido como Trichophyton mentagrophytes leveduras do gênero Candida e alguns fungos filamentosos não dermatófitos principalmente envolvidos em casos de onicomicose como Fusarium spp Neoscytalidium anteriormente denominado Scytalidium dimidiatum Aspergillus spp Penicillium spp Scopulariopsis spp e Acremonium spp estes últimos costumam ser resistentes aos tratamentos com antifúngicos sistêmicos e responsáveis portanto por grande número de falhas terapêuticas Também se destacam como agentes causadores de micoses cutâneas e causadores de dermatomicoses os fungos do gênero Microsporum spp com duas principais espécies sendo elas M canis e M gypseum O Microsporum canis é reconhecidamente um dermatófito zoofílico transmitido ao homem por animais domésticos associado clinicamente a epidermofitíases e em algumas situações a onicomicoses micose de unha além de infecções do couro cabeludo caracterizadas por placas de alopecia As lesões típicas da infecção por M gypseum ocorrem preferencialmente em partes descobertas do corpo e raramente parasitam o cabelo O T rubrum é um fungo antropofílico cosmopolita e um dos agentes mais comuns causadores de dermatofitoses no Brasil e no mundo Tem predileção por infectar pelos unhas e a pele O Trichophyton interdigitale é considerado por muitos autores como a segunda ou terceira causa de dermatofitose sendo classificado como um agente zoofílico e antropofílico causador de epidermofitíases onicomicoses lesões de couro cabeludo e lesões interdigitoplantares Outro fungo causador de micoses cutâneas responsável por um grande número de infecções é o E floccosum configurandose como um agente exclusivo de infecções cutâneas denominadas de pele glabra É reconhecidamente um dermatófito antropofílico e inúmeros autores o apontam como a quarta ou quinta causa de epidermofitíases de grandes pregas no mundo Saiba mais As infecções fúngicas superficiais dos cabelos pele e unhas representam uma causa importante de morbidade no mundo O tratamento nem sempre é simples havendo dificuldade na escolha dos esquemas terapêuticos Leia DIAS M et al Atualização terapêutica das micoses superficiais artigo de revisão parte I An bras dermatol v 88 n 5 out 2013 Disponível em httpsbitly3hrFara Acesso em 1º jul 2021 105 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA 522 Micoses subcutâneas As micoses subcutâneas envolvem principalmente a pele e o tecido subcutâneo A infecção pode se tornar ainda mais grave sobretudo em situações de imunossupressão que acabam por envolver a disseminação do fungo A maior incidência de infecções subcutâneas ocorre em regiões tropicais destacandose entre elas a esporotricose causada por espécies do complexo Sporothrix schenckii cromoblastomicose causada por vários agentes demáceos como Fonsecaea pedrosoi Phialophora verrucosa e Cladophialophora carrionii eumicetomas causados por uma variedade de fungos filamentosos sendo Madurella mycetomatis Madurella grisea Pseudallescheria boydii e Leptosphaeria senegalensis responsáveis por aproximadamente 90 dos casos e lobomicose causada por Lacazia loboi são as micoses subcutâneas mais importantes Saiba mais A esporotricose é um problema de saúde pública uma vez que afeta também o homem principalmente em áreas endêmicas No Brasil sabese que a doença não tratada nos animais tem relevante participação na sua disseminação Por essa razão é de extrema importância que haja conhecimento da importância dessa micose Leia CAVALCANTI E et al Esporotricose revisão Pubvet v 12 n 11 p 133 2018 Disponível em httpsbitly3AgjQgJ Acesso em 1º jul 2021 523 Micoses sistêmicas As micoses sistêmicas configuramse como um grupo de infecções fúngicas que em sua maioria ou são de evolução muito rápida ou ainda assintomática São raras as situações em cronificação no entanto naqueles em que ocorre como doença crônica a principal característica observada é a formação de uma doença com característica granulomatosa Outra característica bastante comum aos fungos causadores de micoses sistêmicas é o dimorfismo térmico ou seja capacidade de alterarem a sua forma de acordo com a temperatura Ao serem cultivados em temperatura ambiente apresentamse em colônias filamentosas formadas por hifas e conídios e a 3536 C como colônias leveduriformes Fatores como clima características do solo geralmente o solo fofo presença de animais especialmente aves morcegos e eventualmente silvestres como macacos e tatus favorecem a manutenção dos agentes em nosso meio Outros fatores como ser do sexo masculino e atividades profissionais específicas também parece colaborar para a transmissão 106 Unidade II Entre os agentes mais importantes causadores de micoses sistêmicas destacamse Paracoccidioides brasiliensis Histoplasma capsulatum Coccidioides immitis e Blastomyces dermatitidis A Paracoccidioidomicose doença causada pela infecção por Paracoccidioides brasiliensis é uma micose de início pulmonar rápido porém pode provocar manifestações na pele mucosas e gânglios É uma doença que epidemiologicamente estabeleceuse de forma predominante na América Latina sobretudo no Brasil concentrando um maior número de casos na região Sudeste SP A grande maioria dos casos ocorre em indivíduos do sexo masculino normalmente lavradores com idade variando entre 30 e 60 anos Aparentemente o fungo encontrase no ambiente principalmente no solo e na vegetação também tendo sido isolado em animais silvestres como tatus e macacos e em seus respectivos ambientes O mecanismo de transmissão e penetração no organismo se dá por meio das vias respiratórias A Paracoccidioidomicose pode ocorrer de duas formas distintas descritas como paracoccidioidomicoseinfecção não seguida de doença caracterizada por manifestações compatíveis com os mecanismos de hipersensibilidade do tipo IV presença de anticorpos transitórios e rápida regressão ou paracoccidioidomicosedoença uma infecção primária ou reativação na qual as leveduras iniciam um processo inflamatório inespecífico e quando fagocitadas atingem os gânglios linfáticos e do pulmão podendo se disseminar O paciente pode apresentar diferentes quadros de sinais e sintomas como lesões cutâneas granulosas lesões ulcerativas e fibrose em língua linfadenopatia ulceração nasal e lesões ulcerovegetantes quando da forma crônica da doença Figura 56 Ilustração comparando os aspectos morfológicos de P brasiliensis cultivado em caldo BHI a 37C note o aspecto de roda de leme A histoplasmose é a doença fúngica cujo agente etiológico é o Histoplasma capsulatum O fungo tem como hábitat natural o solo fofo de cavernas galinheiros e próximo ao tronco de árvores Prefere os ambientes cujo pH tende a ser mais ácido e rico em material orgânico como nas fezes de aves e morcegos Preferencialmente estabelecese em ambientes de clima tropical e temperado No Brasil a região da Serra do Mar abriga o maior número de casos 107 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA As manifestações primárias da infecção ocorrem nos pulmões pela inalação de conídios mesmo em indivíduos imunocompetentes podendo disseminarse por via hematogênica ou linfática No desenvolvimento da infecção conídios são fagocitados nos alvéolos pulmonares e entram em multiplicação causando o que chamamos de pneumonite focal O fungo alcança os linfonodos alveolares complexo pulmonar ganglionar primário e a disseminação ocorre por via linfohematogênica As manifestações clínicas variam desde formas assintomáticas a quadros de histoplasmose aguda histoplasmose disseminada e histoplasmose pulmonar Os quadros clínicos da forma disseminada são as lesões ulcerativas em dedos língua e região perianal assim como linfonodos fistulados com pus Saiba mais A histoplasmose é micose sistêmica causada por Histoplasma capsulatum A infecção humana ocorre pela inalação de microconídeos encontrados em solo contendo excretas de aves eou morcegos e representa um potencial de risco sobretudo aos profissionais cujas atividades profissionais são praticadas em cavernas ou demais locais que possibilitam sua transmissão Leia VICENTINI A Histoplasmose um risco ocupacional entre pesquisadores que realizam trabalho de campo Rev Inst Adolfo Lutz v 71 n 4 2012 Disponível em httpsbitly3ydQL3L Acesso em 1º jul 2021 524 Micoses oportunistas Entre as infecções oportunistas destacamos as infecções causadas por leveduras sendo que as principais leveduras patogênicas são aquelas pertencentes aos gêneros Candida e Cryptococcus Dentro do gênero Candida um número significativo de espécies patogênicas tem sido descrito apesar de a grande maioria fazer parte da microbiota da mucosa e poder ser encontrada temporariamente na pele Em contraste as espécies de Cryptococcus spp são leveduras ambientais e a infecção ocorre por meio da inalação O espectro da candidíase infecção causada por leveduras do gênero Candida spp é amplo e varia de infecções superficiais orofaríngea vaginal e cutânea a formas mais graves como nos casos de candidíase sistêmica também conhecidas como candidemia A candidíase orofaríngea afeta o palato duro e mole a faringe a língua e a mucosa oral Geralmente é um dos primeiros sinais clínicos de infecção por HIV A candidíase vulvovaginal é uma das doenças fúngicas mais comuns e estimase que cerca de 75 das mulheres terão pelo menos um episódio durante a vida 108 Unidade II O aumento na incidência de infecções por Candida sp tem sido associado ao uso de antibióticos de amplo espectro e aumento de pacientes imunocomprometidos As infecções mais disseminadas e invasivas 70 a 90 são causadas por leveduras do gênero Candida sp estabelecendo uma mortalidade associada de cerca de 40 a 50 dependendo da população afetada e das espécies envolvidas O complexo Candida albicans Candida albicans Candida dubliniensis e Candida africana é sobre aspectos epidemiológicos mundiais o de maior importância clínica por ser a mais frequentemente isolada nos casos de candidíase As infecções tendem a ser geralmente superficiais não letais com exceção de pacientes imunocomprometidos cuja disseminação está associada à alta taxa de mortalidade Os fatores de risco mais importantes para candidíase disseminada são alterações na mucosa gastrointestinal presença de catéteres venosos e o uso de antibióticos de amplo espectro Nos últimos anos as espécies não albicans de Candida aumentaram sua incidência significativamente e são responsáveis por aproximadamente 50 de todos os episódios de candidemia tornando claramente importante um processo adequado de identificação para diagnóstico e tratamento correto Entre essas espécies estão principalmente as do complexo Candida glabrata Candida nivariensis e Candida bracarensis e aquelas do complexo Candida parapsilosis Candida parapsilosis Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis e em menor proporção Candida tropicalis e Candida krusei Embora a maioria dessas leveduras tendam a ser menos virulentas do que as do complexo Candida albicans algumas são mais resistentes a um ou mais antifúngicos ou têm tendência a desenvolvêla rapidamente Outro grupo extremamente importante de leveduras são aquelas do gênero Cryptococcus sp os quais são os agentes etiológicos da criptococose uma infecção de distribuição mundial adquirida pela inalação de basidiósporos do fungo presentes no meio ambiente As espécies mais frequentes são Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii as quais diferem entre si sob aspectos epidemiológicos e quadro clínico característico O hábitat natural do Cryptococcus neoformans é o solo ou matéria orgânica contaminada com fezes ou guano de ave enquanto que o Cryptococcus gattii é encontrado associado a troncos de árvores de eucalipto A infecção pelo Cryptococcus neoformans afeta especialmente indivíduos imunocomprometidos e a infecção por Cryptococcus gattii é mais comum em indivíduos imunocompetentes O principal quadro clínico associado aos fungos do gênero Cryptococcus sp são as meningites que precisam ser identificadas e tratadas rapidamente para uma melhor evolução clínica do quadro Leveduras menos frequentes como Rhodotorula spp Pichia spp e Saccharomyces cerevisiae assim como fungos semelhantes a leveduras como Geotrichum capitatum e Trichosporon spp também têm impacto na saúde humana e embora a percentagem de casos de infecção invasiva não seja muito elevada são a segunda ou terceira causa de fungemia depois daquela produzida por Candida spp sobretudo em pacientes leucêmicos nos quais a taxa de mortalidade varia entre 60 e 80 109 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Entre os fungos filamentosos aqueles dos gêneros Aspergillus Fusarium Scedosporium Penicillium e alguns da ordem Mucorales Rhizopus oryzae Mucor circinelloides Rhizomucor pusillus e Lichtheimia anteriormente Absidia corymbifera são uma causa importante de infecções em humanos principalmente do tipo invasivo que embora sejam menos frequentes em relação aos produzidos devido à levedura a mortalidade associada é geralmente maior A aspergilose corresponde à infecção causada pelas espécies do gênero Aspergillus e os quadros clínicos variam desde condições alérgicas como aspergilose broncopulmonar alérgica ABPA ou aspergilomas crescimento do fungo dentro de uma cavidade préexistente a formas mais graves como infecção pulmonar ou aspergilose invasiva O Aspergillus fumigatus é agente causal de aproximadamente 90 dos casos Outras espécies como Aspergillus terreus Aspergillus flavus Aspergillus nidulans Aspergillus niger e Aspergillus lentulus vêm mostrando um aumento de incidência em pacientes com fatores predisponentes Infecções causadas por Fusarium spp e Scedosporium spp são menos frequentes que as causadas por Aspergillus spp mas tendem a ser mais graves devido ao tipo de pacientes que afetam e a multirresistência aos antifúngicos disponíveis Algumas espécies do gênero Fusarium sp causam infecções leves como onicomicose que podem afetar qualquer indivíduo ou complicações graves e disseminadas que ocorrem em pacientes com distúrbios hematológicos recebendo terapia citotóxica para tratamento de câncer ou transplantados sob tratamento com corticosteroides Algumas espécies da ordem Mucorales representam outro grupo de agentes de importância clínica devido à alta mortalidade a que eles estão associados sobretudo em pacientes com fatores predisponentes como leucemia neutropenia e monocitopenia em tratamento com altas doses de corticosteroides e pacientes com hiperglicemia não controlada diabetes entre outros Saiba mais A candidíase oral é uma das doenças oportunistas mais fortemente associadas à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana HIV Vários relatos epidemiológicos enfatizam a prevalência da candidíase em pacientes HIV positivos e ressaltam a sua importância como marcador da progressão da doença e preditivo para o aumento da imunodepressão Para saber mais sobre a candidíase como prognóstico na infecção pelo HIV leia CAVASSANI V Candidíase oral como marcador de prognóstico em pacientes portadores do HIV Rev Bras Otorrinolaringol v 68 n 5 out 2002 Disponível em httpsbitly3ha9Lus Acesso em 1º jul 2021 110 Unidade II 53 Aspectos gerais do diagnóstico micológico De modo geral o diagnóstico em micologia é direcionado de forma específica e a depender do agente etiológico veiculado ao processo de infecção Para infecções provocadas por fungos leveduriformes filamentosos e ou dimórficos existem métodos específicos que serão abordados posteriormente mas de uma forma geral o diagnóstico dos diferentes tipos de micose ocorre por meio das metodologias listadas a seguir e resumidamente comentadas exame direto cultura e isolamento biópsia histopatologia provas imunológicas exame radiológico inoculação animal Exame direto Para realização de exame direto pode ser feito por meio de qualquer espécie de material biológico suspeito como exsudatos diversos escarros urina fezes sangue liquor medula óssea fragmentados de tecidos A potassa é usada em percentagens diversas de acordo com o material a ser examinado podendo variar de 20 a 40 dependendo também da dureza do material clínico O exame pode ser a fresco sem fixação entre lâmina e lamínula ou fixado e corado por método como Gram Ziehl Giemsa e tinta da China por exemplo no caso de unha em que podem também ser adicionados corantes como tintas Parker em partes iguais o que serve para evidenciar melhor hifas e conídios dos dermatófitos A coloração pelo método de Giemsa consiste resumidamente nas etapas descritas a seguir I Fixar o material com álcool metílico II Cobrir o esfregaço com o corante de Giemsa preparar na hora uma mistura com 1 ou 2 gotas da solução estoque do Giemsa para uma gota de água destilada 20 a 30 minutos III Secar ao ar ou sob o calor da estufa e examinar diretamente sob lente de imersão homogênea e montar previamente em bálsamo do Canadá 111 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Figura 57 Levedura em Brotamento indicada pela seta corada por Giemsa Disponível em httpsbitly3ht7cSW Acesso em 1º jul 2021 Adaptada A seguir são evidenciados preparados examinados sem coloração que acabam por se destacar contra o fundo preto dado pela tinta nanquim É possível por técnica microscópica visualizar detalhes da estrutura interna dos fungos Em vários fungos podese observar a penetração das partículas de carbono coloidal na cápsula Lembrete O exame direto pode ser feito a partir de uma infinidade de materiais como unha fio de cabelo barba escamas de pele etc Lembrese de que cada material deve ser colhido de maneira apropriada para uma análise correta Figura 58 Leveduras em destaque pela coloração de fundo da tinta nanquim tinta da China Note na seta halo de carbono coloidal Disponível em httpsbitly3ydTQAR Acesso em 1º jul 2021 Adaptada 112 Unidade II Cultura e isolamento do material biológico Muitos meios de cultura são utilizados em micologia a depender do material biológico colhido Entre os mais utilizados destacase o ágar Sabouraud Esse meio serve praticamente para o isolamento de todos os fungos Comercialmente também existem inúmeros meios Difco BBL Oxoid Merck a maioria contendo antibióticos em sua formulação a fim de evitar contaminação por agentes bacterianos tornandoos mais seletivos como Mycobiotic Difco e Mycosel Baltimore Biological Co Os meios de ágar sangue e de ágar chocolate muito utilizados em bacteriologia clínica também podem vir a ser utilizados quando pretendemos estimular o crescimento de fungos leveduriformes patogênicos a 37 ºC Uma estratégia bastante utilizada é a de se acrescentar ao meio de ágar Sabouraud sangue de carneiro tornandoo ainda mais rico e complexo podendo tornálo também seletivo à medida que pode ser adicionado agente antibacteriano Outro meio bastante utilizado em seu estado líquido e que contribui de maneira especial ao processo de proliferação e enriquecimento do espécime clínico é o caldo de infusão de coração e cérebro conhecido com ágar BHI brainheartinfusion O ágar batata dextrose é um meio tradicionalmente utilizado para o isolamento de fungos e leveduras O pH desse meio o torna seletivo para impedir o crescimento da maioria dos microrganismos de flora acompanhante e permitem o crescimento do fungo pesquisado Biópsia e histopatologia Para o estudo histopatológico de fungos sobretudo responsáveis por micoses subcutâneas são utilizadas diversas técnicas e métodos de coloração entre as quais destacamse o PAS ácido periódico de Schiff Figura 59 Levedura em brotamento indicada pela seta corada por PAS Disponível em httpsbitly3w7JyRj Acesso em 1º jul 2021 Adaptada 113 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA A reação histoquímica do ácido periódico e reativo de Schiff para grupos açúcar demonstra o corpo celular do fungo em cor magenta forte e a cápsula polissacarídica em róseo Realça os parasitas contra o tecido de fundo Células em reprodução como na imagem anterior também são evidenciadas com facilidade A contracoloração com hematoxilina e eosina HE permite situar os fungos em relação às células e tecidos É útil por exemplo para destacar os parasitas contra o tecido necrótico em que não se visualizam núcleos Na figura a seguir identificamos o Paracoccidioides brasiliensis em sua típica formação de roda de leme corado pela técnica de HE Figura 60 P brasiliensis em roda de leme corado por HE Disponível em httpsbitly3htt00M Acesso em 1º jul 2021 O método de Gram é aplicado aos cortes histopatológicos para o estudo das doenças produzidas pelos Actinomicetos Os Actinomicetos e as bactérias Grampositivas coramse em azul e as bactérias Gramnegativas em vermelho Figura 61 Actinomicetos corados pela técnica de Gram Fungos filamentosos cordões típicos de Actinomyces sp Adaptada de Zhaklina 2010 114 Unidade II Lembrete O método de coloração não é o preconizado para diagnóstico de infecções fúngicas mas pode ser uma alternativa fácil barata e eficaz de promover a visualização das principais estruturas fúngicas auxiliando no diagnóstico Provas imunológicas no diagnóstico das infecções fúngicas As provas imunológicas em micologia médica apresentam um valor diagnóstico apenas relativo não dispensados os métodos clássicos que visam o achado do parasito seja pelo exame direto bem como pela análise histopatológica seja pelo seu isolamento em cultura Entretanto com os progressos recentes nesse setor esse valor relativo pode em certos casos subir tanto a ponto de quase equivaler ao achado do parasito Em pelo menos duas eventualidades clínicas isso ocorre Referimonos aos casos de aspergilose pulmonar ou cerebral por Aspergillus fumigatus diagnosticados pelas provas sorológicas de precipitação Em micologia médica além de serem métodos auxiliares de diagnósticos das micoses as técnicas imunológicas têm ainda as seguintes aplicações inquéritos epidemiológicos prognóstico controle de eficiência terapêutica descoberta de animais reservatórios de parasitos classificação de espécies baseada na constituição antigênica de parede celular O diagnóstico micológico baseiase em dois grandes grupos de provas Provas intradérmicas de sensibilidade cutânea frente a antígenos fúngicos tricofitina candidina paracoccidioidina esporotriquina histoplasmina coccidioidina e outros Dois tipos de reações são esperados quando de uma reação intradérmica a antígenos fúngicos e tais reações podem ser denominadas de imediata urticariforme e retardada Reação imediata urticariforme manifestação notada logo após a inoculação subcutânea do antígeno teste com manifestação de pápula dérmica com pseudópodes e halo eritematoso Desaparece em algumas horas é própria dos fungos puramente alérgenos do ar como Cladosporium sp Hormodendrum Aspergillus sp Penicillium sp leveduras Pullularia sp Alternaria sp Helminthosporium sp Fusarium sp e muitos outros Reação retardada semelhante à da prova pela tuberculina em que se nota o aparecimento de pápula dérmica entre 48 e 72 horas após a inoculação Tal pápula normalmente é acompanhada de um halo eritematoso o qual tende a perdurar por período que varia de uma semana ou mais Reações falsonegativas podem ocorrer caso o paciente queira a fim de minimizar o desconforto gerado pelo estímulo antigênico utilizar corticosteroides e antihistamínicos os quais podem impedir a positividade das reações 115 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Um outro cuidado importante a fim de se evitarem respostas hiperresponsivas é o emprego do antígeno diluído suficientemente para pesquisar a sensibilidade do paciente Por exemplo começar com uma diluição de 11000 passando depois para 1500 e 1100 Provas sorológicas de aglutinação precipitação fixação do complemento e imunofluorescência Tais técnicas serão discutidas adiante 6 TÉCNICAS E PROTOCOLOS PARA ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS LEVEDURIFORMES E FILAMENTOSOS 61 Identificação de fungos leveduriformes Prova do tubo germinativo A prova do tubo germinativo é um teste para caracterização e confirmação de leveduras do gênero Candida spp sobretudo da espécie C albicans A técnica baseiase fundamentalmente na semeadura de um pequeno inóculo dessa levedura em soro preferencialmente humano de coelho ou de cavalo Com uma alça de platina calibrada para um volume de 0001 ml retirar uma pequena porção de uma colônia de levedura suspeita e homogeneizála de forma asséptica em 05 ml de soro Incubar a 37 C por 2 horas em banhomaria ou por ao menos 3 horas em estufa bacteriológica Após esse período devese remover uma gota da suspensão e preparar uma lâmina recoberta com lamínula para observação em microscópio óptico comum O tubo germinativo quando o teste for positivo aparecerá como filamento fino e cilíndrico originado do blastoconídio da levedura no qual não se observa nenhuma zona de constrição quer na base ou ao longo de sua extensão Figura 62 Levedura apresentando tubo germinativo indicando a presença de Candida albicans Observação Para a realização da técnica do tubo germinativo o material utilizado no caso soro humano ou de animais não pode conter resquícios de antimicrobianos a fim de evitar a geração de resultados falsonegativos 116 Unidade II Microcultivo de leveduras Algumas leveduras quando incubadas em meio com Tween80 um detergente apresentam a capacidade de filamentar formando pseudohifas eou hifas verdadeiras e é com base nesse princípio que essa técnica se fundamenta A identificação do fungo ocorre pelas características morfológicas apresentadas pelas estruturas filamentosas formadas assim podese sugerir a espécie de levedura implicada na identificação Para a realização da técnica devese preparar um meio denominado de ágar fubá e espalhar por sobre uma lâmina de vidro cerca de 3 ml do meio de ágar ainda quente com uma pipeta estéril Esperar resfriar e solidificar e com uma alça de platina selecionar de duas a três colônias da levedura isolada e semear em estria no ágar fubá conforme esquema a seguir Após o procedimento cobrir o material com lamínula estéril aguardar de 2 a 3 dias mantendo o material a temperatura de 25 C e observar em microscopia a formação de estruturas filamentosas como pseudohifas ou hifas verdadeiras Assimilação de fontes de carboidratos e nitrogênio auxanograma Essa técnica baseiase na capacidade que as leveduras apresentam de usar o carboidrato como fonte de carbono Para a realização dessa técnica utilizase de um meio básico desprovido de qualquer fonte de carbono sem o qual ela não consegue sobreviver no qual a levedura será semeada pretendendo avaliar a partir de qual carboidrato ela conseguirá obter sua fonte de carbono Após a semeadura adicionamse ao cultivo diferentes carboidratos e observase a capacidade de utilização deles como fonte de energia Quando o carboidrato é assimilado pela levedura observase crescimento dela ao redor da fonte de carbono formando um halo ou zona Para a realização da técnica utilizase de meio básico específico conhecido pelo nome de o yeast nitrogen base de acordo com as normas preconizadas pelo fabricante Simultaneamente preparase uma suspensão de leveduras com turvação 5 da escala de McFarland Utilizase uma alíquota de 1 ml da suspensão de leveduras depositandoa em uma placa de petri estéril sobre a qual irá se inverter cerca de 20 ml de meio ao que consideramos uma semeadura em profundidade ou pourplate Aguardase a solidificação do meio e adicionamse pequenas quantidades de açúcares em posições previamente demarcadas preparar um gabarito para facilitar a colocação dos açucares incubar as placas a 30 C por 2448 horas Observar a formação de halos identificados como regiões opalescentes ao redor dos açúcares SAC LAC GLI MAN Figura 63 Imagem esquemática de auxanograma 117 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Prova de fermentação de açucares zimograma Para o zimograma diversas fontes de carboidratos são colocadas em tubos respectivos contendo meio básico líquido A levedura é semeada em cada tubo e após período de até 15 dias a 25 C a fermentação é revelada por formação de bolhas de gás observadas dentro de tubos de Durhan colocados previamente durante a preparação do meio básico Alteração da tonalidade do meio Tubo de Durhan Bolhas de gás Figura 64 Ilustração representando a prova de Zimograma Prova da urease Prova que avalia a produção de enzima urease por algumas espécies de levedura Nessa prova a produção de enzima urease converte a ureia do meio de ágar ureia de Christensen em amônia alcalinizandoo e alterando o seu pH Pela presença do indicador vermelho de fenol o meio altera sua cor de laranja para rosa o que revela um teste positivo Métodos comerciais para identificação de leveduras Em se tratando de espécies de Candida o mercado já dispõe de kits manuais como API 20C AUX bioMérieux ID 32C bioMérieux Candifast e metodologia semiautomatizada como os cartões de identificação de fungos Vitek bioMérieux Observação A identificação de leveduras por meio dos métodos e técnicas propostos pode ser realizada a partir de diferentes amostras clínicas desde material de lesão superficial como onicomicoses a material biológico como sangue Exemplo de aplicação Reflita sobre como o reconhecimento dos diferentes métodos e testes aplicados no diagnóstico de infecções fúngicas sobretudo por leveduras pode permitir ao profissional amplo domínio das técnicas e capacidade de adaptação dos testes e métodos às possibilidades do atendimento em sua unidade de diagnóstico 118 Unidade II Colônia de levedura suspeita Tubo germinativo Positivo Candida albicans Reação positiva Rhodotorula spp Positiva Cryptococcus spp Negativo Reação negativa Negativa Prova da tinta da China Auxanograma e zimograma Prova da urease Figura 65 Fluxograma simplificado para identificação de fungos leveduriformes Quadro 11 Identificação de levedura patogênicas Levedura UR Microcultivo Auxanograma Zimograma Hifa Sa Ma La Ce Tr Ra X In Gl Sa Ma La Ra Tr C albicans V C tropicalis V V C parapsilosis V V C krusei C guilliermondii V C glabrata C neoformans Geotrichum V Trichosporon V V Saccharomyces V 62 Identificação de fungos filamentosos Técnica de esgarçamento A técnica é utilizada como primeira tentativa considerada a mais rápida para identificação de fungos filamentosos No entanto durante o procedimento podese quebrar as estruturas fúngicas tornando o processo de identificação mais difícil o que pode requerer técnicas auxiliares para diagnóstico como a técnica de microcultivo em lâmina 119 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Para realizar o procedimento devese utilizar da alça de platina em L remover um pedaço da colônia de bolor a ser investigada e transferir para uma lâmina e vidro Adicionar de uma a duas gotas de corante azul de algodão lactofenol cobrir com lamínula e fazer a observação em microscópio óptico comum em objetiva de 40 vezes Técnica do microcultivo em lâmina A vantagem da técnica é que as estruturas fúngicas permanecem íntegras além da formação de macro e microconídeos pelo uso de ágar batata Para tal devese preparar um kit estéril contendo uma placa de Petri com duas lâminas no interior Após o preparo do ágar batata seguindo as instruções do fabricante devese cortar com auxílio de lâmina de bisturi estéril um quadro pequeno o qual será colocado por sobre a placa em que será realizado o microcultivo Com a alça em L devese retirar uma parte do fungo crescido em colônia e aplicar nos quatro lados do quadrado de ágar batata Na sequência devese cobrir esse quadrado com lamínula estéril e adicionar um chumaço de algodão ou papel de filtro embebido em água destilada estéril para criar o que denominamos de câmara úmida Manter o sistema a temperatura ambiente por período variando entre 1015 dias Transcorrido o tempo retirar a lamínula com pinça estéril e fixar o fungo na lamínula colocando uma a duas gotas de álcool e esperar secar Montar essa lamínula em lâmina limpa com uma gota de lactofenol azul algodão A lamínula pode ser vedada com esmalte de unha ou Entellan para melhor conservação da amostra e análises futuras Colônias do fungo 4 extremidades do ágar ágar batata Lamínula Lâmina Placa de Petri Figura 66 Imagem representativa da montagem e execução da técnica de microcultivo 63 Métodos moleculares e alternativos para identificação de fungos patogênicos Entre as várias técnicas moleculares utilizadas na identificação de fungos são descritas de forma mais usual polimorfismo de comprimento de fragmento de DNA RFLP eletroforese enzimática multilocus MLEE hibridização com sondas marcadas Southern blot e a reação em cadeia da polimerase PCR e suas modificações para a amplificação de diferentes fragmentos de DNA específicos 120 Unidade II A técnica de MaldiTOF matrixassisted laser desorption muito utilizada no diagnóstico de infecções bacterianas como já citado anteriormente vem sendo cada vez mais utilizada na identificação de fungos a partir de isolados clínicos e de culturas Faremos uma breve referência às técnicas moleculares a seguir mais usadas no diagnóstico micológico como aquelas baseados no formato de PCR e a tecnologia MaldiTOF A aplicação dessas técnicas a patologias causadas por fungos ainda está em um estágio inicial devido a algumas peculiaridades nesse campo em especial no caso de dermatomicoses Apesar de estar entre os organismos com maior frequência registrada na biomedicina ainda não foi estabelecida uma taxonomia que permita identificar e nomear as aproximadamente 25 espécies patogênicas envolvidas Por fim e não menos importante a utilização de meios cromogênicos para as principais espécies de Candida sobretudo albicans também vem trazendo grande contribuição Quindos et al desde 1997 em seu estudo avaliaram a capacidade de bichrolátex albicans para identificar Candida albicans em isolados clínicos e os resultados apontaram para uma sensibilidade de 9974 e uma especificidade de 9987 difundindo portanto o conhecimento e provando a eficácia do método nos ensaios e estudos clínicos Observação O conhecimento microscópico das principais estruturas sobretudo de conídios e hifas relacionadas a fungos filamentosos é um diferencial importante ao profissional na área de microbiologia em especial micologia visto que o diagnóstico microscópico desses agentes é o principal método empregado Resumo Viuse a importância dos fungos sobretudo no que tange à saúde humana Conseguimos compreender que tais agentes são responsáveis por doenças importantes conhecidas como micoses e que elas podem ser classificadas de acordo com o sítio de infecção e gravidade da lesão em micoses superficiais cutâneas subcutâneas sistêmicas e oportunistas Também aprendeuse a reconhecer os principais métodos diagnósticos aplicados na avaliação de infecções por fungos leveduriformes eou filamentosos de importância clínica Soubemos de métodos moleculares alternativos sobretudo de biologia molecular os quais estão sendo empregados no diagnóstico de infecções fúngicas 121 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA Exercícios Questão 1 Leia o texto a seguir A própolis foi descrita por sua capacidade inibitória da multiplicação de bactérias Grampositivas não possuindo potencialmente a mesma intensidade nas bactérias Gramnegativas provavelmente devido à complexidade química de sua parede celular BARREIRAS D G et al Eficácia da ação antimicrobiana do extrato de própolis de abelha jataí Tetragonisca angustula em bactérias Grampositivas e Gramnegativas Caderno de Ciências Agrárias 12 15 2020 Disponível em httpsbitly3ybn1Va Acesso em 19 jun 2021 Com base na leitura e nos seus conhecimentos avalie as afirmativas e a relação proposta entre elas I Existem diversos métodos destinados ao diagnóstico de infecções por fungos sendo que a técnica de Gram não é uma delas porque II Essa é uma técnica que só funciona para infecções bacterianas já que apenas elas têm a composição química mureína ou ácidos graxos da parede celular necessária para reagir aos corantes Assinale a alternativa correta A As afirmativas I e II são proposições verdadeiras e a II justifica a I B As afirmativas I e II são proposições verdadeiras e a II não justifica a I C A afirmativa I é uma proposição verdadeira e a II é uma proposição falsa D A afirmativa I é uma proposição falsa e a II é uma proposição verdadeira E As afirmativas I e II são proposições falsas Resposta correta alternativa E Análise das afirmativas I Afirmativa falsa Justificativa de fato existem diversos métodos que podem ser usados no diagnóstico de infecções fúngicas Entre eles podemos citar por exemplo o exame direto a cultura e o isolamento as provas 122 Unidade II imunológicas o exame radiológico e a inoculação animal Adicionalmente outro método a ser mencionado é a histopatologia em que pode ser aplicada a técnica de Gram em casos de infecções por fungos Actinomicetos já que eles se coram da mesma maneira que as bactérias Grampositivas II Afirmativa falsa Justificativa a informação de que esse tipo de coloração só funciona para bactérias é falsa visto que o corante irá produzir o mesmo efeito nos microrganismos que têm a composição da parede celular semelhante Nesse caso os fungos Actinomicetos e as bactérias Grampositivas parede celular composta por mureína coramse em azul e as bactérias Gramnegativas parede celular composta por ácidos graxos em vermelho Questão 2 Leia os textos a seguir Texto 1 Procedimentos microbiológicos As hemoculturas positivas foram detectadas pelo sistema automatizado BactAlert Organon Teknica USA e a identificação foi feita pelo sistema automatizado WalkAway até 2002 posteriormente a esse ano pelo bioMérieux Vitek France sendo realizados conjuntamente procedimentos clássicos como a auxanograma e o tubo germinativo FRANÇA J C B RIBEIRO C E L QUEIROZTELLES F D Candidemia em um hospital terciário brasileiro incidência frequência das diferentes espécies fatores de risco e suscetibilidade aos antifúngicos Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 411 2328 2008 Disponível em httpsbitly3yse61Z Acesso em 20 jun 2021 Texto 2 Este estudo foi do tipo descritivo retrospectivo baseado em resultados positivos de hemocultura de pacientes internados na UTI entre dezembro de 1998 e outubro de 2006 Foi critério de inclusão a cepa de Candida spp estocada no Laboratório de Micologia do HUUFMS Os dados demográficos e clínicos foram consultados nos prontuários e posteriormente analisados no programa Epi info CDC versão 3302 juntamente com os resultados laboratoriais A coleta para hemocultura foi feita de sangue periférico A detecção das leveduras foi feita pelo sistema BACTEC Becton Dickinson e a identificação das espécies foi feita por meio de metodologia convencional pesquisa do tubo germinativo auxanograma e microcultivo XAVIER P C N et al Candidemia neonatal em hospital público do Mato Grosso do Sul Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 415 459463 2008 Disponível em httpsbitly3qDKPym Acesso em 21 jun 2021 Texto 3 Após a identificação do gênero as leveduras foram identificadas bioquimicamente por auxanograma zimograma crescimento a 37 ºC e repicadas em ágar níger guizotia abyssinica e CGB Foram isoladas 37 leveduras das quais 22 são da espécie C neoformans 4 de C gattii 5 123 MICROBIOLOGIA E MICOLOGIA CLÍNICA de C albidus 3 de C uniguttulatus e 3 da espécie C laurentii A determinação dos genótipos foi realizada utilizandose a técnica de PCRRFLP do gene URA5 e foram verificados os perfis moleculares VNI 538 VNIII 115 VNIV 192 VGII 77 VGIII 38 e VGIV 38 SOUZA J A M D O Variabilidade genética de Cryptococcus ambientais na cidade do SalvadorBA Dissertação de Mestrado 2018 Disponível em httpsbitly3jyGYBf Acesso em 21 jun 2021 Com as informações apresentadas é possível compreender que a técnica do auxanograma é um procedimento frequente na identificação microbiológica A respeito da técnica do auxanograma avalie as alternativas e assinale a correta A Nessa técnica utilizase uma lâmina de vidro com meio de ágar fubá sobre o qual são semeadas duas ou três colônias da levedura em estria B Em tubos de ensaio são colocadas diferentes fontes de carboidratos em meio de cultura básico líquido A semeadura da levedura ocorre em cada um dos tubos que são mantidos em condições controladas até 15 dias a 25 C A fermentação pode ser identificada pela formação de bolhas C Nessa técnica é avaliada a produção de urease pelas leveduras o que acarreta a transformação da ureia que está no meio de cultura ágar ureia de Christensen em amônia D Nessa técnica é realizada a semeadura da levedura em soro preferencialmente humano de coelho ou de cavalo Feito isso devemos fazer a incubação em banhomaria ou em estufa bacteriológica por algumas horas e depois realizar a observação em microscópio óptico comum E Tratase de uma técnica que se baseia na capacidade de utilização de fontes de carbono pelas leveduras Para isso é utilizado um meio básico sem qualquer fonte de carbono Após a semeadura da levedura são adicionados diferentes carboidratos Resposta correta alternativa E Análise das alternativas A Alternativa incorreta Justificativa a descrição corresponde à técnica do microcultivo de leveduras que pretende observar em microscopia a formação de estruturas filamentosas como pseudohifas ou hifas verdadeiras B Alternativa incorreta Justificativa a descrição corresponde à técnica denominada prova de fermentação de açúcares ou zimograma realizada em tubos de ensaio com meio de cultura líquido ao qual são misturadas fontes de diferentes carboidratos que são fermentados pelas leveduras o que leva à formação de bolhas 124 Unidade II C Alternativa incorreta Justificativa a própria descrição já é indicativa da técnica denominada prova da urease pela qual uma alteração de pH no meio de cultura usado indica a degradação da ureia pela mudança de cor D Alternativa incorreta Justificativa a descrição referese à técnica da prova do tubo germinativo na qual se espera observar o crescimento dos tubos germinativos das leveduras após mantêlas incubadas em condições controladas E Alternativa correta Justificativa de fato essa é descrição associada ao auxanograma ou assimilação de fontes de carboidratos e nitrogênio Como o nome sugere são usados meios de cultura sem nutrientes e após a semeadura são adicionados diferentes carboidratos Pretendese observar a capacidade de utilização desses carboidratos como fonte de carbono pelo crescimento das bactérias ao redor dessas fontes o que leva à formação de um halo